循環腫瘤細胞監測與鼻咽癌適形放療后復發轉移預測的作用

黎彩霞，李煥庭，陳登源

廣東省羅定市人民醫院 腫瘤放射科，廣東 羅定 527200

0 引言

CTCs監測通過采集患者的血液樣本，提取其中由實體瘤脫落進入外周循環系統的腫瘤細胞，在通過基因分析、抗體檢測等方式來判斷患者的腫瘤發展、轉歸情況，該方式在多種腫瘤疾病（肺癌、乳腺癌、胃癌等）監測研究中均有良好的反饋，相關的報道表示多種實體腫瘤的復發轉移與CTCs監測具有密切的相關性，被認為可有效監測原發灶、轉移灶之間的活動，無論是對于腫瘤早期檢測，還是復發轉移預測，CTCs監測對于腫瘤復發的預測性優于常規影像學檢查，但當前對于鼻咽癌適形放療后進行CTCs監測的研究相對較少[1-2]。本次研究旨在了解CTCs監測與鼻咽癌適形放療后復發轉移的預測作用，以幫助患者早發現、早治療，更好地帶瘤生存并降低其經濟負擔，具體內容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經本院倫理委員會審核，選取廣東省羅定市人民醫院2020年6月-2022年4月間收診的50例III期至Ⅳa期的鼻咽癌患者，其中男35例，女15例；年齡22～79歲，平均（49.02±2.25）歲；III期、IVa期患者分別有28、22例。

入組患者均已按照UICC（2008年）[3]標準進行分期，均執行了根治性適形放療或誘導化療+根治性適形放療。本次研究最后1例患者出組時間2022年4月，期間入組患者在術后，術后3個月、術后6個月、術后12個月、術后24個月行CTCs檢測，每次檢測均在清晨取患者的肘后靜脈血5～10mL，并送至檢驗室進行相應的CTCs檢測。

納入標準：①經病理確診的鼻咽癌；②按照UICC（2008年）分期為III期至Ⅳa期且執行了根治性適形放療或誘導化療+根治性適形放療；③預計生存期大于3個月，KPS評分≥70分；④自愿加入本研究，依從性好，配合隨訪復查。

排除標準：①有嚴重的危害患者安全或影響患者完成研究的伴隨疾病；②既往有其他惡性腫瘤病史且接受過放化療治療；③原發灶和頸部轉移病灶接受過手術治療；④鼻咽癌為復發[4]。

1.2 方法

患者均接受執行了根治性適形放療或誘導化療+根治性適形放療，在各節點進行CTCs監測時，取晨間肘中靜脈血約5mL，以真空抗凝管（ACD管）放置并迅速送檢驗室，采用益善生物CanPatrol分型檢測技術檢測。研究所用的多項分離液、緩沖液、單克隆抗體（抗CD45、抗Epcam）熒光劑，血樣采集容器等均由益善生物技術股份有限公司提供。

進行CTCs檢測時，抽取血樣均需先放置抗凝管，離心處理兩次，轉速為2.5r/min，7min后將上清與下沉物分離，將下沉物再次離心處理2min，加入紅細胞裂解液等待15min，裂解液去除紅細胞，磁珠孵育混勻去除白細胞，待完全分離后分離上清與下沉物，之后相繼以0.4%濃度Tween20、2%濃度胎牛血清液進行離心分離后取沉淀，分離液（或再次離心）分離富集腫瘤細胞，加入CD45-PE、Epcam-APC，避光孵育半小時后加入緩沖液，取沉淀物進行監測，以相應的試劑盒觀察3項單克隆抗體的情況，以Epcam陽性、CD45陰性為CTCs，數量超過＜2為陰性，≥2為陽性。

1.3 觀察標準

本次研究，通過CTCs監測，比較：①術后1周、術后1個月、術后3個月CTCs陽性率；②術后3個月，陽性、陰性患者的總緩解率（完全緩解：病灶完全消失、血清腫瘤標志物水平正常。部分緩解：病灶直徑縮小＞30%。穩定：無顯著變化。總緩解率=完全緩解率+部分緩解率）；③術后6個月、12個月、24個月，CTCs檢測陽性患者無新增轉移率[5-6]。

1.4 統計學分析

采用統計學軟件SPSS 22.0進行數據的統計分析，計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher's檢驗；計量資料以（）表示，組間比較采用獨立樣本F檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 患者術后3個月內陽性率及CTCs數目比較

通過術后適形放療，患者的陽性率顯著降低，術后1周、術后1個月、術后3個月CTCs陽性率降低，同階段患者的CTCs數目持續減少，差異均有統計意義（P＜0.05），見表1。

表1 患者術后3 個月內陽性率及CTCs 數目比較

2.2 患者術后3個月總緩解率比較

術后3個月，CTCs檢測為陽性有13例，陰性為37例，陽性患者的總緩解率低于陰性患者，差異均有統計意義（P＜0.05），見表2。

表2 患者術后3 個月總緩解率比較 [n（%）]

2.3 患者術后24個月內的無新增轉移率比較

術后6個月CTCs陽性患者無新增轉移率與陰性患者差異無統計意義（P＞0.05），術后12個月、24個月，CTCs檢測陽性患者無新增轉移率均低于陰性患者，差異均有統計意義（P＜0.05），見表3。

表3 患者術后24 個月內的無新增轉移率比較[n（%）]

3 討論

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是原發于鼻咽黏膜被覆上皮的惡性腫瘤，是我國常見的惡性腫瘤之一，對于3mm以上的腫瘤，常規影像檢查能取得較高的檢測率，但對于3mm以下的腫瘤組織，當前的影像檢測效果并不理想，血清標志物檢測的靈敏度和特異性也相對較差，CTCs監測在肺癌、乳腺癌、胃癌等多種實體腫瘤中均有良好的反饋，相關的報道均表示腫瘤的復發轉移與CTCs密切相關，早于常規影像學檢查手段預估腫瘤復發風險，CTCs監測是一種效果極佳的腫瘤復發監測方法[7-8]。

鼻咽癌患者在術后進行適形放療是最常見的治療方法，研究結果顯示，50例患者術后、術后1個月、術后3個月CTCs陽性率降低，且同節點患者的CTCs數目持續減少，分析認為，適形放療對于原病灶腫瘤具有良好的滅活效果，而CTCs監測能夠有效的觀察患者腫瘤微小病灶在血液循環中的活動情況，通過CTCs監測結果的變化情況，可發現患者的復發轉移傾向，明確微小腫瘤病灶陽性情況，這利于臨床醫師制定科學合理的化療方案，而患者在根據檢測結果執行針對性的適形放療后，原病灶腫瘤細胞得到針對性的抑制，進入外周血液循環的腫瘤細胞因此減少，患者的CTCs數目和陽性率因此不斷下降[9-11]。

另外原發灶經淋巴系統進入外周循環是遠處復發、惡性增殖的重要原因，因此術后適形放療效果的優劣關系到患者有無新增轉移[12]，而CTCs監測能輔助醫師開展針對性化療，彭政[13]、楊健筌[14]等學者指出外周CTCs在鼻咽癌患者的早期診斷、病情發展預測和療效評估上具有重要參考價值，通過早期連續檢測CTCs，能有效抑制原發灶的發展和轉移，因此術后6個月CTCs陽性患者無新增轉移率與陰性患者差異較小，但術后12個月、24個月，CTCs檢測陽性患者無新增轉移率均顯著低于陰性患者，分析認為這說明CTCs陽性患者的總生存期更短，可見CTCs對患者預后預測作用顯著。

在術后3個月，CTCs檢測為陽性有13例，陰性為37例，陽性患者的總緩解率顯著低于陰性患者，分析認為CTCs的變化與療效有關，通過更具有針對性的放療措施，原病灶術后殘余腫瘤細胞清除效果良好，可見CTCs的監測結果也可作用鼻咽癌病情轉歸的有效參考與補充，但本次研究未對術后3個月之后的緩解情況進行統計，這可能對研究結果造成一定的偏畸，還需要增大樣本量，延長觀察時間，開展進一步的深入研究。

綜上所述，鼻咽癌患者在進行適形放療后，采用CTCs監測能夠有效的檢測患者的CTCs陽性情況，輔助醫師對患者進行針對性的診治，從而幫助患者早發現、早治療，進而改善患者的生存質量，延長患者的生存時間，可見聯合CTCs監測的隨診復查效果優于單純傳統腫瘤復診檢測項目，具有較高的相關性。