血漿組織因子微粒、脫-γ-羧基凝血酶原、神經元特異性烯醇化酶在胃癌患者血液高凝狀態中的臨床價值

李瑩瑩，朱曉東，馮興勇，余 潔，鄒佳華△

湖北省黃岡市中心醫院:1.腫瘤內科；2.胃腸外科，湖北黃岡 438000

腫瘤患者血液的高凝狀態可能是由腫瘤細胞損傷血管內皮，產生局部炎癥反應，以及腫瘤細胞釋放組織因子和癌前促凝物質引起的[1]。近年來的研究發現，血液高凝狀態對機體的損傷不僅體現為可導致血栓形成，還可通過刺激血管內皮、促進血管生成、增加血小板活性、調節免疫和改變血流動力學等促進腫瘤細胞的生長和擴散。因此，通過檢測相關指標的變化，及時發現凝血功能異常，并及時治療，從而預防腫瘤患者動靜脈血栓形成，延長患者生存時間，改善其生活質量[2]。組織因子作為外源性凝血通路的啟動子，存在于細胞顆粒表面，形成組織因子微粒(TF-MPs)，其表面的磷脂酰絲氨酸和組織因子具有較強的促凝活性[3]。維生素K缺乏或抗體-Ⅱ誘導產生的凝血酶原是一種缺乏凝血活性的異常凝血酶原，又稱為脫-γ-羧基凝血酶原(DCP)[4]。此外，血清神經元特異性烯醇化酶(NSE)水平可能與腫瘤患者相關凝血指標的變化存在一定的關聯[5]。有研究發現，NSE水平的升高是血液高凝狀態發生的風險因素[6]。本研究主要探討了TF-MPs、DCP、NSE與胃癌患者血液高凝狀態的關系，同時分析了上述3項指標對胃癌患者血液高凝狀態的診斷價值，旨在為臨床防治胃癌患者血液高凝狀態提供一定的參考依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2021年1月本院就診的Ⅲ～Ⅳ期不可手術治療的晚期胃癌患者作為研究對象。納入標準：(1)通過病理檢查確診為胃癌；(2)近30 d內未使用過抗凝、化療藥物或血液制品；(3)近30 d內未接受過局部放療；(4)一般資料完整。排除標準：(1)合并嚴重肝、腎損傷；(2)合并對凝血功能產生影響的自身免疫性疾病；(3)合并對凝血功能產生影響的遺傳或獲得性血液系統疾?。?4)不配合研究；(5)因各種原因退出研究。按納入與排除標準選取符合條件的患者86例，其中男47例，女39例；年齡50～82歲，平均(63.12±10.22)歲。參照傳統凝血功能檢測結果分為高凝組38例和非高凝組48例。滿足下列2項者可診斷為高凝狀態[7]：(1)凝血酶原時間縮短>3 s；(2)活化部分凝血活酶時間縮短>3 s；(3)纖維蛋白原>4 g/dL；(4)D二聚體>300 μg/L；(5)血小板計數>30×109/L。高凝組中男19例，女19例；年齡52～80歲，平均(64.03±10.17)歲。非高凝組中男28例，女20例；年齡53～82歲，平均(63.06±10.02)歲，兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。所有研究對象均自愿參與本研究，本研究經本院醫學倫理委員會批準。

1.2檢測方法

1.2.1TF-MPs檢測 入院后第1天，取兩組空腹靜脈血5 mL置于離心管中，并以160×g離心20 min，獲得富血小板血漿，吸取2/3上層血漿再以1 000×g離心20 min，取上清液獲得乏血小板血漿。將異硫氰酸熒光素(FITC)標記的抗膜聯蛋白V(AnnexinⅤ)抗體(艾美捷科技有限公司)和藻紅蛋白(PE)標記的抗CD142抗體(上海瑞齊生物技術有限公司)添加到50 μL乏血小板血漿中，在室溫下孵育30 min，然后加入1 mL磷酸鹽緩沖液，采用流式細胞儀(貝克曼庫爾特公司)檢測。樣品上機前用0.1～1.0 μm的標準進行前向角設門，門中收集的微粒通過FITC和PE熒光強度進行分析。TF-MPs定義為直徑0.1～1.0 μm且CD142+/AnnexinⅤ+的微粒。

1.2.2DCP、NSE檢測 入院后第1天，采集兩組患者的血液標本，4 ℃低溫條件下離心，取上清液，—80 ℃儲存，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測DCP、NSE水平。

2 結 果

2.1兩組TF-MPs、DCP、NSE水平比較 高凝組的TF-MPs、DCP、NSE水平均高于非高凝組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組TF-MPs、DCP、NSE水平比較

2.2胃癌患者血液高凝狀態的危險因素分析 以血液高凝狀態(定義“高凝組”=1，“非高凝組”=2)作為因變量，TF-MPs、DCP、NSE水平作為自變量進行多元線性回歸分析，結果顯示，TF-MPs、DCP、NSE水平升高為胃癌患者血液高凝狀態的獨立危險因素(P<0.05)。見表2。

2.3TF-MPs、DCP、NSE診斷胃癌患者血液高凝狀態的ROC曲線分析 TF-MPs、DCP、NSE診斷胃癌患者血液高凝狀態的效能見表3和圖1。

表2 胃癌患者血液高凝狀態的危險因素分析

表3 TF-MPs、DCP、NSE診斷胃癌患者血液高凝狀態的效能

圖1 TF-MPs、DCP、NSE診斷胃癌患者血液高凝狀態的ROC曲線

3 討 論

血液高凝狀態也叫血栓前狀態，表現為止血與抗血栓平衡狀態失調，凝血功能增強，易形成血栓。血液高凝狀態存在于諸多疾病的發展過程中，可遺傳或后天獲得。根據血液高凝狀態的病理機制，可分為原發性和繼發性血液高凝狀態，后者在臨床上非常常見[7]。據統計，15%左右的腫瘤患者在疾病發展過程中存在顯性的靜脈血栓栓塞。尸檢發現腫瘤患者血栓形成的發生率更高，已成為惡性腫瘤患者死亡的第二大原因[8]。因此，及時診斷和糾正血液高凝狀態對提高惡性腫瘤患者的生存率具有十分重要的臨床意義。

組織因子以微粒為載體形成TF-MPs，與絲氨酸蛋白酶因子Ⅶ/Ⅶa結合形成雙分子復合物，在凝血因子Ⅷ的作用下激活凝血因子Ⅹ轉化為凝血因子Ⅹa，將凝血酶原轉化為凝血酶，在血栓形成中起著非常重要的作用[9]。NSE是糖酵解酶烯醇化酶的細胞特異性同工酶，分布于神經元和神經內分泌細胞。在胃腸道和胰腺神經內分泌腫瘤患者的血清中升高，對上述疾病的診斷和預后評估有重要的臨床意義[10]。然而，目前很少有關于NSE與胃癌血液高凝狀態的研究。與正常凝血酶原相比，DCP的γ-羧基谷氨酸結構中谷氨酸殘基不能完全羧基化為γ-羧基谷氨酸，使其失去正常的凝血功能[11]。

本研究結果顯示，高凝組的TF-MPs、DCP、NSE水平均高于非高凝組(P<0.05)，提示TF-MPs、DCP、NSE水平對胃癌患者的血液高凝狀態有一定的影響，進一步回歸分析結果發現，TF-MPs、DCP、NSE水平升高為胃癌患者血液高凝狀態的獨立危險因素(P<0.05)，提示上述指標可作為預測胃癌患者血液高凝狀態的指標。TF-MPs是組織因子和微粒的組合，在結合后，其開始產生凝血級聯反應，這在外源性凝血途徑中非常重要。在健康人體內，游離組織因子水平很低，促凝活性很弱；當組織因子和微粒結合時，提供了一個帶負電荷的磷脂酰絲氨酸的反應平臺，組織因子的促凝活性大幅度提升，體內促凝-抗凝平衡被打破，出現血液高凝狀態[12]。在腫瘤合并靜脈血栓栓塞的研究中，發現體內存在高水平的TF-MPs[13]。在正常狀態下，凝血酶原由肝細胞微粒體的內質網產生，其前體的近N端功能區域有10個谷氨酸殘基，在γ-谷氨酰羧化酶的作用下轉化為γ-羧化谷氨酸，即形成具有凝血功能的凝血酶原，這一過程需維生素K的參與。當維生素K缺乏或谷氨酰羧化酶的功能減弱時，這種未羧化的谷氨酸殘基可大量產生并釋放入血[14]。臨床檢測到的DCP正是這種凝血酶原前體，不具有凝血功能。DCP產生越多，患者的凝血功能越差[15]。此外，有研究發現，NSE與活化部分凝血活酶時間、D-二聚體水平呈正相關[16]。ROC曲線分析結果顯示，TF-MPs、DCP、NSE診斷胃癌患者血液高凝狀態的AUC均大于0.9，說明上述指標對于診斷胃癌患者血液高凝狀態具有較高的準確性。

綜上所述，處于血液高凝狀態的胃癌患者TF-MPs、DCP、NSE水平會升高，且上述指標對于診斷胃癌患者血液高凝狀態具有較高的準確性。