基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究血府逐瘀湯治療中晚期氣滯血瘀型肺癌的作用機(jī)制

徐 旭，侯恩存，熊佳惠，趙藝蔓

1 廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530000；2 廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院

近年來，肺癌發(fā)病人數(shù)逐年增高，已成為當(dāng)今人類所面臨的腫瘤疾病的首要組成部分［1-2］。目前認(rèn)為腫瘤的發(fā)病機(jī)制是由多種因素影響激活原癌基因?qū)е录?xì)胞癌變。分子生物學(xué)研究表明［3-5］，腫瘤的發(fā)病與表觀遺傳、miRNA、lncRNA 等密切相關(guān)。而且不同肺癌患者在治療時(shí)常存在特異性。因此，腫瘤基因、靶點(diǎn)、信號(hào)通路的研究能對(duì)其發(fā)病機(jī)制、疾病預(yù)防、藥物治療起促進(jìn)作用。

血府逐瘀湯是王清任《醫(yī)林改錯(cuò)》中五逐瘀湯中的一首方劑，由桃仁、紅花、當(dāng)歸、生地黃、牛膝、川芎、桔梗、赤芍、枳殼、甘草、柴胡等11 味藥組成。主要用于冠心病、心肌梗死、腦梗死、高血壓等心血管疾病和骨折、軟組織損傷及多種手術(shù)術(shù)后治療等，起活血化瘀，行氣止痛作用。彭濤等［6］對(duì)90 例肺癌中晚期患者進(jìn)行隨機(jī)對(duì)照研究發(fā)現(xiàn)血府逐瘀湯能夠有效改善中晚期肺癌患者血液高凝狀態(tài)，預(yù)防靜脈血栓形成。丁志山等［7］通過牛內(nèi)皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明血府逐瘀湯通過抑制血管生成起抗腫瘤作用。本研究首次采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法整合血府逐瘀湯中多種藥物蛋白作用網(wǎng)絡(luò)與肺癌網(wǎng)絡(luò)，從蛋白、基因角度揭示血府逐瘀湯治療肺癌的相關(guān)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)庫中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(tái)(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform，TCMSP，http：//lsp.nwsuaf.edu.cn/index.php）；Batman數(shù)據(jù)庫（a Bioinformatics Analysis Tool for Molecular Mechanism of Traditional Chinese Medicine，http：//www.batman.com）；PharmMapper Server 數(shù)據(jù)庫（http：//pharmmapper/index.php）；String 數(shù)據(jù)庫（http：//www.String-db.org/）；Drugbank 數(shù)據(jù)庫（https：//www.Drugbank.ca/）；GAD數(shù)據(jù)庫（Genetic Association Database，http：//geneticassociationdb.Nih.gov）；在線孟德爾人類遺傳數(shù)據(jù)庫（online mendelian inheritance in man，OMIM，http：//www.omim.org）；CTD 數(shù)據(jù)庫（Comparative Toxicogenomics Database，http：//ctd.mdibl.org/）；GeneCard數(shù)據(jù)庫（http：//www.genecards.org/）；DAVID 數(shù)據(jù)庫（https：//david-d.ncifcrf.gov/home.jsp）；KEGG 數(shù)據(jù)庫（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，http：//www.kegg.com）；KOBAS 數(shù)據(jù)庫（http：//kobas.cbi.pku.Edu.cn/download.php）；Metascape 數(shù)據(jù)庫（http：//www.matascape.com/）

1.2 血府逐瘀湯有效成分和核對(duì)采用TCMSP數(shù)據(jù)庫及Batman 數(shù)據(jù)庫收集血府逐瘀湯方劑中柴胡、生地黃、赤芍、川芎等11 味中藥的化學(xué)成分。因血府逐瘀湯通常采用口服用藥，因此以口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%，藥物相似性（drug-likeness，DL）≥0.18 為限定條件對(duì)所收集到的化學(xué)成分進(jìn)行篩選［8］。篩選出血府逐瘀湯的活性成分并下載保存為Mol2 格式，結(jié)合DrugBank 數(shù)據(jù)庫檢索化合物的詳細(xì)信息并進(jìn)行確認(rèn)核對(duì)，最后得到血府逐瘀湯的有效成分。

1.3 血府逐瘀湯化學(xué)成分靶點(diǎn)預(yù)測(cè)將初步篩選出的活性成分進(jìn)行文獻(xiàn)檢索，將Mol2 格式的全部文件上傳至Pharmmapper服務(wù)器［9］，并設(shè)定返回標(biāo)準(zhǔn)。將得到的返回靶點(diǎn)結(jié)果在Uniprot數(shù)據(jù)庫、String數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行核對(duì)，選擇物種為人類（Homo.sapiens），蛋白質(zhì)ID轉(zhuǎn)化為基因名稱（Gene Symbol）并剔除不規(guī)范、非特定指代命名靶點(diǎn)，以確保靶點(diǎn)的可獲得蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖，并將相關(guān)數(shù)據(jù)保存為TSV格式。將TSV格式文件導(dǎo)入Cytoscape 3.6.1軟件，并設(shè)計(jì)圖形參數(shù)，進(jìn)行分析。其中節(jié)點(diǎn)表示成分和靶點(diǎn)，邊表示成分與靶點(diǎn)之間的相互作用，進(jìn)一步設(shè)置節(jié)點(diǎn)大小與顏色反映Degree 值大小，邊的粗細(xì)反映Combined score 大小，最終獲得蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)。

1.4 肺癌相關(guān)靶點(diǎn)獲取從OMIM 數(shù)據(jù)庫［10］、GAD數(shù)據(jù)庫［11］、CTD 數(shù)據(jù)庫［12］中獲得肺癌相關(guān)靶點(diǎn)，以肺癌為關(guān)鍵詞進(jìn)行搜索，獲得與肺癌相關(guān)的靶點(diǎn)，并將3個(gè)數(shù)據(jù)庫得到的靶點(diǎn)進(jìn)行對(duì)比篩選。

1.5 血府逐瘀湯和肺癌相關(guān)靶點(diǎn)分析將血府逐瘀湯化學(xué)成分靶點(diǎn)與肺癌靶點(diǎn)進(jìn)行核查比對(duì)，利用Venny分析工具，比對(duì)分析兩組靶點(diǎn)。將靶點(diǎn)導(dǎo)入Metascape數(shù)據(jù)庫，設(shè)置物種為人類（sapiens），得到相關(guān)數(shù)據(jù)和PPI圖。

1.6 血府逐瘀湯治療肺癌預(yù)測(cè)靶標(biāo)富集分析將血府逐瘀湯潛在靶點(diǎn)上傳到David 數(shù)據(jù)庫。依次勾 選OFFICIAL GENE SYMBOL、Genelist、Submit list，修改背景為人類（Homo.sapiens），再分別勾選生物過程（biological process，BP）、分子功能（cellular component，CC）、細(xì)胞成分（molecular function，MF）。選擇生物使用KOBAS 數(shù)據(jù)庫和metascape 數(shù)據(jù)庫對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行生物途徑富集分析。通過KEGG 數(shù)據(jù)庫查找富集出的生物通路圖，并利用metascape數(shù)據(jù)庫將得到的KEGG生物途徑結(jié)果制作成條形圖。

2 結(jié)果

2.1 有效成分篩選通過TCMSP 數(shù)據(jù)庫搜集到226 個(gè)化合物，其中柴胡17 個(gè)，赤芍29 個(gè)，川芎7個(gè)，當(dāng)歸2個(gè)，甘草92個(gè)，紅花22個(gè)，桔梗7個(gè)，牛膝20 個(gè)，地黃2 個(gè)，桃仁23 個(gè)，枳殼5 個(gè)。其中包括共有化合物11 個(gè)：赤芍、當(dāng)歸、紅花、牛膝、桃仁、枳殼的共有化合物為β-谷固醇，柴胡、赤芍、當(dāng)歸、紅花、牛膝、生地黃的共有化合物為豆固醇，柴胡、甘草、紅花、牛膝的共有化合物為槲皮素，赤芍、川芎、甘草、生地黃的共有化合物為谷固醇，柴胡、甘草、紅花、牛膝的共有化合物為山柰酚，柴胡、赤芍、紅花、牛膝的共有化合物為黃芩苷，赤芍、紅花、牛膝的共有化合物為黃芩素，赤芍、桔梗、牛膝的共有化合物為菠固醇，紅花、桔梗的共有化合物為木犀草素，柴胡、甘草的共有化合物為異鼠李素，甘草、枳殼的共有化合物為柚皮素。OB值排名前50的化合物見表1。

表1 血府逐瘀湯有效成分（前50名）

續(xù)表1

2.2 血府逐瘀湯化學(xué)成分潛在靶點(diǎn)預(yù)測(cè)及相互作用將得到的各Mol2 結(jié)果上傳至PharmMapper數(shù)據(jù)庫，返回的潛在預(yù)測(cè)靶點(diǎn)共2394 個(gè)，對(duì)潛在靶點(diǎn)在DrugBank 數(shù)據(jù)庫中篩選和進(jìn)行去除重復(fù)后得到290 個(gè)蛋白，并在Uniprot 數(shù)據(jù)庫、String數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行核對(duì)后剔除非人類和不規(guī)范、非特定指代命名以及重復(fù)的靶點(diǎn)后，共得到262 個(gè)靶點(diǎn)，其中不同顏色的節(jié)點(diǎn)代表不同的靶點(diǎn)，共得到262 個(gè)靶點(diǎn)，邊線代表兩個(gè)靶點(diǎn)間的相互關(guān)系，邊線越多，關(guān)聯(lián)的靶點(diǎn)越多，共計(jì)2112 條。平均節(jié)點(diǎn)為16.1，平均局部聚類系數(shù)為0.464。見圖1。

圖1 血府逐瘀湯化學(xué)成分潛在靶點(diǎn)預(yù)測(cè)及相互作用PPI圖

2.3 肺癌相關(guān)靶點(diǎn)獲取從OMIM數(shù)據(jù)庫、GAD數(shù)據(jù)庫、CTD 數(shù)據(jù)庫中分別獲得肺癌相關(guān)靶點(diǎn)共126820 個(gè)，篩選去重后得到37774個(gè)不重復(fù)靶點(diǎn)，包括血清α-1-B 糖蛋白（A1BG）、α-2-巨球蛋白（A2M）、n-乙酰轉(zhuǎn)移酶1（NAT1）、n-乙酰轉(zhuǎn)移酶2（NAT2）、芳基乙酰胺脫乙酰酶（AADAC）等，部分靶點(diǎn)見表2。

表2 肺癌相關(guān)部分靶點(diǎn)

續(xù)表2

2.4 血府逐瘀湯與肺癌蛋白互作血府逐瘀湯靶點(diǎn)與肺癌相關(guān)靶點(diǎn)相互交集的韋恩圖表明有258個(gè)共有靶點(diǎn)。見圖2。

圖2 血府逐瘀湯靶點(diǎn)與肺癌相關(guān)靶點(diǎn)相互交集韋恩圖

2.5 血府逐瘀湯治療肺癌的靶點(diǎn)和通路GO 富集將共有靶點(diǎn)258 個(gè)輸入DAVID、Metascape、KOBAS 網(wǎng)站進(jìn)行基因本體論功能富集分析（gene ontology，GO），得到2833 個(gè)BP，1521 個(gè)細(xì)胞組成CC，2886個(gè)分子功能MF。綜合P值較高的靶點(diǎn)包括TP53、Bcl-2、Akt1、EGFR、RELA、PTGS2 等。BP、CC、MF的P值前20的靶點(diǎn)見圖3—5。

圖3 血府逐瘀湯治療肺癌的靶點(diǎn)和通路GO富集（BP，P值前20）

圖4 血府逐瘀湯治療肺癌的靶點(diǎn)和通路GO富集（CC，P值前20）

圖5 血府逐瘀湯治療肺癌的靶點(diǎn)和通路GO富集（MF，P值前20）

將KEGG 富集分析（kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）、Gene Pathway、CORUM結(jié)果綜合后發(fā)現(xiàn)所有靶點(diǎn)共有通路1893 條，其中以Log10（P值）最大的20 個(gè)通路形成條形。見圖6、表3。

表3 部分共有靶點(diǎn)通路

圖6 Log10（P值）最大的20個(gè)通路條形圖

結(jié)合Metascape 形成對(duì)應(yīng)的富集，見圖7，其中同種顏色的節(jié)點(diǎn)代表在同一個(gè)信號(hào)通路上的靶點(diǎn)，相應(yīng)P值對(duì)應(yīng)分布圖見圖8，節(jié)點(diǎn)顏色變化代表P值變化。

圖7 結(jié)合Metascape形成的對(duì)應(yīng)富集圖

圖8 同種顏色的節(jié)點(diǎn)代表在同一個(gè)信號(hào)通路上的靶點(diǎn)及相應(yīng)P值對(duì)應(yīng)分布

結(jié)合MCODE 插件得到血府逐瘀湯和肺癌共同靶點(diǎn)的模塊化分析見圖9—11。圖9 為所有模塊的集成圖像，不同顏色代表不同的模塊。圖10 是部分靶點(diǎn)組合的8 種模塊的細(xì)節(jié)結(jié)構(gòu)圖。對(duì)每個(gè)MCODE模塊通過GO分析，保留其中前3個(gè)最佳P值項(xiàng)，得到表4 結(jié)果。其中MCODE7 靶點(diǎn)聚類后模塊由sod1、pygm、akr1c1 靶點(diǎn)構(gòu)成，三者沒有共同通路。將各聚類模塊進(jìn)行匯總分析得出P值最高的3條通路：（hsa05200Pathways in cancer）Log10（P）=-56.5；hsa05161（Hepatitis B）Log10（P）=-55.8；hsa05215（Prostate cancer）Log10（P）=-38.6。對(duì)所有信號(hào)通路進(jìn)行匯總分析得出P值最高的3條：hsa05200（Pathways in cancer）Log10（P）=-61.3；R-HSA-6785807（Interleukin-4 and Interleukin-13 signaling）Log10（P）=-52.0；GO：0010035（response to inorganic substance）Log10（P）=-49.7。總結(jié)P值較高的通路包括hsa05200：Pathways in cancer；R-HSA-6783783：Interleukin-4 and Interleukin-13 signaling）；GO：0010035（response to inorganic substance）等通路。總之，血府逐瘀湯中多個(gè)活性成分可能通過(tumor portein p53，TP53)、B 淋巴細(xì)胞瘤2(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)、表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（serine/threonine protein kinase，Akt1）等靶點(diǎn)通過hsa05200、R-HSA-6783783、GO：0010035 等的多種信號(hào)通路起治療肺癌的作用。

表4 模塊中P值排在前三的通路

圖9 血府逐瘀湯和肺癌共同靶點(diǎn)的模塊集成圖

圖10 部分靶點(diǎn)組合的8種模塊的細(xì)節(jié)結(jié)構(gòu)圖

3 討論

肺癌屬中醫(yī)學(xué)“肺積”“胸痛”“咯血”“咳嗽”等范疇，《素問·奇病論篇》《靈樞·邪氣臟腑病形》《難經(jīng)》中均有類似記載，《傷寒論》《金匱要略》中提出了最早的治療方法。現(xiàn)代中醫(yī)將肺癌多歸于體虛導(dǎo)致氣滯、血瘀、痰凝、毒聚入內(nèi)致病。其治則也因不同醫(yī)家不同辨證而不同，主要為補(bǔ)氣滋陰、活血化瘀、健脾化痰等，其中劉嘉湘教授［13］提出“扶正治癌”法；蔡小平教授［14］提出“瘀陽論、瘀陰論”，并總結(jié)出解毒散結(jié)方；馬純政教授［15］認(rèn)為肺癌多由痰濕所致，主張行氣化痰，調(diào)理脾腎；徐景毅教授［16］強(qiáng)調(diào)扶正與驅(qū)邪共進(jìn)，再因人施治。王淑美等［17］通過評(píng)估名家醫(yī)方、孫婕怡［18］通過近30 年中醫(yī)相關(guān)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果看出活血化瘀是治療肺癌的重要方法之一。血府逐瘀湯是治療氣滯血瘀型肺癌的代表方劑。

血府逐瘀湯的抗癌機(jī)制相關(guān)研究較少。部分藥理學(xué)及臨床研究表明血府逐瘀湯有一定的抗腫瘤作用。葉向榮等［19］通過觀察腹水型肝癌（H22）淋巴管轉(zhuǎn)移小鼠發(fā)現(xiàn)血府逐瘀湯能有效抑制癌細(xì)胞淋巴管轉(zhuǎn)移。董強(qiáng)等［20］對(duì)80 例中晚期小細(xì)胞肺癌患者給與EP 方案+血府逐瘀湯的隨機(jī)對(duì)照研究，結(jié)果表明血府逐瘀湯可改善患者血液高凝狀態(tài)，增強(qiáng)化療藥物的療效。

3.1 血府逐瘀湯有效化合物分析本研究共得到226個(gè)化合物，其中包括11個(gè)共有化合物［β-谷固醇、豆固醇、槲皮素、谷固醇、山柰酚、黃芩苷、黃芩素、菠固醇、木犀草素、異鼠李素。對(duì)比孫明謙等［21］采用多級(jí)離子阱質(zhì)譜儀對(duì)血府逐瘀湯中的化合物進(jìn)行質(zhì)譜和碎片離子的解析結(jié)果，尹愛武等［22］利用色譜學(xué)對(duì)血府逐瘀湯進(jìn)行系統(tǒng)分離，并對(duì)得到的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，發(fā)現(xiàn)血府逐瘀湯制劑未有新化合物產(chǎn)生。β-谷固醇作為一種廣泛存在于多種植物的化合物。有研究表明，β-谷固醇能誘導(dǎo)乳腺癌、結(jié)腸癌、宮頸癌和前列腺癌細(xì)胞DNA發(fā)生細(xì)胞凋亡，起抗增殖作用［23-24］。有研究表明，β-谷固醇能抑制a549細(xì)胞生長，并通過ROS介導(dǎo)的線粒體失調(diào)引發(fā)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡，而不損害肺和PBMC 細(xì)胞［25］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，豆固醇有明確的抗皮膚癌作用并能通過抑制腫瘤血管生成抑制膽管癌生長［26-28］；槲皮素已經(jīng)被較多實(shí)驗(yàn)證實(shí)能抑制肺癌細(xì)胞生長［29-31］，并且已經(jīng)被用于肺癌的靶向藥物研發(fā)［32］。

在血府逐瘀湯所有化合物中桃仁、甘草所含化合物OB 較高，在前50 中占62%。桃仁中的赤霉素在血府逐瘀湯所有化合物中有101.61%的OB。赤霉素是植物生長過程的重要激素。GA-13315作為一種赤霉素的衍生物能對(duì)肺腺癌起較好的抗腫瘤作用，并能部分通過阻礙ABCB1的外排功能而使多藥耐藥細(xì)胞變得敏感［33-34］。甘草的化合物DL普遍較高，其中最高的是甘草中的Shinpterocarpin。甘草作為中藥方中常見藥物，通常在全方中作為佐使藥，起到引經(jīng)、補(bǔ)益和調(diào)和諸藥的作用。目前已知的甘草成分超過280 種，主要有黃酮類、三萜皂苷類、生物堿類、甘草葡聚糖類等成分，其中部分已經(jīng)被證實(shí)對(duì)肺癌有積極作用。CHANGLIANG CHEN 等［35］通過各種甘草成分對(duì)非小細(xì)胞肺癌的H1299、A549、H1975 和H2228 細(xì)胞進(jìn)行Transwell和創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)，證明異甘草素能有效抑制肺癌細(xì)胞遷移和生長。CHENYU QIU 等［36］對(duì)非小細(xì)胞肺癌A549 和H460 細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Licochalcone A（LicA）能通過誘導(dǎo)G2/M 細(xì)胞周期阻滯和雌激素受體應(yīng)激抑制肺癌細(xì)胞的增殖。SO YOUNG PARK 等［37］將18β-GA 作用于NCI-H23、NCIH460、A549 和16HBE-T 細(xì)胞，結(jié)果表明18β-GA 可能通過抑制血栓素的作用抑制肺癌細(xì)胞增殖。綜上可知，血府逐瘀湯中成分復(fù)雜多樣，部分化合物如β-谷固醇、赤霉素、甘草素可通過抑制癌細(xì)胞增殖、遷移等作用治療肺癌，但也有部分化合物（如Shinpterocarpin）缺乏相關(guān)實(shí)驗(yàn)證明其作用。而針對(duì)血府逐瘀湯成方成分的相關(guān)研究較少，不排除有新化合物生成而未被發(fā)現(xiàn)的可能，希望有更多新技術(shù)應(yīng)用于相關(guān)研究。

3.2 血府逐瘀湯和肺癌共同靶點(diǎn)分析本研究共得到血府逐瘀湯和肺癌共有靶點(diǎn)258 個(gè)，占血府逐瘀湯有效靶點(diǎn)的98.47%，占肺癌靶點(diǎn)的0.7%，說明血府逐瘀湯有相當(dāng)多的靶點(diǎn)可作用于肺癌，證明血府逐瘀湯可以直接對(duì)肺癌起作用。

將靶點(diǎn)經(jīng)過DAVID、Metascape、KOBAS 等多個(gè)數(shù)據(jù)庫綜合分析發(fā)現(xiàn)，其中P值較高、關(guān)系密切的靶點(diǎn)包括：TP53、Bcl-2、Akt1。隨著基因測(cè)序的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和基因密切相關(guān)。TP53作為一種抑癌基因，對(duì)包括肺癌、食道癌、直腸癌、宮頸癌在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞生長、衰老、凋亡起重要作用。其致癌原因主要是結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的改變，可與其他致癌蛋白（例如Ets2、AMPK）或腫瘤抑制蛋白（例如TP63、TP73）結(jié)合。目前已知TP53有18個(gè)外顯子，而且存在較高的突變率。但是也有較多研究證實(shí)，TP53 作為癌基因的同時(shí)也有抑癌基因作用［36-40］。TP53 突變（MUTP53）結(jié)構(gòu)的差異性將影響不同腫瘤類型的發(fā)展［41］，通過MUTP53 和EGFR突變可以更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后［42］。有研究指出TP53 和家族性腫瘤突變密切相關(guān)［43］。MUTP53 和吸煙相關(guān)，并能增加吸煙后患肺癌的幾率［44］。TP53 不僅為靶向治療和免疫治療的重要靶點(diǎn)，還能調(diào)節(jié)部分藥物如順鉑的化療反應(yīng)［45］。

Bcl-2 是可以影響癌細(xì)胞凋亡的重要基因。Bcl-2 家族中的Bad、Bim、Bax 等基因具有促凋亡作用，而Bcl-2、Bcl-XL 和Mcl-1 等基因有拮抗凋亡的作用。有研究指出，Bcl-2 家族的基因單核苷酸多態(tài)性不僅影響小細(xì)胞肺癌的易感性，也與非小細(xì)胞肺癌鉑類藥物化療結(jié)果相關(guān)［46-47］。血府逐瘀湯是通過Bcl-2 靶點(diǎn)拮抗肺癌細(xì)胞凋亡，還是抑制Bcl-2 基因的達(dá)到抗腫瘤作用，有待進(jìn)一步研究。

Akt家族包括Akt1、Akt2和Akt3，在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、增殖、轉(zhuǎn)移方面有突出作用。一般認(rèn)為，Akt1影響了胃腸道腫瘤細(xì)胞，Akt2作用于乳腺、卵巢等方面。但有新研究發(fā)現(xiàn)［48］，Akt1 的抑制促進(jìn)了KRAS 或表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)突變的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞小鼠的腦轉(zhuǎn)移程度。CHUNLING ZHANG 等［49］通過對(duì)不同患者的肺癌樣本中的PICART1 的研究發(fā)現(xiàn)高表達(dá)的PICART1 能通過AKT 信號(hào)通路抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生長和侵襲，并誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯在G2/M期。血府逐瘀湯可以通過AKT調(diào)節(jié)肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移作用。

綜上所述，血府逐瘀湯可能通過TP53 抑制肺癌細(xì)胞的生長、衰老、凋亡，通過Bcl-2 靶點(diǎn)調(diào)節(jié)肺癌細(xì)胞凋亡，通過AKT調(diào)節(jié)肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。

3.3 血府逐瘀湯和肺癌共同信號(hào)通路分析血府逐瘀湯和肺癌共同通路中P值較高的有：腫瘤通路（hsa05200：Pathways in cancer）、白細(xì)胞介素4(interleukin-4，IL-4)和白細(xì)胞介素13(interleukin-13，IL-13)信號(hào)傳導(dǎo)（R-HSA-6783783：Interleukin-4 and Interleukin-13 signaling）、信號(hào)傳導(dǎo)（R-HSA-162582：Signal Transduction）、免疫系統(tǒng)（R-HSA-168256：Immune System）、白細(xì)胞介素的信號(hào)傳遞（R-HSA-449147：Signaling by Interleukins）、免疫系統(tǒng)中的細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)（R-HSA-1280215：Cytokine Signaling in Immune system）等血府逐瘀湯和肺癌相對(duì)重要通路。hsa05200代謝圖包含了CASP3、HER-2、Bcl-2、STAT3、p53 等眾多基因和較多通路，如：cAMP 通路、VEGF 通路、MAPK 通路、PI3K-Akt 通路、PPAR 通路等。MAPK 通路是信號(hào)從細(xì)胞表面?zhèn)鲗?dǎo)到細(xì)胞核內(nèi)部的重要路徑。中間包括MAPK激酶激酶（MAP kinase kinase kinase，MKKK）、MAPK 激酶（MAP kinase kinase，MKK）和絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）3 種激酶。有研究發(fā)現(xiàn)，醛固酮、TUC338、fascin-1、Epigallocatechin-3-Gallate 均能通過MAPK 通路調(diào)節(jié)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞［50-53］。這些研究涉及的激素、非編碼核糖核酸、蛋白不僅幫助我們更好地了解MAPK 通路作用機(jī)制，也為相關(guān)藥物研發(fā)打好基礎(chǔ)。也有研究指出，環(huán)腺苷酸（camp）信號(hào)是抗腫瘤治療的重要靶點(diǎn)［54-55］。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)通路已經(jīng)成為治療肺癌的重要方式，目前抗VEGF藥物貝伐珠單抗被NCCN 指南推薦為治療肺癌的一線藥物。比較VEGF的作用，可以看出血府逐瘀湯在促進(jìn)血管生長的同時(shí)有抑制血管生長的作用［56］。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)證實(shí)血府逐瘀湯可以通過TP53、Bcl-2、EGFR、akt1 等靶點(diǎn)及通過hsa05200、R-HSA-6783783、R-HSA-162582、R-HSA-168256、R-HSA-449147 中 的cAMP、VEGF、MAPK、PI3K-Akt、PPAR 等多種信號(hào)通路達(dá)到抑制腫瘤生長、凋亡、轉(zhuǎn)移的作用來治療中晚期氣滯血瘀型肺癌。但還存在相關(guān)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)缺乏、檢索數(shù)據(jù)庫較少、數(shù)據(jù)庫所收文獻(xiàn)不全面、相關(guān)化合物和靶點(diǎn)未被數(shù)據(jù)庫收錄等不足。血府逐瘀湯對(duì)肺癌的作用復(fù)雜，需要有更多的相關(guān)研究和臨床試驗(yàn)來驗(yàn)證其作用機(jī)制。充分利用血府逐瘀湯對(duì)中晚期氣滯血瘀型肺癌的作用特點(diǎn)來擴(kuò)展血府逐瘀湯的治療范圍和研發(fā)更適合中晚期氣滯血瘀型肺癌治療的藥物。