三黃胰癉膏對重癥急性胰腺炎模型大鼠腸黏膜屏障功能及血清內毒素、二胺氧化酶、D-乳酸的影響

向 未，陳 輝，姜朝麗，蔣亞玲，王天剛，王星月，劉菊容

（西南醫科大學附屬中醫醫院，四川 瀘州 646000）

重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）是一種病情危重、進展極其兇險的常見消化內科急癥，病死率高達30%～50%［1］。腸道是危重疾病應激反應的中心器官之一，現已證實SAP早期即可發生腸屏障功能障礙（IBFD），而IBFD則是SAP誘發和加重并發癥，且是死亡率高的原因所在［2-4］。前期臨床研究表明［5］，我科治療胰腺炎的外用協定處方三黃胰癉散（藥物組成同三黃胰癉膏）治療急性胰腺炎有顯著效果，能縮短急性胰腺炎患者的腹痛消失時間、血清炎性指標恢復正常時間及住院時間。本課題采用牛磺膽酸誘導大鼠SAP模型，觀察三黃胰癉膏對SAP大鼠腸黏膜屏障以及血清內毒素、二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸（D-LA）的影響，觀察三黃胰癉膏治療SAP的可能作用機制，從而為其治療SAP提供實驗室證據。

1 材料與方法

實驗動物：清潔級健康SD大鼠60只，全為雄性，體質量300±50g，鼠齡9～10周，購于南醫科大學動物實驗中心［實驗動物許可證號SYXK（川）2019-202］，于西南醫科大學動物實驗中心動物房飼養，溫度17℃～23℃，相對濕度50%～70%，室內通風良好，每日光照9～12h，適應性喂養1周。動物實驗方法符合西南醫科大學動物實驗倫理規程。

實驗藥物：三黃胰癉膏由生大黃、梔子、白芷、白及、烏梅、薄荷、生黃芪、連翹、甘遂、皂角刺組成（西南醫科大學附屬中醫醫院制劑室提供），外敷腹部（大鼠劍突到恥骨聯合，兩腋前線之間），厚度約5mm（劑量0.65g/kg）。

主要試劑與儀器：①10%水合氯醛，美國Sigma公司；3.5%牛磺膽酸溶液，美國Sigma 公司；葡聚糖試劑盒，上海酶聯生物科技有限公司；MTL ELISA，美國DAB公司；脂多糖檢測試劑盒，北京普博斯生物有限公司。②全自動珊頓切片機，Thermo Electron Corporation；50i雙目顯微鏡，尼康；全自動珊頓脫水機，Thermo Electron Corporation；珊頓組織石蠟包埋機，Thermo Electron Corporation，全自動珊頓組織切片染色機 Thermo Electron Corporation。

造模與給藥：選取體質量相當的雄性SD大鼠60只，隨機分為模型組、治療組和假手術組各20只。適應性喂養1周，給予以下處理：模型組、治療組制備SAP模型，造模方法參考改良AhoHJ法［6］。造模成功后，治療組給予三黃胰癉膏外敷腹部，日1次；假手術組，開腹后僅翻動腸管，不制備SAP模型，只注射生理鹽水。

3組動物均禁食、不禁飲。

標本采集與檢測：①血清淀粉酶測定：各時間點處死大鼠前行心臟取血，送西南醫科大學附屬中醫醫院檢驗科檢測；②血清內毒素測定：各時間點處死大鼠前行心臟取血，按革蘭氏陰性菌檢測試劑盒說明操作檢測；③血清DAO及D-LA濃度測定：各時間點處死大鼠前行心臟取血，采用ELISA雙抗夾心法檢測。

統計學處理：使用SPSS 22.0統計軟件。計量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間用t檢驗，作差異顯著性分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

三黃胰癉膏對SAP大鼠血清淀粉酶的影響見表1。

表1 三黃胰癉膏對SAP大鼠血清淀粉酶的影響 （±s）

表1 三黃胰癉膏對SAP大鼠血清淀粉酶的影響 （±s）

注：與假手術組比較，#P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05。

組別 6h 12h 24h 48h假手術組 1678.10±124.14 1682.21±103.45 1102.34±67.46 972.16± 59.45模型組 8656.43±1267.53# 14643.20±1346.47# 19769.50±1493.64# 9543.34±914.32#治療組 8942.24±900.37* 2454.65±287.54* 1357.39±102.42* 998.43± 69.39*

三黃胰癉膏對SAP大鼠血清內毒素的影響見表2。

表2 三黃胰癉膏對SAP大鼠血清內毒素的影響 （±s）

表2 三黃胰癉膏對SAP大鼠血清內毒素的影響 （±s）

注：與假手術組比較，#P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05。

組別 6h 12h 24h 48h假手術組 0.22±0.09 0.22±0.08 0.22±0.10 0.22±0.07模型組 1.12±0.11#2.67±0.15#3.98±0.28#4.74±0.23#治療組 0.88±0.10*2.02±0.12*2.95±0.13*3.06±0.15*

三黃胰癉膏對SAP大鼠血清DA0濃度的影響見表3。

表3 三黃胰癉膏對SAP大鼠血清DAO濃度的影響 （mg/L，±s）

表3 三黃胰癉膏對SAP大鼠血清DAO濃度的影響 （mg/L，±s）

注：與假手術組比較，#P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05。

組別 6h 12h 24h 48h假手術組 0.34±0.08 0.33±0.07 0.35±0.08 0.32±0.06模型組 1.11±0.10#1.68±0.18#2.99±0.28#3.76±0.23#治療組 0.98±0.10*1.02±0.16*1.43±0.13*1.06±0.15*

三黃胰癉膏對SAP大鼠血清D-乳酸（D-LA）濃度的影響見表4。

表4 三黃胰癉膏對SAP大鼠血清D-LA濃度的影響 （U/L，±s）

表4 三黃胰癉膏對SAP大鼠血清D-LA濃度的影響 （U/L，±s）

注：與假手術組比較，#P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05。

組別 6h 12h 24h 48h假手術組 1.12±0.04 1.13±0.03 1.15±0.04 1.10±0.05模型組 1.50±0.12#1.48±0.18#1.49±0.18#1.56±0.13#治療組 1.28±0.10*1.22±0.16*1.23±0.13*1.26±0.15*

三黃胰癉膏對SAP大鼠小腸黏膜的影響。光鏡下觀察顯示：假手術組的小腸黏膜絨毛結構完整，黏膜絨毛上皮呈高柱狀，無水腫、炎性細胞浸潤。模型組小腸黏膜受損明顯，且隨著時間延長加重，可見小腸絨毛充血水腫明顯伴出血，大量中性粒細胞浸潤、杯狀細胞減少，頂端上皮壞死、脫落，潰瘍形成。第6、12h、24h、48h治療組與模型組比較損害有所減輕。而治療組與同時間點的模型組比較，隨時間延長腸絨毛充血水腫、壞死、炎細胞浸潤均有改善。表明了三黃胰癉膏可降低SAP大鼠小腸黏膜損傷。

3 討 論

SAP是一種內科疾病，根據本病病因、臨床表現、病理變化特點，目前一些學者［7-8］提出，SAP可以看作“內癰”，中醫可以按“內癰”論治。根據“內癰”理論及SAP的中醫病機，中醫外治治療SAP以通里攻下、清熱解毒、散瘀止痛、拔毒外出為治療大法。

三黃胰癉膏方中以大黃為君藥。大黃苦寒，具有瀉下攻積、清熱解毒、活血化瘀的功效。黃梔子、連翹、甘遂為臣藥。黃梔子苦寒，具有清熱解毒、消腫止痛的功效，擅長清三焦之熱；連翹苦、微辛，寒，具有清熱解毒、消癰散結的功效，善治熱毒瘡癰、瘰疬，《珍珠囊》稱之為“瘡家圣藥”。二藥合用，增強大黃的清熱解毒之功；甘遂苦寒，有小毒，具有瀉水逐飲，消腫散結的功效，善行經隧之水濕，使體內潴留之水飲從二便排出，與大黃合用，增強了大黃的瀉下攻積作用。皂角刺、黃芪為佐藥。皂角刺辛溫，能消腫排膿。黃芪甘，微溫，具有補氣升陽，利水消腫，托毒排膿，斂瘡生肌之功。黃芪被被譽為“瘡癰圣藥”，反佐黃芪，增強機體的抗病能力，以“安先未受邪之地”。白芷辛，溫，消腫排膿。烏梅酸澀，外敷消瘡毒。白及苦澀，消腫生肌而截毒束毒。薄荷辛涼，芳香辛散，《新修本草》：“……主心腹脹滿”。諸藥合用，共奏通里攻下、清熱解毒、散瘀止痛、拔毒外出之功。本方清溫并用，旨在疏通血脈，調和氣血，避免形成“氣脈得寒則不行，瘀血得寒則不散，瘀肉得寒則不潰，新肉得寒則不生”的不良結局。

D-LA和內毒素均由腸道細菌產生，當腸黏膜屏障功能受到破壞損傷時，大量D-LA與內毒素才釋放入血，因此D-LA和內毒素常作為腸黏膜屏障損傷的早期監測指標。DAO廣泛存在于哺乳動物小腸黏膜絨毛上皮層，是小腸黏膜上皮細胞內高活性的酶，當在腸黏膜屏障功能受損時則會導致機體出現DAO慢性升高［9］。文獻研究顯示［10］，血清DAO與D-LA用于評估腸道功能有很好的價值。因此，本課題將DAO、D-LA、內毒素作為SAP大鼠腸黏膜屏障的損傷指標。本研究結果顯示，外敷三黃胰癉膏能夠改善重癥急性胰腺炎模型大鼠小腸黏膜損傷，降低血清淀粉酶，降低大鼠血清DAO、D-LA、內毒素含量。

綜上所述，外敷三黃胰癉膏治療SAP大鼠模型，能夠改善重癥急性胰腺炎模型大鼠小腸黏膜損傷，降低血清淀粉酶，降低大鼠血清DAO、D-LA、內毒素含量，其可能的作用機制為降低大鼠血清DAO、D-LA、內毒素含量。