細胞質多聚腺苷酸化元件結合蛋白4、缺氧誘導因子-1在腦膠質瘤中的表達及對患者術后復發的預測作用

陳隆，景蕓蕓，鄔迎喜，張蘊澤，薛亞飛

空軍軍醫大學第二附屬醫院神經外科，西安 710038

腦膠質瘤是由于腦部或者髓膠質細胞出現癌變而引發的顱腦原發腫瘤，起源于神經上皮，亦稱之為神經上皮腫瘤，此外，該病大多屬于惡性腫瘤，發病例數占顱腦腫瘤的36%~63%[1-2]。手術為當前治療腦膠質瘤的首選方式，該治療方式可改善患者病情，但術后極易復發，病死率較高，且總生存期相對短，患者預后較差[3]。隨著細胞與生物分子研究的開展，腦膠質瘤發生與轉移的分子機制及腫瘤治療新靶點引起了廣泛關注[4]。細胞質多聚腺苷酸化元件結合蛋白4（cytoplasmic polyad-enylation element binding protein 4，CPEB4）、缺氧誘導因子-1（hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）在腫瘤組織中呈現異常表達，并與多種腫瘤的發生、發展關系密切。基于此，本研究就CPEB4、HIF-1在腦膠質瘤中的表達及對患者術后復發的預測作用進行探討分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年8月至2020年8月于空軍軍醫大學第二附屬醫院行腫瘤切除術的腦膠質瘤患者的病歷資料。納入標準：①經病理檢查確診為腦膠質瘤；②無遠處轉移；③術前未接受相關治療；④臨床資料完整。排除標準：①合并其他惡性腫瘤，器官衰竭嚴重；②合并精神疾病；③存在血液系統病變；④有免疫系統疾病或結締組織病變；⑤有腦膿腫等顱內感染。根據納入、排除標準，共納入149例腦膠質瘤患者，其中，男93例，女56例；年齡27~68歲，平均（46.37±6.42）歲；病理學分級[5]：Ⅰ級29例，Ⅱ級47例，Ⅲ級52例，Ⅳ級21例。收集149例腦膠質瘤患者的腦膠質瘤組織和癌旁正常組織。本研究經醫院倫理委員會批準通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

所有組織于手術切除后即使用10%甲醛固定，組織切片后脫蠟、水化。采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化法檢測CPEB4、HIF-1的表達情況。兔抗人CPEB4多克隆抗體購自美國Sigma公司，鼠抗人HIF-l單克隆抗體購自北京博奧森生物技術有限公司，試劑盒、二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色劑均購自北京中杉金橋生物技術公司，具體方法嚴格按照說明書執行。每批切片均用已知的CPEB4、HIF-1陽性組織切片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）代替一抗作為陰性對照。一抗的稀釋比例皆為1∶200。

根據陽性細胞百分比及染色情況判定CPEB4、HIF-1的表達情況[6-7]。陽性細胞百分比：0分，無陽性細胞；1分，陽性細胞百分比為1%~25%；2分，陽性細胞百分比為26%~50%；3分，陽性細胞百分比＞50%。染色情況：0分，無色；1分，淡黃色；2分，棕黃色；3分，棕褐色。總分為上述兩項評分的乘積，≤3分為陰性表達，≥4分為陽性表達。

1.3 復發評估

經回院復查、電話隨訪等方式了解患者術后復發（以腫瘤生長范圍與術前相比擴大或腫瘤在不同部位出現為復發）情況，時間為1年。

1.4 觀察指標

比較腦膠質瘤組織與癌旁正常組織中CPEB4、HIF-1的表達情況，比較術后復發與未復發腦膠質瘤患者腦膠質瘤組織中CPEB4、HIF-1的表達情況，分析影響腦膠質瘤患者術后復發的獨立危險因素。

1.5 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件進行統計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；影響因素分析采用Logistic回歸分析；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組織中CPEB4、HIF-1表達情況的比較

腦膠質瘤組織中CPEB4、HIF-1陽性表達率均明顯高于癌旁正常組織，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 腦膠質瘤組織和癌旁正常組織中CPEB4、HIF-1表達情況的比較[n（%）]

2.2 術后復發與未復發患者腦膠質瘤組織中CPEB4、HIF-1表達情況的比較

所有患者均成功完成隨訪，其中術后復發患者42例，未復發患者107例。術后復發患者腦膠質瘤組織中CPEB4、HIF-1陽性表達率均高于未復發患者，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表2）

表2 術后復發與未復發腦膠質瘤患者腦膠質瘤組織中CPEB4、HIF-1表達情況的比較[n（%）]

2.3 腦膠質瘤患者術后復發的影響因素分析

Logistic回歸分析顯示，腫瘤直徑≥5 cm、CPEB4陽性表達、HIF-1陽性表達均為腦膠質瘤患者術后復發的獨立危險因素（P＜0.05）。（表3）

表3 腦膠質瘤患者術后復發的影響因素分析

3 討論

腦膠質瘤是由神經外胚葉衍化而來的膠質細胞腫瘤，有著較高的發病率，雖然目前臨床上通過手術能夠取得一定治療效果，但由于腦膠質瘤發病機制復雜，且與正常組織邊界不清晰，難以通過手術根治，患者易出現術后復發[8-9]。因此，對腦膠質瘤的發病機制及靶點進行深入了解具有重要意義。據研究證實，腦膠質瘤的發生、發展是許多蛋白、基因及細胞因子共同作用的結果，因此，探尋腦膠質瘤的分子標志物成為目前治療腦膠質瘤的研究方向[10]。

CPEB4屬于通過控制靶基因的多聚腺苷酸化來調節翻譯過程的PEB家族成員，是具有特異性序列的一類RNA結合蛋白，在多種惡性腫瘤中均有較高表達[11-12]。據相關研究指出，CPEB4與腫瘤細胞中的大部分mRNA相關，包括細胞周期蛋白、遷移基因、信號轉導元件等，與腫瘤發生發展關系密切[13]。本研究結果顯示，腦膠質瘤組織中CPEB4陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，說明CPEB4在正常組織中無表達或者呈低表達，而在腦膠質瘤組織中高表達。進一步對比發現，術后復發患者腦膠質瘤組織中CPEB4陽性表達率明顯高于未復發患者，提示CPEB4的表達在膠質瘤發生、發展過程中有著重要作用。分析其原因可能是由于CPEB4高表達可促進血管新生，使腫瘤細胞侵襲能力增強，同時其還與B細胞淋巴瘤-XL相互協同作用，以調控腫瘤血管新生及上皮-間充質轉化過程，從而造成細胞凋亡受抑制，細胞發生惡變。但其具體效應還有待更深入的研究確認。

相關研究證實，缺氧與腦膠質瘤細胞的生長、侵襲、轉移等生物學過程關系密切，其中HIF-1作為缺氧誘導的關鍵因子，與腫瘤的發生、發展密切相關[14]。本研究結果中，腦膠質瘤組織中HIF-1陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，說明HIF-1在腦膠質瘤組織中呈高表達狀態，這與既往文獻報道結果相一致[15]。同時，本研究結果顯示，術后復發患者腦膠質瘤組織中HIF-1陽性表達率高于未復發患者，說明HIF-1的高表達與患者的預后有關。考慮HIF-1表達增強可能與腫瘤組織缺氧環境或者致癌基因突變、抑癌基因缺失有關，其對腦膠質瘤的診療及預后判斷有一定臨床意義。經Logistic回歸分析得出，腫瘤直徑≥5 cm、CPEB4陽性表達、HIF-1陽性表達均為腦膠質瘤患者術后復發的獨立危險因素，提示臨床治療中需加強對伴隨高危因素患者的干預，在治療后對患者進行針對性的預防有利于改善預后，延長患者生存時間。

綜上所述，CPEB4、HIF-1在腦膠質瘤組織中陽性表達率均明顯增高，是影響腦膠質瘤患者術后復發的危險因素，臨床可通過檢測兩種指標為腦膠質瘤患者的預后評估提供參考。