吉林烏頭和龍船烏泡合劑對正常大鼠的痛覺調節作用

王雪純，付立波，呂 航，彭佳琪,李佳林，朱妮娜

(長春師范大學生命科學學院，吉林 長春 130032)

根據國際疼痛學會(IASP)的定義，疼痛是一種由于實際的或是潛在的組織損傷導致的不好的感覺和情緒情感體驗，或者是與此類似的經歷[1]。目前一般通過藥物來達到鎮痛效果，阿片類藥物的作用效果強，但具有許多不良反應，有極強的成癮性，可能會對機體造成不可逆的傷害[2]，因此尋找無依賴性的鎮痛藥物迫在眉睫。而中草藥的鎮痛作用歷史悠長，許多中藥材能起到一定的鎮痛作用且副作用較小。

龍船烏泡又稱過江龍，具有舒筋活絡，治療跌打損傷及筋骨疼痛的功效[3]；吉林烏頭同樣具有散寒止痛，祛風除濕的功效，在民間常用來治療風濕性關節炎、牙痛、神經痛、心腹冷痛等癥[4]。研究表明，吉林烏頭主要成分有生物堿類、黃酮類、多糖等[5]。但至今尚未發現有關于吉林烏頭和龍船烏泡對痛覺調節的研究。因此本實驗采用灌胃及行為學測痛等方法，探討吉林烏頭和龍船烏泡對痛覺的作用，以期能對臨床鎮痛藥物的開發提供理論依據。

1 材料

1.1 實驗動物與藥品

使用雄性Wistar大鼠6只，長春億斯實驗動物技術有限公司提供。購買后6只大鼠單獨喂養，保證大鼠自由進水進食，室內溫度保持適宜和穩定，維持實驗室的安靜，確保實驗大鼠穩定的生活條件。

吉林烏頭，龍船烏泡購買于恩春堂大藥店；生理鹽水產自遼寧明康制藥有限公司。

1.2 實驗儀器

主要實驗儀器有灌胃針(深圳瑞沃德公司)，YLS-6B智能熱板儀(上海曼普生物公司)；YLS-3E電子壓痛儀(意大利UGO)。

2 方法

2.1 水煮液母液及不同質量濃度溶液的制備

稱取龍船烏泡和吉林烏頭各10 g，分別放在陶瓷缸中，先將吉林烏頭煎15 min，然后將吉林烏頭和龍船烏泡分別熬煮3次，取水煮液的母液，再用母液分別配制成5、10、20 mg/mL的合劑。

2.2 行為痛覺測試

行為痛覺測試包括熱板測試和壓板測試。在實驗之前對正常雄性大鼠進行一周的熱板和壓板測試訓練，6只正常雄性大鼠都進行相同訓練，每天3 輪，每輪5 次，以此減少大鼠的應激性和實驗誤差。經過7天訓練后，第8天注射生理鹽水作為對照，之后用不同質量濃度的混合液進行灌胃。在每次灌胃之前需要先測3次基礎HWL，作為基礎值。灌胃之后在第5、10、15、20、30、45、60 min進行行為學測痛。

2.3 數據處理

收集整理數據，用實驗前測得的3次HWL值的平均值作為基礎值，實驗中測得的結果與其比較，計算HWL的變化百分比。實驗數據以“均值±標準誤差”(x±s)的形式表示，用SPSS 22.0軟件分析數據，采用單因素方差分析方法進行組間比較和分析。

3 實驗結果

生理鹽水與不同質量濃度(5、10、20 mg/mL)合劑灌胃后大鼠 HWL的變化百分比見表 1、表 2和表3。

表1 灌胃5 mg/mL合劑大鼠的HWL的影響

由表1可知，與生理鹽水(對照組)相比，5 mg/mL合劑灌胃大鼠的左爪熱刺激HWL具有顯著差異(P<0.05)，右爪熱刺激及機械刺激HWL無差異(P>0.05)；大鼠右爪機械刺激HWL顯著差異(P<0.05)。

表2 灌胃10 mg/mL合劑大鼠的HWL的影響

由表2可知，與生理鹽水(對照組)相比，10 mg/mL合劑灌胃大鼠的左爪熱刺激HWL具有顯著差異(P<0.05)，右爪熱刺激HWL具有極顯著差異(P<0.01)；大鼠左爪機械刺激HWL具有極顯著差異(P<0.01)，右爪機械刺激HWL具有顯著差異(P<0.05)。

表3 灌胃20 mg/mL合劑對大鼠HWL的影響

由表3可知，與生理鹽水(對照組)相比，20 mg/mL合劑灌胃大鼠左爪熱刺激HWL具有顯著差異(P<0.05)，右爪熱刺激HWL具有極顯著差異(P<0.01)；大鼠左爪和右爪機械刺激HWL均具有顯著差異(P<0.05)。

4 討論

本實驗結果表明，與灌生理鹽水相比，吉林烏頭和龍船烏泡混合水煮液灌胃后，大鼠HWL明顯增加，因此合劑對大鼠確實起到了鎮痛作用，且鎮痛效果在15 min左右最為明顯，具有時間上的規律性。本實驗還發現，對大鼠灌胃5、10、20 mg/mL 混合水煮液的作用效果不同，大鼠 HWL 也有顯著差異。通過觀察數據可以得出，隨著混合水煮液質量濃度的逐漸增加，大鼠HWL 也逐漸增加，說明吉林烏頭和龍船烏泡合劑對正常大鼠鎮痛作用具有劑量依賴性。

許多烏頭類中藥材例如川烏以及附子等同樣具有一定程度的鎮痛功能，能夠有效緩解疼痛，陳紹斌[6]用烏頭桂枝散采用熱敷痛點的方法，治療患者坐骨神經痛，發現效果良好。進一步研究發現，烏頭類藥材中的烏頭堿、草烏甲素[7]、粗莖烏頭堿A等生物堿有良好鎮痛作用而且不會具有成癮性[8]。另外有動物實驗[9]表明，烏頭堿和次烏頭堿能夠明顯減少足腫脹大鼠模型的抽搐次數而且能減輕疼痛，其鎮痛機制與中樞神經細胞膜Na+通道開放密切相關。可能由于吉林烏頭含有烏頭堿等多種生物堿，能對正常大鼠起到一定的鎮痛作用。中藥復方還可以通過調控5-羥色胺(5-HT)含量及其受體的表達等多種途徑發揮鎮痛作用[10]。而龍船烏泡的相關研究較少，與鎮痛作用相關的有效成分及鎮痛調控途徑仍需進一步探究。本實驗表明吉林烏頭和龍船烏泡合劑具有一定的鎮痛作用，對鎮痛藥物的開發和研究提供初步理論基礎。