重慶酉陽縣山羊及人布魯氏菌抗體監(jiān)測與分析

白運(yùn)川，張海燕，郭秋枚，何承容，楊 柳，許國洋

(1.重慶市酉陽縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會，重慶 酉陽 409800；2.重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 榮昌 402460 ;3.國家動物疫病重慶觀測實(shí)驗(yàn)站，重慶 榮昌 402460)

布魯氏菌病(Brucellosis，以下簡稱布病)是由布魯氏菌屬細(xì)菌引起的一種人獸共患傳染病，易感動物主要包括牛、羊、豬，偶爾感染鹿、狗和其他哺乳類動物，也可感染人[1-2]。布魯氏菌主要包括6個種19個生物型，其中，羊種布魯氏菌有1型、2型和3型。動物感染該病后，母畜主要表現(xiàn)為胎膜發(fā)炎、不孕不育、流產(chǎn)、死胎等，頭胎流產(chǎn)率高達(dá)50%～80%，公畜主要出現(xiàn)睪丸炎、附睪炎、關(guān)節(jié)炎等癥狀[3-4]。人感染布病主要表現(xiàn)為發(fā)熱多汗、肝脾腫大、神經(jīng)痛和關(guān)節(jié)痛，也可引起生殖障礙，同時引發(fā)全身多系統(tǒng)并發(fā)癥，導(dǎo)致喪失勞動力等[5]。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將該病列為B 類傳染病，是必須報(bào)告疾病，而我國將其列為乙類傳染病[6]。該病流行廣泛，覆蓋面積大，已有160 多個國家和地區(qū)出現(xiàn)人和動物布病的發(fā)生和流行[7]，其嚴(yán)重危害養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展和公共衛(wèi)生安全。酉陽土家族苗族自治縣位于重慶市東南部，屬武陵山區(qū)腹地，具有豐富的資源和良好的生態(tài)優(yōu)勢，為畜牧業(yè)發(fā)展提供了有利條件，其中，養(yǎng)羊業(yè)已成為酉陽縣支柱產(chǎn)業(yè)之一。近年來，重慶多個地區(qū)偶有布病流行，多數(shù)報(bào)道是關(guān)于動物單個偶發(fā)病例或是人間布病的監(jiān)測[8-11]，而關(guān)于動物和人布病的長期性監(jiān)測相關(guān)報(bào)道較少，且在2015 年發(fā)現(xiàn)酉陽縣有布病的流行趨勢，因此，本試驗(yàn)針對易感羊群和風(fēng)險人群開展布病的長期性監(jiān)測和凈化分析，為酉陽縣布病的科學(xué)防控提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 布魯氏菌虎紅平板試驗(yàn)抗原，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；布魯氏菌競爭酶聯(lián)免疫吸附法(cELISA)抗體檢測試劑盒，購自武漢科前生物股份有限公司。

1.2 樣本的采集 對酉陽縣布病易感羊群和風(fēng)險人群進(jìn)行抽樣調(diào)查，羊群進(jìn)行頸前靜脈采血，養(yǎng)殖相關(guān)人員進(jìn)行肘前靜脈采血，采集血液于37 ℃靜置30 min，3 000 r/min離心10 min，收集血清，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 布病的初篩 使用虎紅平板凝集試驗(yàn)進(jìn)行初篩。取30 μL布魯氏菌虎紅平板試驗(yàn)抗原滴加在潔凈的載玻片上，再依次滴加血清樣本，用槍頭攪動使血清和抗原混合均勻，觀察凝集情況，并設(shè)陰性和陽性對照。結(jié)果判定：當(dāng)陰性血清對照不出現(xiàn)凝集(-)，陽性血清對照出現(xiàn)凝集(+)時，則試驗(yàn)成立，可以進(jìn)行結(jié)果判定，否則試驗(yàn)應(yīng)重做；待檢血清在室溫條件下4 min內(nèi)出現(xiàn)沙粒狀的凝集現(xiàn)象為陽性，出現(xiàn)均勻的粉紅色現(xiàn)象為陰性。

1.4 布病的確診 使用cELISA對初篩陽性的病例進(jìn)行驗(yàn)證。按照布魯氏菌cELISA抗體檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作，并對個體陽性率和群體陽性率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果判定依據(jù)：抑制率(PI)≥30%判為陽性，PI<30%判為陰性。PI計(jì)算公式：PI/%=(空白對照OD450 nm-檢測樣品OD450 nm)/空白對照OD450 nm×100%。對照測定值要求：無血清空白對照OD450 nm為0.75～2.0；強(qiáng)陽性對照血清PI為80%～100%；陰性對照血清PI為-15%～15%。人初篩陽性樣本送重慶市疫病預(yù)防控制中心進(jìn)行確診。

1.5 布病分布區(qū)域情況分析 依據(jù)布病檢測結(jié)果，分析2015—2021年布病在不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)的累計(jì)檢出量，明確布病主要流行鄉(xiāng)鎮(zhèn)。

1.6 布病的凈化 按照農(nóng)業(yè)部《高致病性禽流感等14個動物疫病防治技術(shù)規(guī)范》[12]要求，對布病陽性病例進(jìn)行撲殺，根據(jù)具體情況對同群畜采取持續(xù)凈化或全群撲殺措施，統(tǒng)計(jì)布病陽性群體發(fā)展趨勢，分析布病凈化成效，并按照農(nóng)業(yè)部《病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范》[13]要求對撲殺的動物及污染物進(jìn)行無害化處理。

2 結(jié)果

2.1 布病的初篩 通過對采集的30 472份山羊血清樣本進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)共1 025份樣本初篩為陽性，最早出現(xiàn)時間為2015年；采集的1 442份人血清樣本中，22 份樣本為陽性，人感染布病最早出現(xiàn)時間為2017年。

2.2 布病的確診 利用cELISA對初篩陽性樣本進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)共有853份山羊血清樣本為陽性，22份人血清樣本為陽性，結(jié)果見表1。2015—2018年羊布病檢出率呈明顯上升趨勢，2019年有所下降，2020年陽性率高達(dá)7.9%，而2020年人的布病檢出率也高達(dá)2.5%，結(jié)果見圖1。

圖1 布病陽性率分析

表1 酉陽縣 2015—2021年山羊和人布病檢測情況

2.3 布病分布區(qū)域情況分析 通過對不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)2015—2021年期間布病陽性病例統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)板溪鎮(zhèn)、龍?zhí)舵?zhèn)、木葉鄉(xiāng)、楠木鄉(xiāng)、官清鄉(xiāng)、麻旺鎮(zhèn)和花田鄉(xiāng)累計(jì)檢出量較高，其中板溪鎮(zhèn)檢出量最高，共478 份陽性病例，結(jié)果見圖2。

圖2 不同鄉(xiāng)/鎮(zhèn)累計(jì)布病陽性檢出量分析

2.4 布病的凈化 通過開展羊群布病凈化，2015—2021年共對417個羊群進(jìn)行監(jiān)測，其中41個羊群出現(xiàn)陽性病例，共撲殺1 376只山羊，結(jié)果見表2；通過布病的持續(xù)凈化，布病群體陽性率整體呈下降趨勢，由40.0%(2015 年)降至3.8%(2021 年)，結(jié)果見圖3。

表2 酉陽縣2015—2021年山羊布病凈化處置情況

圖3 布病群體陽性率分析

3 討論

酉陽縣在2009—2014年間抽樣檢測中沒有發(fā)現(xiàn)布病陽性病例，本試驗(yàn)結(jié)果顯示，自2015年發(fā)現(xiàn)有山羊感染布病后，每年都有新發(fā)陽性病例，2017 年首次發(fā)現(xiàn)人的布病陽性感染病例，山羊和人布病個體陽性率最高分別為7.9%和2.5%。2015—2021年，本課題組先后在酉陽縣13 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)檢測出布病陽性病例，其中板溪鎮(zhèn)山羊累計(jì)陽性檢出量最高，共478 份陽性病例；2015—2020年山羊布病陽性率雖然在2019 年下降至2.5%，但整體呈逐年上升趨勢，盡管布病凈化同時開展，也未能有效控制疫情發(fā)展，可能與監(jiān)測的區(qū)域范圍小和凈化淘汰速度慢有關(guān)；通過加大檢測范圍和力度，嚴(yán)格執(zhí)行凈化撲殺，2021 年山羊布病檢出率下降至1.6%，2018—2021年群體陽性率由17.5%降至3.8%；在篩查過程中發(fā)現(xiàn)，感染群體數(shù)有所減少，但感染群體中個體陽性率仍然很高，導(dǎo)致全群撲殺的群體個數(shù)較多。對個體陽性率低的感染群體僅實(shí)施陽性病例凈化撲殺時，1個群體往往要全檢4、5 次，耗時1年才可能達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)，凈化失敗風(fēng)險較大。2018年后，本課題組對經(jīng)全群采樣檢測后個體陽性率高的陽性群體(經(jīng)驗(yàn)值5%以上)，均采取全群撲殺方式進(jìn)行清除和無害化處理。此外，人感染布病具有職業(yè)特性，大部分與畜牧獸醫(yī)有關(guān)，而與年齡、性別等無關(guān)[14]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，2017—2021年從重點(diǎn)人群中檢出布病陽性病例22 份(包括臨床發(fā)病和未發(fā)病的)，檢出率高達(dá)1.5%，主要包括基層養(yǎng)殖人員、肉羊屠宰加工人員和羊販運(yùn)人員。

同時，本試驗(yàn)在布病凈化過程中發(fā)現(xiàn)諸多制約因素，主要包括：(1)本縣山區(qū)丘陵較多、養(yǎng)殖區(qū)域分散且羊養(yǎng)殖模式多樣，開展羊布病篩查、凈化工作時，難以實(shí)現(xiàn)養(yǎng)殖群體監(jiān)測和凈化的全覆蓋；(2)基層養(yǎng)殖人員老齡化嚴(yán)重，養(yǎng)殖技術(shù)缺乏，對布病認(rèn)識不足，有疫情時未能及時采取科學(xué)、有效措施；(3)養(yǎng)殖相關(guān)人員法制意識薄弱，過度看重養(yǎng)殖成本，當(dāng)疫情發(fā)生時存在瞞報(bào)僥幸心理，導(dǎo)致布病的擴(kuò)散，加大人員感染布病風(fēng)險。因此，因地制宜的防控措施是布病凈化的關(guān)鍵。首先，應(yīng)嚴(yán)防染疫動物的輸入，杜絕染疫動物流動，防止疫情在酉陽的發(fā)生和擴(kuò)散；其次，要加強(qiáng)宣傳培訓(xùn)，提高養(yǎng)殖相關(guān)人員法律意識，對羊及其產(chǎn)品的密切接觸人員要加強(qiáng)生物安全知識培訓(xùn)，提升自我防護(hù)水平；然后，相關(guān)部門應(yīng)加強(qiáng)行政監(jiān)督執(zhí)法力度，嚴(yán)厲查處養(yǎng)殖、流通、屠宰等各環(huán)節(jié)的違法違規(guī)行為。同時，應(yīng)做好日常監(jiān)測，對布病陽性病例及時采取有效防控措施。

農(nóng)業(yè)部聯(lián)合衛(wèi)計(jì)委組織制定的《國家布魯氏菌病防治計(jì)劃(2016—2020 年)》[15]將全國劃分為三類區(qū)域，重慶被劃分為二類區(qū)域，二類區(qū)域劃定依據(jù)是本地有新發(fā)人間病例發(fā)生且報(bào)告發(fā)病率低于或等于1/10萬或畜間疫情未控制縣數(shù)占總縣數(shù)30%以下。依據(jù)2015—2021年布病陽性病例統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，酉陽縣重點(diǎn)人群人間布病累積發(fā)病率已達(dá)1.5%，雖然重慶屬于二類區(qū)域，但酉陽縣山羊和人的布病防控形勢依然嚴(yán)峻。盡管2021年酉陽縣布病陽性個體和群體陽性率整體均有所下降，布病凈化初步取得成效，但凈化仍然不徹底。總體來看，酉陽縣離實(shí)現(xiàn)凈化、根除布病的目標(biāo)還有距離，還需加強(qiáng)布病的常態(tài)化監(jiān)測與防控。