TILs 在LuminalB 型、Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型乳腺癌中表達(dá)差異及與預(yù)后的關(guān)系

馬曉明 劉斌

1.徐州醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院，江蘇徐州 223001；2.徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤外科，江蘇徐州 221006

乳腺癌是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，隨著對(duì)乳腺癌的深入研究，其分類(lèi)已從形態(tài)學(xué)進(jìn)入分子分型的階段，并用于指導(dǎo)臨床治療[1-3]。但目前現(xiàn)有的分子分型等方法尚無(wú)法完全概括不同類(lèi)型乳腺癌的的預(yù)后特征、臨床治療反應(yīng)性，亟需尋求更多的預(yù)后、療效預(yù)測(cè)指標(biāo)，以用于指導(dǎo)個(gè)體化治療[4]。腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（tumor infiltrating lymphocytes，TILs）為存在于腫瘤癌巢內(nèi)、間質(zhì)中的以淋巴細(xì)胞為主的異質(zhì)性淋巴細(xì)胞群體，不同類(lèi)型乳腺癌腫瘤組織中TILs 水平存在較大差異[5]。乳腺癌組織內(nèi)TILs 比例與乳腺癌患者的預(yù)后相關(guān)[6]。目前臨床對(duì)于TILs 與乳腺癌關(guān)系研究均集中于三陰型、人表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，Her-2）陽(yáng)性[激素受體（hormone receptor，HR）陰性]兩種分子分型的乳腺癌患者[7-8]，對(duì)于LuminalB 型、Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型兩型研究較少。本研究重點(diǎn)探究LuminalB 型、Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型乳腺癌患者原發(fā)灶TILs 的浸潤(rùn)程度及其與預(yù)后關(guān)系，旨為這兩型治療方案的選擇提供思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015 年1 月至2016 年2 月徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院確診并接受乳腺癌手術(shù)治療的59 例LuminalB 型和46 例Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型乳腺癌患者標(biāo)本，并對(duì)所有研究對(duì)象的臨床資料進(jìn)行回顧性分析。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意（批號(hào)：AF-35/06.1）。

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①經(jīng)病理學(xué)診斷為L(zhǎng)uminalB 型或Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型[9]；②女性；③年齡＞18 歲；④術(shù)后配合治療及檢查；⑤臨床資料完整。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①合并其他惡性腫瘤；②雙側(cè)乳腺癌；③術(shù)前接受放療、化療及內(nèi)分泌等有關(guān)治療；④心肝腎等重要臟器功能障礙；⑤妊娠或哺乳期女性；⑥合并精神疾病或認(rèn)知功能障礙；⑦合并免疫系統(tǒng)或血液系統(tǒng)疾??；⑧中途退出或失訪者。

1.2 TILs 測(cè)定方法

所收集的乳腺癌標(biāo)本均用福爾馬林固定，經(jīng)常規(guī)石蠟包埋制成蠟塊，切片后采用蘇木精-伊紅染色方法對(duì)乳腺癌組織進(jìn)行染色，光學(xué)顯微鏡（型號(hào)：BTM-23R，上海巴拓儀器有限公司）下評(píng)估TILs 浸潤(rùn)水平。判定標(biāo)準(zhǔn)TILs 的判定標(biāo)準(zhǔn)[10]：TILs 的浸潤(rùn)水平＜10%為無(wú)浸潤(rùn)或低浸潤(rùn)，10%～39%為中等浸潤(rùn)，＞39%為高浸潤(rùn)；并依據(jù)浸潤(rùn)程度分為T(mén)ILs 低/中等浸潤(rùn)、TILs 高浸潤(rùn)。

1.3 預(yù)后隨訪

隨訪5 年，采用電話(huà)、門(mén)診等方式對(duì)LuminalB型、Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型乳腺癌患者進(jìn)行隨訪，隨訪截至2021 年10 月31 日，統(tǒng)計(jì)患者復(fù)發(fā)情況；并依據(jù)患者術(shù)后是否復(fù)發(fā)分為復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組。

1.4 資料收集

收集影響LuminalB 型、Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型乳腺癌患者預(yù)后的臨床資料，主要包括年齡、體重指數(shù)（body mass index，BMI）、腫瘤大小、腫瘤分期、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雌激素受體（estrogen receptor，ER）表達(dá)、孕激素受體（progesterone receptor，PR）表達(dá)、是否絕經(jīng)、Ki67 表達(dá)及TILs 浸潤(rùn)程度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料例數(shù)和百分比，比較采用χ2檢驗(yàn)。兩計(jì)數(shù)資料相關(guān)性采用列聯(lián)相關(guān)性分析。繪制Kaplan-Meier復(fù)發(fā)曲線(xiàn)。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 LuminalB 型、Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）乳腺癌患者TILs 的浸潤(rùn)水平

LuminalB 型、Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型乳腺癌患者TILs 的浸潤(rùn)水平分別為（39.74±4.85）%、（35.21±4.06）%，Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型乳腺癌患者TILs 的浸潤(rùn)水平低于LuminalB 型（t=5.093，P ＜0.001）。

2.2 TILs 與LuminalB 型乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系

LuminalB 型乳腺癌復(fù)發(fā)組腫瘤分期為T(mén)3～T4期占比、TILs 低/中等浸潤(rùn)占比均高于未復(fù)發(fā)組（P ＜0.05）；經(jīng)列聯(lián)相關(guān)性分析，LuminalB 型乳腺癌復(fù)發(fā)情況與腫瘤分期、TILs 浸潤(rùn)程度存在關(guān)聯(lián)；TILs 浸潤(rùn)程度為低/中等浸潤(rùn)的LuminalB 型乳腺癌患者與高浸潤(rùn)患者復(fù)發(fā)曲線(xiàn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見(jiàn)表1、圖1。

圖1 LuminalB 型乳腺癌患者癌組織TILs 不同浸潤(rùn)程度復(fù)發(fā)曲線(xiàn)

表1 TILs 與LuminalB 型乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系[例（%）]

2.3 TILs 與Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）乳腺癌患者預(yù)后差異分析

Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型乳腺癌復(fù)發(fā)組腫瘤分期為T(mén)3～T4期占比、TILs 低/中等浸潤(rùn)占比高于未復(fù)發(fā)組（P ＜0.05）；經(jīng)列聯(lián)相關(guān)性分析，Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型乳腺癌復(fù)發(fā)情況與腫瘤分期、TILs 浸潤(rùn)程度具有相關(guān)性；TILs 浸潤(rùn)程度為低/中等浸潤(rùn)的Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型乳腺癌患者與高浸潤(rùn)患者復(fù)發(fā)曲線(xiàn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見(jiàn)表2、圖2。

圖2 Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）乳腺癌患者癌組織TILs 不同浸潤(rùn)程度復(fù)發(fā)曲線(xiàn)

表2 TILs 與Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）乳腺癌患者預(yù)后的差異分析

3 討論

乳腺癌是一種高度異質(zhì)性的腫瘤，不同乳腺腫瘤對(duì)治療的反應(yīng)及預(yù)后具有很大的差別[11]。2019 年中國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)乳腺癌指南對(duì)原來(lái)的LuminalB 型分型進(jìn)一步調(diào)整，分為L(zhǎng)uminalB 型和Her-2 陽(yáng)性（HR陽(yáng)性）型，但對(duì)兩型治療方案未提出明確改變，而臨床大量數(shù)據(jù)顯示原來(lái)LuminalB 型預(yù)后差異明顯[12-14]。本研究通過(guò)對(duì)TILs 浸潤(rùn)程度在LuminalB 型、Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型表達(dá)程度及與預(yù)后關(guān)系的關(guān)系進(jìn)行分析，對(duì)協(xié)助判斷患者預(yù)后、制訂治療方案等提供一定的理論指導(dǎo)。

本研究結(jié)果顯示，LuminalB 型和Her-2 陽(yáng)性（HR陽(yáng)性）型乳腺癌患者TILs 的浸潤(rùn)水平存在一定的差異。既往有研究表明[15-17]，TILs 的浸潤(rùn)水平在不同類(lèi)型乳腺癌腫瘤組中存在較大差異，其水平與HR 表達(dá)、淋巴結(jié)受累等因素有關(guān)。腫瘤發(fā)生后，機(jī)體可產(chǎn)生針對(duì)腫瘤抗原的適應(yīng)性免疫應(yīng)答，Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型乳腺癌患者TILs 的浸潤(rùn)水平低于LuminalB 型，可能是與LuminalB 型乳腺癌患者乳腺癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的免疫原性，可較大程度地激活機(jī)體的免疫反應(yīng)有關(guān)。正常情況下，人體免疫系統(tǒng)與免疫細(xì)胞維持著一定的動(dòng)態(tài)平衡，若平衡被打破，可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生發(fā)展，并可在一定程度上影響治療效果及預(yù)后[18-19]。TILs 為腫瘤微環(huán)境中多種免疫細(xì)胞的統(tǒng)稱(chēng)，可反映機(jī)體的抗腫瘤反應(yīng)能力[20-22]。截至隨訪結(jié)束，LuminalB 型、Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型乳腺癌患者未復(fù)發(fā)率分別為84.75%、60.87%；經(jīng)列聯(lián)相關(guān)性分析，LuminalB 型、Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型乳腺癌5 年復(fù)發(fā)情況與腫瘤分期、TILs 浸潤(rùn)程度具有相關(guān)性。TILs 浸潤(rùn)程度為低/中等浸潤(rùn)的LuminalB 型、Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型乳腺癌患者未復(fù)發(fā)率分別為72.73%、46.43%；TILs 浸潤(rùn)程度為高浸潤(rùn)的LuminalB 型、Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型乳腺癌患者未復(fù)發(fā)率分別為91.89%、83.33%；LuminalB 型、Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）型兩種分型乳腺癌患者TILs 浸潤(rùn)程度均與預(yù)后具有一定的相關(guān)性。高TILs 浸潤(rùn)可能更有利于從激發(fā)腫瘤免疫機(jī)制的治療中獲益，推測(cè)高TILs 浸潤(rùn)對(duì)腫瘤抗原的免疫應(yīng)答較高，并可通過(guò)更好地從術(shù)后治療中獲益，近而可降低乳腺癌患者的復(fù)發(fā)率[23-28]。

綜上所述，LuminalB 型乳腺癌患者TILs 浸潤(rùn)水平高于Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）患者，且兩種分型乳腺癌患者TILs 浸潤(rùn)程度均與預(yù)后具有一定的相關(guān)性；臨床中通過(guò)對(duì)LuminalB 型、Her-2 陽(yáng)性（HR 陽(yáng)性）兩種分型乳腺癌患者TILs 浸潤(rùn)水平進(jìn)行檢測(cè)，有利于評(píng)估患者預(yù)后情況。