QuEChERS-UPLC-MS-MS快速檢測(cè)大米中氟啶胺

氟啶胺（Fluazinam）是1988年由日本石原株式會(huì)社中央研究所開(kāi)發(fā)的吡啶胺衍生物，二硝基苯胺類有機(jī)物廣譜殺菌劑（結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1），是一種線粒體氧化磷酰化解偶聯(lián)劑，能夠抑制孢子萌發(fā)、菌絲生長(zhǎng)和孢子形成[1]，對(duì)交鏈孢屬、疫霉屬、單軸霉屬、核盤菌屬和黑星菌屬非常有效，不僅可用于防治草莓灰霉病[2]、花生土傳真菌病害[3]、茉莉白絹病[4]及辣椒[5]、人參[6]及蔥[7]等作物上的病害，同時(shí)還可防治柑橘紅蜘蛛[7]等蟲(chóng)害。在大米的種植過(guò)程中，也會(huì)使用氟啶胺預(yù)防病蟲(chóng)害。

圖1 氟啶胺化學(xué)結(jié)構(gòu)式圖

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

AB4500Q液質(zhì)聯(lián)用儀，配有電噴霧離子源和大氣壓化學(xué)源（美國(guó)AB公司）；CP225D電子天平（賽多利斯）；LD4-2C離心機(jī)（北京京立離心機(jī)有限公司）。

甲醇中氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（含量100 μg·mL-1，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司）；氯化鈉、無(wú)水硫酸鎂（分析純，成都科隆）；乙腈（色譜純，山東大禹）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制

精密吸取氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1.0 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，得到10 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。精密吸取1.0 mL氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液于100 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成100 ng·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液。分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)工作液20 μL、50 μL、100 μL、200 μL、400 μL和800 μL于進(jìn)樣瓶中，空白基質(zhì)定容至1.0 mL，得到濃度為2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、40 ng·mL-1和80 ng·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.2.2 樣品溶液制備

取大米樣品充分粉碎混勻，精密稱取5.0 g，置于50 mL離心管中，加入5 mL超純水，充分混勻，浸泡30 min后加入20 mL乙腈，充分振蕩混勻，超聲提取30 min，加入2.0 g無(wú)水硫酸鎂，0.5 g氯化鈉，渦旋1 min，4 000 r·min-1離心5 min。取上清液2 mL于裝有50 mg PSA、100 mg無(wú)水硫酸鎂的5 mL離心管中，渦旋1 min，5 000 r·min-1離心5 min，取上清液過(guò)濾膜上機(jī)。

1.2.3 液相色譜條件

色譜柱：C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；進(jìn)樣體積：5 μL；流速：1.0 mL·min-1；流動(dòng)相：0.1%甲酸/水（A）和乙腈（B）；梯度洗脫程序：0～5.0 min，95%→5%A，5.1～10.0 min，5%A；10.1～15.0 min，95%A。

1.2.4 質(zhì)譜檢測(cè)條件

離子源：電噴霧離子源（ESI）；采集模式：多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)（MRM），負(fù)離子模式采集；離子源溫度：600 ℃；電噴霧電壓：5 500 V；氣簾氣壓力：35 psi；噴霧氣壓力：60 psi；輔助氣壓力：70 psi；其余質(zhì)譜條件如表1所示。

表1 待測(cè)組分質(zhì)譜條件表

2 結(jié)果與分析

2.1 基質(zhì)效應(yīng)

化學(xué)分析中，基質(zhì)指的是樣品中被分析物以外的組分。基質(zhì)常常對(duì)分析物的分析過(guò)程有顯著的干擾，并影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。本實(shí)驗(yàn)中，大米樣品提取液中非待測(cè)物的離子強(qiáng)度對(duì)分析物活度系數(shù)有影響，這些影響和干擾被稱為基質(zhì)效應(yīng)。目前最常用的去除基質(zhì)效應(yīng)的方法是使標(biāo)準(zhǔn)曲線的基質(zhì)和待測(cè)組分基質(zhì)盡可能保持一致。本實(shí)驗(yàn)采用未含待測(cè)組分的空白大米提取液作為標(biāo)準(zhǔn)工作液的稀釋劑，能有效去除基質(zhì)干擾。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)

本實(shí)驗(yàn)以待測(cè)組分的濃度（X）和色譜峰面積（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得線性回歸方程。標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為2～80 ng·mL-1，相關(guān)系數(shù)R為0.999 7。標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2。

圖2 氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.3 檢出限、定量限

信噪比為3（S/N=3）時(shí)為方法檢出限，信噪比為10（S/N=10）時(shí)為方法定量限。空白基質(zhì)配標(biāo)最低點(diǎn)st1濃度為2 ng·mL-1（譜圖見(jiàn)圖3、圖4），信噪比為S/N=127.6。根據(jù)公式（1）得到方法檢出限為0.009 μg·kg-1，定量限為0.03 μg·kg-1，能滿足檢驗(yàn)要求。

圖3 標(biāo)準(zhǔn)品st1定量離子圖譜

圖4 標(biāo)準(zhǔn)品st1定性離子圖譜

式中：X為方法檢出限，μg·kg-1；S/N為信噪比；C(st1)為st1濃度，ng·mL-1；n為稀釋倍數(shù)；V為定容體積，mL；m為樣品質(zhì)量，g。

2.4 回收率、RSD

選用陰性大米樣品，分別在8 μg·kg-1、40 μg·kg-1、160 μg·kg-1低、中、高3個(gè)加標(biāo)水平，按照1.2.2樣品溶液的制備方法進(jìn)行前處理，高、中、低3個(gè)濃度各6個(gè)平行樣，按照1.2.3、1.2.4檢測(cè)方法進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表2。160 μg·kg-1加標(biāo)回收氟啶胺離子圖譜見(jiàn)圖5、圖6。

圖5 160 μg·kg-1加標(biāo)回收定量離子圖譜

圖6 160 μg·kg-1加標(biāo)回收定性離子圖譜

表2 氟啶胺加標(biāo)回收率和RSD表

3個(gè)加標(biāo)水平的回收率為85.6%～96.4%，RSD為5.9%～7.5%，滿足檢測(cè)需求。在市售大米中，隨機(jī)抽檢10份大米樣品，檢驗(yàn)結(jié)果均為陰性。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)大米中的氟啶胺，在儀器的響應(yīng)值即方法的回收率上都能滿足檢測(cè)需要。在后續(xù)的工作中應(yīng)在此基礎(chǔ)之上進(jìn)行更深入的農(nóng)藥多殘留組分檢測(cè)驗(yàn)證。在樣品前處理上力求以更環(huán)保更高效率更準(zhǔn)確的提取方法開(kāi)展檢測(cè)研究。