Th17/Treg、CD3+CD56+ NKT細胞水平對兒童肺炎支原體肺炎病情及預后的評估價值

曹煥萍，孫淑娜，葉江艷，朱耿云，彭銀花，陸 定

上海市第八人民醫院兒科，上海 200235

肺炎支原體肺炎是由于支原體感染造成的肺部急性感染，是較為常見的肺部疾病之一。流行病學調查顯示，在學齡前患有肺炎的兒童中，肺炎支原體肺炎患兒所占比例較高[1]。學齡前兒童肺炎支原體肺炎發病的癥狀不盡相同，同時可伴發多種器官及多個系統的損傷[2]。輕度肺炎支原體肺炎患兒通過科學的診療，可取得較好的治療效果，但是少數患兒可能會病情惡化，進而引發進行性呼吸窘迫癥，嚴重影響患兒的生命安全[3]。因此，在疾病的早期，及時對肺炎支原體肺炎患兒的惡化趨勢進行分析，對于提升患兒的生存率及治療效果具有積極的意義[4]。Th17/Treg屬于CD4 T細胞，在炎癥反應的各個階段，Th17/Treg表現為明顯的失衡。有研究報道顯示，Th17/Treg主要通過對信號轉導及轉錄激活因子的活化作用，進而造成Th17/Treg進一步失衡[5]。CD3+CD56+NKT細胞水平在一定程度上反映了體液免疫及細胞免疫水平[6]。本研究主要通過分析Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞對兒童肺炎支原體肺炎病情的評估價值，為臨床診療提供科學依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 以2019年2月至2021年2月在本院進行治療的80例肺炎支原體肺炎患兒作為觀察組。(1)納入標準：①所有患兒符合肺炎支原體肺炎診斷標準[7]；②患兒血清特異性抗-肺炎支原體IgM陽性；③經影像學檢查確診為肺炎支原體肺炎；④所有患兒均無免疫系統疾病。(2)排除標準：①其他因素導致的小兒肺炎；②合并其他呼吸道疾病；③對本研究使用藥物過敏；④伴有嚴重合并癥或并發癥；⑤伴有嚴重心、肝、腎等器質性病變；⑥有長期糖皮質激素使用史。按照肺炎支原體肺炎的診斷標準[7]確診患兒并劃分嚴重程度，患兒僅表現為上呼吸道感染，且發熱在7 d內則為輕度；患兒表現為支氣管炎及肺炎，發熱在7 d及以上，體溫在39 ℃以上，存在肺外系統合并癥，使用大環內酯類藥物治療，效果欠佳則為重度。其中輕度患兒50例，重度患兒30例，重度患兒中采用激素治療及未采用激素治療各15例。出院時患兒的臨床癥狀、體征、影像學特征基本恢復正常或者完全恢復正常，經過為期6個月的隨訪，無反復呼吸道感染則為預后良好；出院時患兒的臨床癥狀及體征未完全恢復正常、影像學檢查病灶未完全吸收，或吸收不完全，出院后仍有癥狀，仍需用藥、復診，經過為期6個月的隨訪有反復呼吸道感染則為預后不良[8]。另選取同期健康兒童40例作為對照組。兩組研究對象一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。所有研究對象監護人均同意研究對象參與本研究，并簽署知情同意書，本研究經本院醫學倫理委員會批準。

1.2方法 采集所有研究對象肘靜脈血2 mL，采用流式細胞儀分別對Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平進行檢測。檢測試劑購于江蘇洲聯生物科技有限公司，嚴格按照說明書進行操作。

表1 兩組一般資料比較

1.3觀察指標 比較觀察組及對照組的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平；比較輕度患兒及重度患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平；比較激素治療和非激素治療重度患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平；比較不同預后情況患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平；分析Th17/Treg、CD3+CD56+NKT聯合檢測對肺炎支原體肺炎患兒預后的預測價值。判斷Th17/Treg、CD3+CD56+NKT預測肺炎支原體肺炎不良預后的真陽性、假陽性、真陰性及假陰性結果，Th17/Treg、CD3+CD56+NKT的參考范圍分別為0～0.74%及9.9%～28.7%，超過范圍則判斷為陽性。并計算Th17/Treg、CD3+CD56+NKT預測肺炎支原體肺炎不良預后的靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值。

2 結 果

2.1兩組Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平比較 觀察組的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.2不同嚴重程度患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平比較 輕度患兒Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平明顯低于重度患兒，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

2.3采用不同治療措施治療的重度肺炎支原體肺炎患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平比較 非激素治療患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平明顯高于激素治療患兒，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表2 兩組Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平比較

表3 不同嚴重程度患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平比較

2.4不同預后情況患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平比較 隨訪后發現，預后良好患兒69例，預后不良患兒11例。預后良好患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平明顯低于預后不良患兒，差異有統計學意義(P<0.05)。見表5。

表4 采用不同治療措施治療的重度肺炎支原體肺炎患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平比較

表5 不同預后情況患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT 細胞水平比較

2.5Th17/Treg、CD3+CD56+NKT聯合檢測預測肺炎支原體肺炎不良預后的價值 串聯方式的聯合檢測分析結果顯示，Th17/Treg、CD3+CD56+NKT聯合檢測對于肺炎支原體肺炎不良預后的預測準確率明顯大于單獨檢測(P<0.05)。見表6。

表6 Th17/Treg、CD3+CD56+NKT聯合檢測預測肺炎支原體肺炎不良預后的效能

2.6ROC曲線分析結果 ROC曲線分析結果顯示，Th17/Treg、CD3+CD56+NKT聯合檢測預測肺炎支原體肺炎不良預后的曲線下面積(AUC)明顯大于單獨檢測的AUC患兒(P<0.05)，Th17/Treg、CD3+CD56+NKT的cut-off值分別為1.33%、36.91%。見表7。

表7 ROC曲線分析結果

3 討 論

肺炎支原體肺炎是臨床較為常見的呼吸道疾病之一，也是春秋季兒童較為常見的社區獲得性肺炎[9]。在社區獲得性肺炎患兒中，肺炎支原體肺炎患兒的比例呈現逐年上升的趨勢。由于患兒的呼吸系統發育不全，免疫功能較低，疾病的進展較快，嚴重影響患兒的生命安全。因此，對肺炎支原體肺炎患兒進行早期診斷具有重要意義[10]。而在對不同預后患兒進行分析時，在輕度患兒中也可發現預后不良者，因此，對預后不良患兒進行早期預測，并早期開展干預，對改善患兒的預后具有積極的意義[11]。

Th17/Treg在機體的白細胞介素(IL)-17、IL-21及IL-22等細胞因子的分泌過程中發揮重要作用，在炎癥反應過程中，其主要通過對中性粒細胞的招募作用，進而發揮適應性免疫作用，在氣道黏膜抵御病原菌的病理、生理過程中發揮重要作用。Treg是重要的T細胞亞群[12]，主要通過對CD4及CD8因子的抑制發揮作用。在正常的生理作用下，患兒的Treg主要發揮IL-10及轉化生長因子β等的調控作用[13]。Th17及Treg是近年來重要的T淋巴細胞，在細胞的分化過程中發揮重要作用，而在二者的分化過程中，二者相互拮抗，同時在免疫功能中發揮重要的作用[14]。臨床研究已經發現，Th17/Treg的失衡與自身免疫性疾病發生及其不良預后有關[15]。本研究中，隨著疾病的進展，患兒的Th17/Treg呈現明顯上升趨勢。提示在肺炎支原體肺炎疾病的進展中，機體的慢性炎癥反應會進一步造成免疫功能明顯降低。王亞洲等[16]通過對兒童肺炎支原體肺炎的疾病進展進行研究，發現患兒的Th17/Treg呈現明顯的上升趨勢，與本研究結果一致。CD56及CD3是重要的自然殺傷(NK)細胞表面標志物，在正常的生理狀態下，其主要分布在肝臟、胸腺及骨髓中，而在外周血中水平較低。有研究報道，NKT細胞既有T細胞的活性，又具有NK細胞的效能，同時NKT細胞通過對患兒的顆粒酶B及穿孔素的分泌作用，進一步發揮NK細胞的抗感染作用[17]。在本研究中，隨著疾病的進展，CD3+CD56+NKT細胞呈現明顯的上升趨勢。張丹丹等[18]研究發現，肺炎支原體肺炎患兒的NKT細胞呈現明顯上升趨勢，與本研究結果一致。以上研究結果提示對NKT細胞及Th17/Treg水平進行綜合評價對于患兒的病情判斷具有重要意義。

另外，通過對Th17/Treg、CD3+CD56+NKT聯合檢測預測肺炎支原體肺炎患兒的預后效能進行分析，發現聯合檢測的效能明顯高于單獨檢測。通過對患兒Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平的聯合檢測，可對患兒的體液免疫功能及細胞免疫功能進行綜合分析，進而對患兒的總體免疫水平進行評估，對于預測患兒的預后具有重要意義。同時，本研究通過對ROC曲線進行分析，得到Th17/Treg、CD3+CD56+NKT預測肺炎支原體肺炎患兒不良預后的cut-off值分別為1.33%、36.91%。

綜上所述，Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細胞水平對肺炎支原體肺炎患兒的病情評估及激素治療效果評價具有重要的意義，也可作為臨床判斷患兒預后的重要依據。