不同炮制方法對(duì)蘭州百合化學(xué)成分的影響＊

金 月，張 巖，趙海鷹，戴浩恩，史巧霞

（甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑中心，甘肅 蘭州 730000）

百合來源于多年生植物卷丹（Lilium lancifolium Thunb），百合（L.brouni FE.Broun Var Viridulum Baker）和細(xì)葉百合（li Pumilum DC）的干燥肉質(zhì)鱗葉，其性味甘、寒，歸心、肺經(jīng)[1]，具有養(yǎng)陰清肺，清心安神之功效。臨床主要用于治療咳嗽吐血，虛煩不安，心慌驚悸等病癥[2]。據(jù)報(bào)道，百合鱗莖主要含黃酮、總皂苷、多酚、多糖等成分[3]，其中酚類具有抗菌、消炎、降壓、清熱解毒、利尿等作用，在抗氧化、抗癌方面有顯著效果，皂苷具有抗菌、抗炎、抗抑郁、抗氧化等作用，多糖具有抗腫瘤、提高免疫力、抗疲勞、降血糖等多種作用[4]。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)不同炮制方法會(huì)引起百合炮制前后化學(xué)成分如百合多糖、總磷脂等有效成分的變化，這會(huì)改變百合的藥理作用和臨床療效。文獻(xiàn)記載其主要炮制方法為蒸制、蒸焙、蜜制等方法[5]，以期改變百合的藥性及臨床療效。

百合品種較多，其中蘭州百合為百合科植物蘭州百合（Lilim dar）的干燥肉質(zhì)鱗葉，主產(chǎn)甘肅蘭州、臨洮、臨夏等地[6]。蘭州百合作為中藥材百合的甘肅省地方習(xí)用品，收載于2009版《甘肅省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》。蘭州百合是全國唯一食用甜百合，也是蘭州市乃至甘肅省的特色產(chǎn)業(yè)，蘭州百合已有400年的種植歷史，其味道甘甜鮮美，有“蘭州百合甲天下”的美譽(yù)[7]。目前對(duì)蘭州百合的研究主要集中在栽培、管理、采挖及加工等技術(shù)的研究，藥用方面的研究也集中在化學(xué)成分、藥理作用方面，缺乏炮制工藝方面的研究[8]。因此本文以不同方法炮制百合，并采用不同分析方法探討蘭州百合炮制后總黃酮、總皂苷、多酚、多糖等成分的含量變化，以期為蘭州百合的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

UV-3300型紫外可見分光光度計(jì)（上海美普達(dá)儀器有限公司）；電子天平（CPA225D，Sartorius公司）；數(shù)控超聲波清洗器（KQ-500VDE型，昆山市超聲儀器有限公司）；數(shù)顯恒溫水浴鍋（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；離心機(jī)（長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（SHB-3A，鄭州杜甫儀器廠）。

蘆丁對(duì)照品（批號(hào)B20771；上海源葉生物科技有限公司），沒食子酸對(duì)照品（批號(hào)111539- 200001；中國食品藥品檢定研究院），薯蕷皂苷元對(duì)照品（批號(hào)110831- 201906；中國食品藥品檢定研究院），無水葡萄糖對(duì)照品（批號(hào)BW4009；上海源葉生物科技有限公司）

1.2 實(shí)驗(yàn)藥材

蘭州百合，購自七里河區(qū)西果園，經(jīng)醫(yī)院主任中藥師鑒定為百合科植物蘭州百合（Lilim dar）的干燥肉質(zhì)鱗葉。藥用百合購自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房，為百合（Lilium brownii F.E.Brown Var.viridulum Baker）的干燥肉質(zhì)鱗葉。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 蘭州百合的不同炮制品制備

取蘭州凈百合適量，按不同炮制方法炮制后測定水分，具體見表1。

表1 蘭州百合不同炮制方法及水分測定結(jié)果

2.2 不同標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

黃酮類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密稱取蘆丁對(duì)照品5.86 mg于25 mL容量瓶中，得濃度為0.234 4 mg/mL的對(duì)照品溶液，精密移取0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL于10 mL容量瓶中，依次加入0.3 mL 5%NaNO2，5 min后再加入0.3 mLAl（NO3），3～5 min后再加入2.0 mL NaOH，50%乙醇定容至刻度。于510 nm下測定A值，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。類似的，按不同方法制備總皂苷、多酚、多糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線，具體見表2。

表2 蘭州百合中不同化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 精密度考察

取不同對(duì)照品溶液重復(fù)測定6次，記錄A值，不同對(duì)照品的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），蘆丁、薯蕷皂苷元、沒食子酸、無水葡萄糖測得值RSD%分別為2.67%、2.99%、0.89%、0.83%，表明精密度良好。

2.3.2 穩(wěn)定性考察

將樣品分別按各有效部位溶液制備方法制備供試品溶液，各樣品分別于0 h、4 h、8 h、12 h、24 h測定A值，總黃酮、總皂苷、多酚、多糖含量RSD 值分別為1.08%、0.90%、2.42%、1.32%。結(jié)果表明各樣品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.3 重復(fù)性考察

將樣品分別按各有效部位溶液制備方法制備供試品溶液，各平行制備6份，測定A值，總黃酮、總皂苷、多酚、多糖含量RSD值分別為1.61%、1.57%、2.22%、0.57%。結(jié)果表明各供試品溶液重復(fù)性良好。

2.3.4 加樣回收率

精密稱取已知含量的樣品各6份，分別精密加入樣品中蘆丁、沒食子酸、薯蕷皂苷元、無水葡萄糖對(duì)照品含量的100%對(duì)照品溶液，制備各供試品溶液，測定A，計(jì)算平均回收率及RSD。總黃酮、總皂苷、多酚、多糖平均回收率分別為98.3%、97.7%、98.8%、97.1%，RSD值分別為1.98%、2.71%、2.14%、1.42%。

2.3.5 水溶性浸出物

參照2020版《中國藥典》，取各供試品約2 g，精密稱定，置錐形瓶中加水50 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h，連接冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h，放冷，取下錐形瓶，密塞，再次稱重，用水補(bǔ)足減失重量，搖勻抽濾，量取續(xù)濾液20 mL，置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿上，水浴蒸干，105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量（%）。

2.4 各成分的實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果

連續(xù)測定3批，測定結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，不同炮制品蘭州百合中的各類化合物的結(jié)果見表3。

表3 不同炮制品蘭州百合中的各類化合物的結(jié)果

2.5 方差分析及相關(guān)性分析

為清晰比較蘭州百合5種不同炮制方法、藥用百合之間化學(xué)成分的差異性，本實(shí)驗(yàn)采用方差分析（ANOVA）進(jìn)行兩兩比較，并繪制柱狀圖，見圖1，相關(guān)性分析見表4。

表4 樣品中化學(xué)成分含量的相關(guān)性分析

圖1 不同炮制品蘭州百合中化學(xué)成分的含量比較

由上述結(jié)果可知，總黃酮含量排序?yàn)椋壕普簦舅幱冒俸希久壑耍竞娓桑菊舯海緯窀?；總皂苷含量排序?yàn)椋好壑耍菊舯海竞娓桑緯窀桑揪普簦舅幱冒俸?；多酚含量排序?yàn)椋好壑耍舅幱冒俸希揪普簦緯窀桑菊舯海竞娓?；多糖含量排序?yàn)椋簳窀桑竞娓桑久壑耍揪普簦菊舯海舅幱冒俸?；水溶性浸出物含量排序?yàn)椋好壑耍揪普簦菊舯海竞娓桑緯窀桑舅幱冒俸?。由兩兩比較結(jié)果可知，黃酮含量，蜜炙與烘干、藥用品間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；多酚含量，曬干與蒸焙、酒蒸、烘干間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），酒蒸與曬干、蒸焙、藥用品間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），烘干與曬干、蒸焙間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），藥用品與蜜炙、酒蒸無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；其余皂苷、多糖、水溶性浸出物含量各組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

利用相關(guān)分析去研究黃酮、皂苷、多酚、多糖、水溶性浸出物之間的相關(guān)關(guān)系，使用Pearson相關(guān)系數(shù)去表示相關(guān)關(guān)系的強(qiáng)弱情況。具體分析可知：黃酮與多糖之間呈現(xiàn)出顯著性（P=0.003＜0.01），相關(guān)系數(shù)值是-0.657，意味著黃酮與多糖之間有著負(fù)相關(guān)關(guān)系。皂苷與水溶性浸出物之間全部均呈現(xiàn)出顯著性（P=0＜0.01），相關(guān)系數(shù)值分別是0.831，意味著皂苷與水溶性浸出物之間有著正相關(guān)關(guān)系。其他項(xiàng)之間并無相關(guān)關(guān)系。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

百合在我國資源豐富，作為藥食兩用的中藥已在人們的日常餐桌和中醫(yī)臨床上廣泛應(yīng)用，用不同的炮制方法炮制百合，不僅可以擴(kuò)大百合的臨床使用，還可以更深入了解其有效成分的變化。本文采用曬干、烘干、蜜炙、蒸焙、酒蒸等傳統(tǒng)炮制工藝對(duì)蘭州百合進(jìn)行炮制，并與藥用百合對(duì)比，研究其不同炮制品百合中的總黃酮、總皂苷、多酚、多糖等有效成分變化以及水溶性浸出物的差異，發(fā)現(xiàn)不同炮制品中的各類有效成分含量均有所變化，結(jié)果顯示總黃酮含量以酒蒸百合最高，總皂苷、多酚、水溶性浸出物含量均以蜜炙百合最高，而曬干百合中的多糖含量最高。

另一方面采用相關(guān)性分析方法發(fā)現(xiàn)黃酮與多糖之間呈現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，黃酮與多糖之間有負(fù)相關(guān)關(guān)系,即黃酮含量越高，多糖含量越低。皂苷與水溶性浸出物之間呈現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，皂苷與水溶性浸出物之間有正相關(guān)關(guān)系，即水溶性浸出物越高，皂苷含量越高。其他項(xiàng)之間并無相關(guān)關(guān)系。以上研究為蘭州百合的炮制提供理論依據(jù)，也為百合在中醫(yī)臨床的應(yīng)用提供參考。