貴州省冊亨縣和望謨縣大型真菌資源收集及鑒定分析

李 彪，尚念杰，楊通靜，趙德剛，朱國勝，周佳佳，蘇榮榮，武華文，桂 陽

（1.貴州省農業科學院·貴州省農作物品種資源研究所 貴陽 550006； 2.貴州省食用菌育種重點實驗室 貴陽 550006；3.貴州省食用菌現代農業產業技術體系資源育種功能實驗室 貴陽 550006；4.貴州省食用菌工程技術研究中心資源育種實驗室 貴陽 550006；5.貴州省黔西南州喀斯特區域發展研究院 貴州 興義 562499； 6.黔西南民族職業技術學院 貴州 興義 562499）

中國是北半球生物多樣性最豐富的國家之一，其中大型真菌（Macrofungi）更是豐富多彩，大型真菌也稱蕈菌，是能夠產生顯著子實體的一類真菌，包括大部分擔子菌和部分子囊菌，種類繁多，絕大多數生于森林、空曠山地和草原中。貴州省地理位置特殊，喀斯特地貌發育典型，生境異質性程度高，氣候溫暖濕潤，為大型真菌生長發育提供了有利條件。前人研究發現貴州大型真菌中食用真菌、藥用真菌資源在貴州省各市州均很豐富，但是缺乏對黔西南州望謨縣和冊亨縣大型真菌較為系統的資源普查和研究。

貴州省黔西南州冊亨縣和望謨縣大型真菌資源豐富，但組成和分布尚未清楚，對該地區優勢大型真菌的研究也不夠系統。系統調查貴州大型真菌資源，摸清資源種類、特點、分布及儲量情況，研究其遺傳多樣性、分析物種組成，開展分子系統學分析，鑒定出貴州菌類優勢科、屬、種，對具有開發價值的特色菌類資源進行創新利用，研究菌類資源保存關鍵技術，建立貴州菌類資源種質庫，保存資源標本、菌株和DNA，對貴州大型真菌的創新利用具有重要價值。為充分了解貴州省的大型真菌物種多樣性，對貴州省黔西南州冊亨縣和望謨縣進行實地樣方調查、標本采集和標本鑒定，對黔西南州冊亨縣和望謨縣菌種資源種類、優勢科屬、頻度成分等進行初步研究，其結果可為貴州野生菌菌種資源保護和利用提供理論參考，并為貴州生態資源優勢的野生菌產業快速發展提供理論依據和資料支撐。

1 材料與方法

1.1 自然概況

貴州省冊亨縣和望謨縣的大型真菌資源豐富。冊亨縣地處貴州西南部云貴高原向廣西低山丘陵過渡的斜坡地帶，境內氣候屬亞熱帶溫暖濕潤季風氣候，夏秋多濕、冬春干旱，氣候溫暖，年均氣溫19.7 ℃，林木生長快。望謨縣境內溝壑縱橫，山谷河溪相互交錯，為典型的高原山地，熱量豐富、光照充足、雨熱同季，擁有豐富的森林資源，2018 年全縣的森林覆蓋率達68.28%，有“貴州天然溫室”之稱。兩縣具備適宜各類大型真菌生長和發育的生態環境。

1.2 調查及分析方法

成立大型真菌資源普查團隊，采用隨機路線踏查法，結合當地調查，主要走訪當地菇農和長期居住農戶。調查內容：大型真菌主要生長的時間、地點，當地居民食用和藥用大型真菌種類的情況。在2019—2020 年3—12 月進行大型真菌普查和標本采集。標本采集地為貴州省黔西南州冊亨縣和望謨縣，走訪調研的地點有秧壩鎮、福堯村、洛央村、小米地村、納朝村、打狼村、樂康村、納上林場、打易鎮、新屯街道、蔗香鎮等。大型真菌采集時進行編號、生境記錄、伴生植物記錄等，利用生命觀察（Biotracks 4.0.2）軟件記錄海拔、經緯度、采集地點、具體采集時間等基本信息。大型真菌標本保存于貴州省食用菌育種重點實驗室標本館。

大型真菌數量統計基于對冊亨縣和望謨縣區域地上、腐木上等的子實體采集數量，對優勢科屬等的分布主要采用數量統計的方法，使用Excel（Microsoft Office 2019）進行數據處理和分析。

1.3 標本鑒定

在采集當天記錄新鮮標本的形態：菌蓋直徑、顏色、形狀、附屬物；菌褶或菌管顏色、著生方式、細密度；菌柄長度、形狀、質地、附屬物；菌托，菌環等。

DNA 鑒定：用CTAB 法提取標本（硅膠干燥保存）DNA，隨后進行聚合酶鏈式反應（PCR）進行特異性擴增，擴增引物選用ITS（ITS4/ITS5），對擴增產物進行凝膠電泳檢測，并將PCR 產物送往上海生工生物有限公司進行測序。測序得到的DNA 序列通過BioEdit（About BioEdit version 7.0.9.0）軟件互補拼接獲得高質量的完整序列。通過Genbank 數據庫對拼接好的DNA 序列進行相似性比對。綜合形態分類和比對結果，進行種類鑒定。

2 結果與分析

2.1 冊亨縣和望謨縣大型真菌物種組成成分

通過大型真菌普查和標本采集，共采集到353 個標本進行形態學和分子生物學分析，成功鑒定了48 個科（311 個）、74 個屬（290 個）、134 個種（134 個）。采集的部分大型真菌子實體見圖1。結合分子生物學分析，發現共有2 門、13 綱、23 目、48 科、74 屬、134 種真菌，其中子囊菌門有8 綱12 目12 科13 屬15 種，約占總數的11.19%；擔子菌門有5 綱11 目36 科61 屬119 種，約占總數的88.81%，數量統計結果見表1。

表1 冊亨縣和望謨縣大型真菌資源數量

圖1 冊亨縣和望謨縣大型真菌部分屬子實體不同角度圖

2.2 冊亨縣和望謨縣大型真菌目、科、屬統計

黔西南州冊亨縣和望謨縣大型真菌有傘菌目Agaricales、非 褶 菌 目Aphyllophorales、多 孔 菌 目Polyporales、馬勃菌目Lycoperdales、毛霉目Mucorales、硬皮馬勃目Sclerodermatales、銀耳目Tremellales、牛肝菌目Boletales、肉座菌目Hypocreales、鏈孢霉目Moniliales、雞油菌目Cantharellales、革菌目Thelephorales、內孢霉目Endomycetales、柄灰包目Tulostomatales、球殼目Plectomycetes、銹革孔菌目Hymenochaetales、盤菌目Pezizales、蘑菇目Agaricales、隱球酵母目Cryptococcales、紅螺菌目Rhodospirillales、瘤座孢目Tuberculariales、炭角菌目Xylariales、叢梗孢目Moniliales 共23 目。這些目真菌分屬于多孔菌科Polyporaceae 等48 個科、黑管菌屬等74 個屬（表2）。

表2 冊亨縣和望謨縣大型真菌科、屬、種數量統計

將采集到的標本進行ITS 測序后，進行分子生物學和形態學分析。由表3 可知，多孔菌科Polyporaceae 出現的頻度最高（17.36%），其次為紅菇科Russulaceae（12.54% ）、牛 肝 菌 科 Boletaceae（12.22%）、傘菌科Agaricaceae（6.75%）、網褶菌科Paxillaceae（6.11%）等，其中當地菌農采食紅菇科和牛肝菌科較多。

表3 冊亨縣和望謨縣大型真菌各科出現頻度

對各屬大型真菌出現的頻度進行統計分析，由表4 可知，出現頻度最高的是乳菇屬（6.90%），其次為網褶菌屬（6.55%）、粉孢牛肝菌屬（5.52%）、紅菇屬（5.52%）蘑菇屬（5.17%）、靈芝屬（4.83%）、蠟蘑屬（4.48%）等。

表4 冊亨縣和望謨縣大型真菌各屬出現頻度

2.3 冊亨縣和望謨縣大型真菌資源優勢科和優勢屬分析

將物種數大于等于10 的科定為相對豐富的科，即優勢科。經過統計分析發現優勢科一共有9個（圖2），分別為多孔菌科Polyporaceae（54 個，17.36%）、紅菇科Russulaceae（39 個，12.54%）、牛肝菌科Boletaceae（38 個，12.22%）、傘菌科Agaricaceae（21 個，6.75%）、網褶菌科Paxillaceae（19 個，6.11%）、白蘑科Tricholomataceae（14 個，4.50%）、類臍菇科Omphalotaceae（11 個，3.54%）、側耳科Pleurotaceae（10 個，3.22%）、鵝膏菌科Amanitaceae（10個，3.22%），占總數的69.46%，這些科種類相對豐富，是冊亨縣和望謨縣的關鍵類群。以種數大于等于5 的屬為優勢屬，經過統計優勢屬有18 個（圖3），分別為乳菇屬（20 個，6.90%）、網褶菌屬（19 個，6.55%）、粉孢牛肝菌屬（16 個，5.52%）、紅菇屬（16 個，5.52%）、蘑菇屬（15 個，5.17%）、靈芝屬（14 個，4.83%）、蠟蘑屬（13 個，4.48%）、裸腳傘屬（13 個，4.48%）、小孔菌屬（11 個，3.79%）、鵝膏菌屬（10 個，3.45%）、多孔菌屬（7 個，2.41%）、綠菌屬（7 個，2.41%）、栓菌屬（6 個，2.07%）、絲蓋傘屬（6 個，2.07%）、馬勃菌屬（6 個，2.07%）、脆柄菇屬（5個，1.72%）、香菇屬（5 個，1.72%）、斜蓋傘屬（5 個，1.72%），占總數的66.88%，這些屬資源較為豐富，且開發和利用價值也較高。

圖2 冊亨縣和望謨大型真菌優勢科（含10 種及以上的科）統計

圖3 冊亨縣和望謨縣大型真菌優勢屬（含5 種以上的屬）統計

2.4 冊亨縣和望謨縣大型真菌與植被營養需求分析

由圖4 可知，在冊亨縣和望謨縣采集到的353個大型真菌中，大型真菌資源較為豐富的林型有茶樹林（31 個，占8.78%）、青岡林（67 個，占18.98%）、針闊混交林（156 個，占44.19%）、杉木林（68 個，占19.26%）、竹林（2 個，占0.57%）、板栗樹林（3 個，占0.85%）以及灌叢草地（26 個，占7.37%）。由圖5 可知，在此片區采集的353 個大型真菌資源中，主要野生菌為土生菌（206 個，占58.36%）、木生菌（98個，占27.76%）和外生菌根菌（49 個，占13.88%）。

圖4 冊亨縣和望謨縣不同植被林下大型真菌種數量

圖5 大型真菌生長類型統計

2.5 冊亨縣和望謨縣大型真菌可食用和藥用分析

采集到的大型真菌資源中，包含食用菌、毒菌、食藥用菌以及食藥不明的真菌。常見的食用菌有甜蘑菇（）、蘑菇（sp.）、圈托鵝膏菌（）、牛肝菌（）、網柄牛肝菌（）、栗色鎖瑚菌（）、灰鎖瑚菌（）、多疣波邊革菌（）、栗色褐孔菌（）、鉛色短孢牛肝菌（）、血紅園圃牛肝菌（）、卵孢長根菇（）、杏仁形長根菇（sp.）、煙草色纖孔菌（）、紅蠟蘑（）、墨水蠟蘑（）、條柄蠟蘑（）、纖細乳菇（）、溫泉乳菇（）、短囊體乳菇（）、楊樹乳菇（）、思茅乳菇（）、多汁乳菇（）、粉綠多汁乳菇（）、淡黃多汁乳菇（）、乳菇（sp.）、皺蓋疣柄牛肝（）、香菇（）、翹鱗韌傘（）、絨毛香菇（）、碘味地紅菇（sp.）、杯傘狀大金錢菌（）、卷邊網褶菌（）、刺孢暗鎖瑚菌（）、虎奶菇（）、橘紅光柄菇（）、矮光柄菇（）、黑邊光柄菇（）、漏斗柄杯菌（）、白黃小脆柄菇（）、微小脆柄菇（）、大紅蓋菇（）、藍黃紅菇/花蓋菇（）、可愛紅菇（）、紅菇屬乳菇（）、擬蓖形紅菇（）、大紅菇（）、擬菱紅菇（sp.）、多變藍黃紅菇（）、光亮紅菇（）、小紅白毛杯菌（）、松塔牛肝菌（）、琉珀乳牛肝菌（）等53 種，占總數的15.01%（圖6）。

圖6 冊亨縣和望謨縣野生大型真菌可利用資源的統計

藥（食）用菌主要集中在馬勃科、香蘑科、層孔菌科和鬼傘科。常見的藥用菌有紫蠟蘑（）、盞芝小孔菌（）、淺囊狀栓菌（）、血紅栓菌（）、變色栓菌（云芝）（）、橙黃鵝膏（）、假芝（）、黑管菌（）、頭狀禿馬勃（）、樹舌靈芝（）、赤靈芝（）、四川靈芝（）、長柄梨形馬勃（）、梨形馬勃（）、紫褐黑孔菌（）、豆馬勃（）、光硬皮馬勃（）、硬 皮 馬 勃（）、涂擦球蓋菇（）等19種，占總數的5.38%。

毒菌主要集中在絲蓋傘科、環柄菇科和杯傘科。有歐氏鵝膏（）、淡玫瑰紅鵝膏（）、角鱗灰鵝膏（）、濕果傘（）、熱帶紫褐裸傘（）、金黃裸柄傘（）、梅內胡裸腳傘（）、多紋裸腳傘（）、藍亞齒菌（）、具紋絲蓋傘（）、大腳絲蓋傘（）、毛頭乳菇（）、假褐鱗環柄菇（）、劇毒環柄菇（）、桔蓋白環蘑（）、球囊小蘑菇（）、禾谷鐮刀菌（）、緊縮花褶傘/空柄絲蓋傘（）、白絨網褶菌（sp.）、近紫歪盤菌（）、榆射脈菌（）、黃環羅鱗傘（sp.）、印度碗狀紅菇（）、黃菇（）、扁韌革菌（）等25 種，占總數的7.08%。其余采集的256 種標本食藥用不明，占總數的72.53%。

3 討論與結論

大型真菌是森林生態系統的重要組成部分，可分解和利用森林生態系統中枯枝落葉等重要資源，是維護森林生態系統和提高森林生產力的重要組成成分。筆者選取野生菌資源豐富的冊亨縣和望謨縣為調查區域，有針對性地對貴州省黔西南州冊亨縣和望謨縣進行大型真菌普查，一共采集到標本353 個。經過大型真菌調查分析，借助形態學和分子生物學的方法，成功鑒定了311 個標本，隸屬48科，74 屬，134 種。其中，多孔菌科、紅菇科、牛肝菌科等為優勢科，這與陳阿敏等調查的貴州省遵義市綏陽縣優勢科以及楊慧等調查的貴州省銅仁市梵凈山優勢科的結果一致。乳菇屬、網褶菌屬、粉孢牛肝菌屬、紅菇屬等為優勢屬。其中，乳菇屬、紅菇屬在冊亨縣和望謨縣是優勢屬，與鄧春英等在銅仁市思南縣調查的優勢屬結果一致；通過調研和查閱相關文獻，發現食用菌有53 種，食藥用菌有19 種，當地常見的毒菌有25 種；食藥不明的有256 種。

前人研究發現，大型真菌在各種植被類型和海拔梯度都有分布，以冷杉為主的針葉林、海拔梯度在2000～2600 m 時大型真菌分布多；海拔在2600 m以上，則陸續出現灌叢群落和高山草甸，隨著海拔升高，強光照、降水量減少、土壤腐殖質減少等原因，大型真菌物種數持續降低；在海拔3000 m 左右，灌叢群落密集，土壤含水量及腐殖質含量有少量提升，大型真菌物種數有小幅度提高；海拔超過3300 m 時，多是高山草甸及雪原，該區間溫度過低、土壤貧瘠、積雪等不利因素較多，大型真菌物種稀少。此次資源調查針對海拔345～1634 m，海拔偏低、氣候適宜、植被豐富，適宜大型真菌的生長和發育，調查和鑒定分析結果對貴州省大型真菌的分布情況、資源數據等資料進行了補充。

冊亨縣和望謨縣是亞熱帶溫暖季風氣候區，雨熱同季，在夏季和秋季給大型真菌的生長發育提供了適宜的環境條件，使得該片區的大型真菌資源豐富，提高了大型真菌的物種多樣性。經過調查發現，人為環境破壞少的地方大型真菌資源較為豐富，在公路邊的叢林和人為影響因素較大的地方，大型真菌資源和豐富度都比純天然森林要少。后天生態環境的破壞給大型真菌的生存、生長和發育帶來極大挑戰，環境和資源的保護日趨重要。冊亨縣和望謨縣因其適宜的環境和生態特點，擁有較高的生物多樣性，通過筆者的調查研究，在一定程度上揭示了這兩個縣的大型真菌優勢科、屬以及大型真菌食藥用情況，為地方野生林下資源的挖掘和利用奠定了理論基礎。本次調查和分析盡管已較為系統，但仍可能沒有百分百的覆蓋、食藥用菌的種類認定不夠完善和全面，是否可食藥用也還需進一步的研究和驗證。綜上所述，筆者對大型真菌的物種鑒定、頻度分析、優勢科屬分析、物種組成鑒定等信息為當地大型真菌資源的評估和保護及有效地開發與利用奠定了理論基礎。