紫背天葵葉片培養技術*

劉淑芳 陳杏禹 王海榮 侯慧鋒

（遼寧農業職業技術學院，遼寧 熊岳 115009）

紫背天葵為菊科三七屬多年生常綠草本植物，又名兩色三七草、紫背紅鳳菜、紅玉菜等。紫背天葵全株肉質，嫩葉和莖均可食用，口感柔嫩，風味獨特，除具有一般蔬菜所含有的營養價值外，還富含有造血功能的鐵素、維生素A、黃酮類化合物以及黃酮苷等成分，具有生津止渴、潤燥止咳、活血化瘀、清熱解毒等功效，能有效提高機體的免疫力、清除自由基、延緩衰老，是一種藥食兼用的高檔蔬菜。

紫背天葵不易采收種子，生產上常采用扦插或分株繁殖。然而，扦插和分株繁殖無法保證種苗整齊一致，且易感染病毒，不利于其規模化生產。組培快繁技術具有不受時間限制、繁殖速度快、繁殖系數大等優點，在農業生產中廣泛應用。利用紫背天葵嫩葉、嫩枝進行組織培養，能在短期內生產出大量優質商品紫背天葵種苗，可在不影響原有紫背天葵采收的前提下獲得較高的經濟效益?，F將紫背天葵葉片培養技術及組培快繁的影響因素介紹如下。

1 紫背天葵葉片培養技術

1.1 外植體的采集和處理

從健康、無病蟲害的紫背天葵植株上選取幼嫩的葉片，連同葉柄一起剪下作外植體，用75%酒精棉球擦拭干凈后裝入保鮮袋，帶回實驗室。將外植體置于流水下沖洗50 min，然后在超凈工作臺上用75%酒精浸潤30 s，用無菌水沖洗2次，用1%次氯酸鈉溶液消毒5 min，再用無菌水沖洗5次，最后將其置于無菌濾紙上吸干表面水分，備用。

1.2 初代培養

將消毒好的葉片沿主脈剪切成5 mm×5 mm的葉塊，接種于誘導培養基MS＋BA 0.5～1.0 mg/L＋NAA 0.5～1.0 mg/L上進行誘導培養，培養條件為溫度23～25℃、光照時間14 h/d、光照強度2 000～3 000 lx。接種10 d后，葉片增厚、邊緣扭曲，切口處出現少量綠色、顆粒狀、疏松的愈傷組織。隨著培養時間的延長，顆粒物上分化出大量綠色芽點（見圖1），最后形成叢生芽苗。

圖1 紫背天葵葉片誘導出的叢生芽

1.3 增殖培養

初代培養誘導出的叢生芽苗高3 cm以上時，將其切割成長1～2 cm、帶腋芽的莖段，并接種到增殖培養基MS＋BA 0.3～0.5 mg/L＋NAA 0.05～0.2 mg/L上進行增殖培養，培養條件同初代培養。芽苗莖段增殖培養25 d后，又分化出多個芽苗，形成新的芽叢（見圖2）。利用新的芽叢可再次進行增殖培育，25 d為1個周期，反復轉接即可擴繁大量芽苗。

圖2 紫背天葵增殖培養產生的叢生芽

1.4 生根培養

增殖苗的數量達到生產需求時即可進行生根培養。將增殖培養的芽苗切割成單苗轉接到生根培養基1/2 MS＋NAA 0.1 mg/L＋IBA 0.1 mg/L上進行生根培養。培養7 d后芽苗基部可誘導出根原基，20 d后每個芽苗基部能產生3～5條、長2 cm以上的根（見圖3）。生根培養條件基本同初代培養，僅需適當提高光照強度。

圖3 紫背天葵試管生根苗

1.5 馴化移栽

芽苗生根培養20 d后，即可進行馴化移栽。

1.5.1 移栽前準備

在溫室或大棚內進行馴化移栽，將芽苗移栽至苗床或穴盤均可。使用苗床馴化的，提前建苗床，苗床寬1 m、深15 cm，床長依溫室或大棚跨度定，苗床上方搭建拱棚；使用穴盤馴化的，可選用72孔或105孔穴盤。移栽基質用珍珠巖、蛭石、草炭按1∶1∶1比例配制?；|、苗床或穴苗盤使用前需用多菌靈1 000倍液消毒。

1.5.2 瓶苗馴化

將紫背天葵生根的試管苗移至溫室內，閉瓶煉苗5 d，再開瓶煉苗2 d。

1.5.3 移栽

將生根的試管苗從瓶中取出，洗凈根部附著的培養基，在多菌靈800～1 000倍液中消毒5～10 min，撈出瀝干水分，移栽至穴苗盤或苗床上，加扣小拱棚，蓋上遮陽網。

1.5.4 栽后管理

移栽后，大棚內保持相對濕度85%以上、溫度15～30℃、光照強度3 000～5 000 lx；移栽1周后，逐漸通風；移栽后約1個月即可成活，成活率在98%以上。紫背天葵移栽馴化苗見圖4。

圖4 紫背天葵移栽馴化苗

2 紫背天葵組培快繁的影響因素

2.1 外植體

選用適宜的外植體是建立紫背天葵組培快繁體系的關鍵點。目前，紫背天葵組培快繁的外植體材料主要為球莖、葉片和莖段，也有選用種子作外植體。相關試驗結果表明，葉片、莖段作初代培養材料，誘導效果最好。李媛等［1］以紫背天葵莖段為外植體，采用常規消毒方法進行消毒滅菌，莖段誘導率達到70%以上。

2.2 培養條件

溫度、光照、濕度是影響紫背天葵組培苗是否生長健壯的主要因素。莖段或葉片在試管內的培養條件為溫度（25±2）℃、光照時間14 h/d、光照強度2 000～3 000 lx；在試管外的培養條件為相對濕度85%以上、溫度15～30℃、光照強度3 000～5 000 lx。在適宜的溫濕度條件下，莖段或葉片的誘導、增殖效果較好，生根率較高。

2.3 植物激素

不定芽的誘導與細胞分裂素和生長素的種類及濃度密切相關。陳剛等［2］研究表明，1 mg/L 2，4-D和1 mg/L 6-BA對紫背天葵愈傷組織的誘導效果較好；張少平等［3］研究發現，在MS培養基中加入3 mg/L BA和0.2 mg/L NAA有利于外植體誘導不定芽；陳雄偉等［4］研究表明，噻苯隆（thidiazuron，TDZ）和CPUU［N（-2-氯-4-吡啶基）-N’-苯基脲］也能誘導紫背天葵葉片和愈傷組織分化出不定芽，在MS培養基中添加0.5 mg/L TDZ誘導率可達81.3%。

2.4 發生途徑

紫背天葵組培的發生途徑主要有叢生芽發生型、體細胞發生型、器官發生型、胚狀體發生型。林碧英等［5］以莖段為外植體，通過叢生芽增殖途徑成功獲得再生植株；張少平等［3］以紫背天葵葉片為外植體進行胚狀體誘導，成功獲得再生植株，但效率不高；陳剛等［2］以葉片為外植體，構建了器官發生型植株再生培養體系，所產生的試管苗易生根，再生植株成活率高達95%以上。