瑞巴派特緩釋片的處方優選及穩定性考察

黃月英，卞 俊，鮑蕾蕾（1.海軍軍醫大學第三附屬醫院藥劑科，上海 00438；.海軍軍醫大學第一附屬醫院藥劑科，上海 00433）

瑞巴派特是一種內源性黏膜保護劑，主要用于胃潰瘍[1]、潰瘍性結腸炎[2]、內鏡黏膜下剝離術術后潰瘍[3]的治療。該藥可正向誘導環氧合酶2活化并刺激前列腺素受體表達，進而提高胃黏膜內源性前列腺素水平、增加胃黏液分泌；同時，其還可激活生長因子（如表皮生長因子、血管內皮生長因子和肝細胞生長因子等）及其受體在潰瘍胃黏膜上的表達，抑制炎癥因子分泌，清除活性氧自由基，促進黏膜損傷愈合等[4]。目前，瑞巴派特有片劑、膠囊劑等在售，但均存在半衰期短（1.5～2.0 h）、患者依從性差等問題[5]。筆者前期通過大鼠胃腸吸收實驗發現，瑞巴派特為全胃腸道吸收藥物[6]，遂根據其藥動學特點和現有劑型缺陷，將該藥設計為緩釋制劑。在此基礎上，本研究擬進一步優選瑞巴派特緩釋片處方，并考察所制片劑的穩定性，旨在為瑞巴派特緩釋制劑的研發提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有UV-2550 型分光光度計[島津企業管理（中國）有限公司]、ZRS-8G型系列智能溶出試驗儀（天津天河醫療儀器有限公司）、BC-50E 型低溫光照儀（青島海爾股份有限公司）、LHRS-400B型恒溫恒濕培養箱（上海博泰實驗設備有限公司）、202-2DA型數顯電熱恒溫干燥箱（上海陽光實驗儀器有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

瑞巴派特對照品（批號141019，純度99.9%）、瑞巴派特原料藥（批號150911，純度99.7%）均購自浙江遠力健藥業有限公司。L-精氨酸（批號20160217）購自上海易蒙斯化工科技有限公司；泊洛沙姆188（批號WPD1608B）購自德國BASF 公司；羥丙甲纖維素K100M（hypromellose K100M，HPMC K100M，批 號SH234187）購自上海卡樂康包衣技術有限公司；微晶纖維素（批號1712130）、微粉硅膠（批號171202）均購自安徽山河藥用輔料股份有限公司；上述輔料均為藥用級。甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 瑞巴派特緩釋片的制備

按處方量稱取瑞巴派特原料藥150.0 mg、L-精氨酸75.0 mg（用量于前期預實驗確定）和泊洛沙姆188、HPMC K100M、微晶纖維素適量，采用熔融法制備瑞巴派特固體分散體，均勻分散后，迅速冷卻，于干燥箱中干燥1 h，粉碎過30目篩，再加填充劑微晶纖維素和潤滑劑微粉硅膠5 mg（1%），混勻壓片，總處方量為500 mg。

2.2 瑞巴派特含量的測定

2.2.1 溶液的制備 （1）對照品貯備液：精密稱取瑞巴派特對照品50.08 mg，置于50 mL 量瓶中，用0.1 mol/L NaOH 溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液1 mL，用水制成質量濃度為100.16 μg/mL 的對照品貯備液。（2）供試品貯備液：取瑞巴派特緩釋片粉末（約含瑞巴派特50 mg），精密稱定，置于50 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度；精密量取上述溶液1 mL至10 mL量瓶中，用水定容，即得供試品貯備液。（3）輔料溶液：取與瑞巴派特緩釋片同比例的輔料（不含瑞巴派特）適量，按“2.2.1（2）”項下方法制備，即得輔料溶液。

2.2.2 檢測波長確定 將對照品貯備液和輔料溶液分別置于分光光度計中，在200～400 nm 波長范圍內進行紫外掃描。結果表明，瑞巴派特在230 nm 和328 nm 波長處均有較大吸收，輔料無干擾，考慮到末端吸收問題，本文選擇328 nm作為檢測波長（圖略）。

2.2.3 方法學考察 參照2020 年版《中國藥典》（四部）相關通則要求進行方法學考察[7]。（1）線性關系考察：精密吸取“2.2.1（1）”項下對照品貯備液適量，用水稀釋，制成瑞巴派特質量濃度分別為5.008、10.016、20.032、30.048、40.064、50.080 μg/mL 的系列溶液，在328 nm 波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標（Y）、瑞巴派特質量濃度為橫坐標（X）進行線性回歸，得回歸方程為Y＝0.016 3X+0.004 8（R2＝0.999 9），瑞巴派特檢測質量濃度的線性范圍為5.008～50.080 μg/mL。（2）精密度考察：按上述方法配制低、中、高質量濃度（10.016、30.048、50.080 μg/mL）對照品溶液，于1 d內重復測定5次，計算日內精密度；連續測定5 d，計算日間精密度。結果顯示，日內、日間精密度RSD 均小于2%（n＝5），表明儀器精密度良好。（3）穩定性考察：精密量取“2.2.1（2）”項下供試品貯備液3 mL，置于10 mL 量瓶中并用水定容，混勻，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、24 h時在328 nm波長處測定吸光度。結果顯示，吸光度的RSD為0.39%（n＝6），提示供試品貯備液在24 h內穩定性良好。（4）重復性考察：取瑞巴派特緩釋片粉末，按“2.2.1（2）”項下方法平行制備供試品貯備液6 份；取供試品貯備液3 mL，置于10 mL 量瓶中并用水定容，混勻，于328 nm 波長處測定吸光度并代入回歸方程計算含量，得瑞巴派特含量的RSD 為0.38%（n＝6），說明方法重復性良好。（5）加樣回收率考察：稱取已知含量的瑞巴派特緩釋片粉末（約含瑞巴派特50 mg），共9份，精密稱定，分別置于50 mL量瓶中，用水溶解并定容，混勻，精密量取上述溶液1.5 mL于100 mL 量瓶中，分別加入相當于瑞巴派特已知量80%、100%、120% 的對照品溶液[1 001.6 μg/mL，按“2.2.1（1）”項下方法配制]1.2、1.5、1.8 mL，用水稀釋至刻度，混勻，在328 nm波長處測定吸光度，計算得瑞巴派特平均加樣回收率為99.47%（RSD＝0.73%，n＝9），表明方法準確度良好。

2.3 體外累積釋放度實驗

按2020年版《中國藥典》（四部）“溶出度與釋放度測定法”項下“第一法（籃法）”操作[7]：釋放介質為900 mL水，溫度為（37.0±0.5）℃，轉速為100 r/min。取瑞巴派特緩釋片6片，分別置于6個溶出杯中，于0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12 h 時分別取樣5 mL，并及時補充釋放介質5 mL。取樣液用0.45 μm微孔濾膜過濾，取濾液作為供試溶液。取上述供試溶液，于328 nm波長處測定吸光度，代入回歸方程計算其中瑞巴派特的質量濃度并計算體外累積釋放度：體外累積釋放度（%）＝100%[式中，C為供試溶液中瑞巴派特的質量濃度（μg/mL），V為釋放介質體積（mL），D為稀釋倍數，W為片劑質量（mg），F為瑞巴派特在制劑中的百分含量（%）]。

2.4 瑞巴派特緩釋片處方的優化

參考文獻[8-12]，本研究在單因素實驗的基礎上，選取對藥物體外累積釋放度影響較大的親水凝膠骨架HPMC K100M用量（X1）和分散劑泊洛沙姆188用量（X2）為考察因素，以緩釋片在0.5、2、6、10、12 h的體外累積釋放度（Y0.5、Y2、Y6、Y10、Y12）的綜合評分（Y）、體外累積釋放曲線的相關系數（R）及黏沖程度（N）為評價指標。體外累積釋放度標準分別為9%～12%（0.5 h）、20%～22%（2 h）、50%～55%（6 h）、81%～89%（10 h）、≥90%（12 h）[13-14]，Y＝|Y0.5-10%|+|Y2-21%|+|Y6-51%|+|Y10-81%|+|Y12-95%|，Y取最小值；R的標準為0.99～1.00[13]；N的標準為嚴重黏沖記0分，黏沖記3分，稍微黏沖記7分，不黏沖記10 分[15]。采用中心點復合設計-響應面法進行實驗，具體因素與水平見表1，實驗安排與結果見表2。

表1 中心點復合設計-響應面法的因素與水平

表2 中心點復合設計-響應面法的實驗安排與結果

采用Design-Expert 8.0.5b軟件對表2數據進行統計分析，得Y、R、N二項式擬合方程分別為：Y＝340.43-12.05X1-21.61X2+0.05X1X2+0.23X12+0.55X22（P＝0.000 5，r＝0.936 1）；R＝-0.24+0.05X1+0.10X2+0.000 6X1X2-0.001 0X12-0.004X22（P＝0.000 6，r＝0.931 9）；N＝13.55-0.05X1+0.10X2-0.006X12-0.005X22（P＜0.000 1，r＝0.970 0）。Y、R、N的二項式擬合方程的P均小于0.05，提示其能較好地反映因素對響應值的影響；r均大于0.900 0，說明各二項式擬合方程與真實數據的擬合度良好，可用于瑞巴派特緩釋片處方參數的預測及分析。由二項式擬合方程的方差分析結果（表3）可知，Y、R、N的F檢驗的P均小于0.01，說明模型能準確預測具有顯著性的影響因素。

表3 中心點復合設計-響應面法的Y、R、N二項式擬合方程的方差分析結果

采用Design-Expert 8.0.5b 軟件繪制等高線圖和三維響應面圖（圖1）。結果顯示，因素X1（HPMC K100M用量）對藥物的釋放有顯著影響，因素X2（泊洛沙姆188用量）的影響較弱。HPMC K100M 用量越大，釋藥速度越慢且越均勻；泊洛沙姆188用量增加，釋藥速度緩慢加快；HPMC K100M 用量越大，R越大；泊洛沙姆188 用量越大，R越小。黏沖現象主要受泊洛沙姆188 用量的影響，泊洛沙姆188 用量越大，黏沖現象越嚴重。采用Design-Expert 8.0.5b 軟件對上述二項式擬合方程求解，確定最優處方為：泊洛沙姆188 用量13.12%，HPMC K100M用量22.90%。

根據最優處方，結合生產實際，確定最終處方為：瑞巴派特150.0 mg、泊洛沙姆188 65.6 mg、L-精氨酸75.0 mg、HPMC K100M 114.5 mg、微晶纖維素適量、微粉硅膠5 mg，總處方量為500 mg。根據該處方制備3批瑞巴派特緩釋片進行驗證實驗，按“2.2”“2.3”項下方法測定其含量及體外累積釋放度，并考察Y、R、N實測值與預測值的偏差[偏差＝（預測值-實測值）/預測值×100%]。結果顯示，瑞巴派特的含量分別為100.61%、98.69%、99.01%，緩釋片在0.5、2、6、10、12 h 的體外累積釋放度分別為（9.59±0.69）%、（22.28±0.08）%、（54.00±0.71）%、（80.77±0.61）%、（94.32±0.45）%，RSD 均小于2.00%（n＝3），表明所制緩釋片能持續12 h 釋藥，體外累積釋放度≥90%，重現性良好，本品的處方和工藝設計合理。Y、R、N的實測值分別為10.70%、0.996 5、10.00，與預測值11.63%、1.000 0、9.76的偏差均小于10%，表明所建模型具有良好的預測效果[16]。

圖1 X1、X2對Y、R、N影響的等高線圖和三維響應面圖

2.5 釋藥曲線方程擬合及釋藥機制研究

參考文獻[14，17]對瑞巴派特緩釋片進行釋藥曲線方程擬合及釋藥機制研究。取瑞巴派特緩釋片進行體外累積釋放度實驗，將體外累積釋放度（Q）與時間（t）進行曲線擬合，探討釋藥機制。以Origin 9.0 軟件進行釋藥曲線方程擬合，結果見表4。

表4 瑞巴派特緩釋片釋藥曲線方程擬合結果

由表4 可知，Peppas 方程對該實驗數據結果的擬合度最高（R2＝0.998 8），其擴散指數（n）為0.795 5，提示瑞巴派特緩釋片的體外釋藥特征符合混合型機制；此外，因零級釋放模型方程的R2為0.997 4，說明瑞巴派特緩釋片具有較好的緩釋效果。

2.6 瑞巴派特緩釋片穩定性實驗

參照2020年版《中國藥典》（四部）相關通則方法[7]，對3批樣品進行穩定性研究，主要考察瑞巴派特緩釋片的性狀、含量、體外累積釋放度等參數的變化。

2.6.1 影響因素實驗 （1）光照實驗：取樣品適量，裸置于恒定質量的玻璃皿中，在（4 500±500）lx 的光照下放置10 d。結果（表5）顯示，光照10 d 后，樣品性狀與第0天相比無明顯變化，體外累積釋放度與第0天相比無明顯差異，含量略有下降。（2）高溫實驗：取樣品適量，裸置于恒定質量的玻璃皿中，置于干燥箱內，于（40±2）℃下放置10 d。結果（表5）顯示，高溫放置10 d后，樣品性狀與第0天相比無明顯變化，含量、體外累積釋放度與第0天相比亦無明顯差異。（3）高濕實驗：取樣品適量，裸置于恒定質量的玻璃皿中，置于恒溫恒濕培養箱內，在溫度為25 ℃，相對濕度分別為（75±5）%、（90±5）%的條件下放置10 d。結果（表5）顯示，在溫度25 ℃、相對濕度（75±5）%條件下放置10 d 后，片劑稍有膨脹，含量、體外累積釋放度與第0 天相比無明顯差異；在溫度25 ℃、相對濕度（90±5）%條件下放置10 d后，片劑從第5天起出現膨脹并開裂、釋放速率減慢等現象，含量與第0天相比無明顯差異。

表5 瑞巴派特的影響因素實驗結果（n＝3）

2.6.2 加速穩定性實驗 模擬本品市售包裝，并在相對濕度（75±5）%、溫度（40±2）℃條件下放置6 個月。結果（表6）顯示，樣品性狀無明顯變化，含量和體外累積釋放度測定結果與第0個月相比均無明顯差異，表明樣品加速穩定性良好。

2.6.3 長期穩定性實驗 模擬本品市售包裝，并在相對濕度（65±5）%、溫度（30±2）℃條件下放置12個月。結果（表7）顯示，樣品性狀無明顯變化，含量和體外累積釋放度測定結果與第0個月相比均無明顯差異，表明樣品長期穩定性良好。

表6 瑞巴派特緩釋片加速穩定性實驗結果（n＝3）

表7 瑞巴派特緩釋片長期穩定性實驗結果（n＝3）

3 討論

以HPMC K100M 為骨架材料制成凝膠型骨架片，藥物釋放具有先快后慢的特征。前期研究顯示，泊洛沙姆188 可增加藥物的溶出，調節藥物的釋放[18]。通過分析三維響應面圖發現，隨著HPMC K100M用量的增加，釋藥速度減慢且更均勻；隨著泊洛沙姆188用量的增加，釋藥速率緩慢加快。這是因為HPMC K100M水合膨脹可形成凝膠屏障，黏度和用量越大，凝膠強度越大，藥物的溶出擴散和HPMC K100M 的溶蝕速度越慢，導致釋藥速度減慢；泊洛沙姆188為表面活性劑，可在凝膠層中形成孔道，減少藥物的擴散阻力，增加藥物的溶出，二者相結合可以達到理想的釋放效果。

通過Origin 9.0 軟件擬合釋藥曲線方程發現，瑞巴派特緩釋片釋藥機制更接近Peppas方程（n為0.795 5），符合混合型釋藥機制。這說明在此系統中，骨架材料的水合膨脹和溶蝕、藥物的溶出和擴散等同時影響著緩釋片中瑞巴派特的溶出[14，17]。

穩定性實驗中，光照對瑞巴派特緩釋片的含量略有影響；高濕對瑞巴派特緩釋片有較大影響，可導致片劑膨脹、開裂，并減緩釋放速率；高溫對瑞巴派特緩釋片無明顯影響。因此，本品應采用遮光材料包裝，于干燥處密封保存。模擬市售包裝后進行的加速穩定性實驗及長期穩定性實驗結果顯示，瑞巴派特緩釋片性狀均無明顯變化，含量和體外累積釋放度與第0個月相比均無明顯差異，表明瑞巴派特緩釋片加速和長期穩定性良好。

通過對瑞巴派特緩釋片進行處方優選及穩定性考察發現，緩釋片體外累積釋放度重現性良好，藥物含量穩定，穩定性良好。但本研究在進行處方優化時，只考察了12 h 的體外累積釋放度，未進行24、36 h 的體外累積釋放實驗，后續將進一步完善并進行體內藥動學研究，為瑞巴派特緩釋片的臨床應用提供實驗依據。