通過糞便標本檢測診斷幽門螺桿菌感染的研究進展

呂凱琪，岳 雷，沈玉欽，孫迎潮，劉 輝，胡偉玲，★

（1.紹興文理學院，浙江 紹興 312000；2.浙江大學附屬邵逸夫醫院，浙江 杭州 310000 ；3.南昌大學醫學院，江西 南昌 330000）

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp) 與慢性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜淋巴瘤及胃癌的發生密切相關, 它被WHO 列為Ⅰ類致癌物質[1-2]。最新的報道顯示，全球的Hp 平均感染率為44.3%，發達國家與發展中國家的Hp 平均感染率分別為34.7% 和50.8%。第五次全國幽門螺桿菌感染處理共識報告中提出，Hp陽性患者需進行Hp 根除治療。而準確診斷Hp 感染是進行Hp 根除治療的前提。目前，Hp 感染的診斷方法包括侵入性和非侵入性兩大類。借助內鏡的侵入性Hp 檢測會增加受檢者的痛苦，其臨床接受度較低，且存在適應人群的限制，不適用于相關疾病的普查。常用的非侵入性檢查包括尿素呼吸試驗(UBT)、血清學試驗和對糞便、尿液、唾液等身體物質成分進行分析等。其中UBT、血清學試驗等已得到廣泛應用。但進行UBT 需要使用質譜儀、紅外光譜儀和閃爍計數器等儀器，并且需要受檢者停用質子泵抑制劑2 ～4周，檢測前還需禁食。由于進行Hp 根除治療后相關抗體水平仍會保持在較高的狀態，對接受Hp 根除治療后的患者進行血清學試驗的結果并不能反映其Hp的感染狀態，故血清學試驗不適用于Hp 根除治療后的復查。Hp 可經由糞- 口或口- 口傳播, 它的某些蛋白能夠使其避免遭受胃酸的侵蝕并隨著胃黏膜上皮細胞的脫落與糞便一起排出體外。這使得通過糞便檢測Hp 成為可能。進行糞便Hp 檢測前，受檢者無需口服藥物和禁食，且檢測結果不受質子泵抑制劑的影響。該檢測方法具有操作便捷、費用低、敏感度高等優點，適用于大眾群體的篩查。在本文中，筆者主要是對通過糞便標本檢測診斷Hp 感染的研究進展進行綜述。

1 Hp 糞便抗原檢測

Hp 糞便抗原檢測(HpSA) 是目前臨床上應用較為廣泛的糞便Hp 檢測方法。我國的多中心研究顯示，用Hp 糞便抗原檢測診斷Hp 感染的敏感度為93,5%,特異度為94.2%, 準確率為93.3%。國外的薈萃分析顯示,用Hp 糞便抗原檢測診斷Hp 感染的總體敏感度、特異度分別為94%(95%CI:93-95) 和97%(95%CI:96-98)[3]。有研究者[4]采用受試者工作特征曲線(ROC) 分析了Hp 糞便抗原檢測在診斷Hp 感染中的應用價值。結果顯示，用Hp 糞便抗原檢測診斷Hp 感染的敏感度、特異度、準確率分別為92.9%、90.5% 及92.2%，ROC 曲線下面積為(0.967±0.019)。這表明，Hp 糞便抗原檢測在診斷Hp 感染中的應用價值較高。目前，對于糞便中Hp 抗原進行檢測的方法已成為臨床上研究的熱點。

1.1 酶免疫法（EIA）

采用酶免疫法進行Hp 糞便抗原檢測是一種操作簡單方便、準確度高、費用低的非侵入性檢測方法。在一項評估用Hp 多克隆酶免疫分析糞便抗原檢測診斷Hp 感染效果的前瞻性研究中，研究者招募了555 例接受常規檢查的患者進行研究。研究結果顯示，在最佳臨界值（光密度0.160）下，該檢測呈現出高水平的敏感度(93.1%)、特異度(94.6%) 和準確率(93.8%)，且在萎縮性胃炎、腸上皮化生存在的情況下及40 歲以上患者中仍可顯示出良好的診斷性能[5]。基于多克隆抗體的酶免疫分析法是檢測糞便標本中Hp 抗原的有效方法。在2005 年，Manes G 等[6]利用其新開發出的一種單克隆酶免疫Hp 糞便抗原測定法（FemtoLab Hp Connex 法）對231 例接受標準三聯Hp 根除治療后4 ～8 周的患者進行Hp 感染的診斷。結果顯示，用FemtoLab Hp Connex 法對接受標準三聯Hp 根除治療后4 ～8 周的患者進行Hp 感染診斷的敏感度為88.3%，特異度為94.8%，陽性預測值和陰性預測值分別為87.4% 和95.2%。這表明，FemtoLab Hp Connex 法適合用于Hp 感染根除治療后的感染評估。一項系統評價和薈萃分析顯示，使用基于單克隆抗體的酶免疫Hp 糞便抗原檢測可有效診斷兒童Hp 感染[7]。日本研發的Testmate Pylori 抗原(TPAg EIA) 試劑盒和Testmate 快速幽門抗原(Rapid TPAg) 試劑盒均可用于診斷Hp 感染[8]。有研究顯示，用H. PYLORI QUIK CHEK ?試劑盒和H. PYLORI CHEK ?試劑盒診斷Hp 感染的敏感度分別為92% 和91%[9]。

1.2 免疫層析法

在2005 年，TrevisaniL 等[10]對105 例患者進行了糞便中Hp 抗原的檢測，分別使用基于免疫層析法的快速免疫測定試劑盒(ImmunoCard STAT) 和基于酶免疫法的實驗室酶免疫測定試劑盒(Hp StAR) 對其糞便標本進行檢測。結果顯示，用ImmunoCard STAT診斷Hp 感染的敏感度和特異度分別為85% 和93%，用Hp StAR 診斷Hp 感染的敏感度和特異度分別為88% 和100%。Kalach N 等[11]對158 例Hp 感 染 患兒進行研究的結果顯示，基于免疫層析法的Hp 糞便抗原檢測是診斷兒童Hp 感染的可靠手段（診斷的敏感度為91.3%，特異度為97%）。有研究表明，用ImmunoCard 快速Hp 糞便抗原檢測診斷Hp 感染的準確率可達到90% 以上[12-13]。

2 基于分子生物學的Hp 糞便檢測

在20 世紀90 年代初，有研究者開始將PCR 技術用于Hp 的診斷。目前，Hp 的多種主要毒力基因〔如尿素酶(A.B.C.D) 基因、16srDNA 基因、空泡毒素基因(vacA) 及細胞毒素相關蛋白(cagA) 基因〕都已被成功克隆。研究者根據Hp 的不同靶基因設計出了相對應的引物，并建立了聚合酶鏈反應(PCR) 體系來對Hp 進行檢測[14]。PCR 具有極高的敏感度和特異度，能夠精確檢測到糞便標本中極微量的Hp 特異性基因。有研究指出，用PCR 檢測消化道出血患者的Hp 感染也能得出準確的結果，同時可對特定位點耐藥基因（如大環內酯類和喹諾酮類藥物、四環素、利福霉素、克拉霉素、阿莫西林及甲硝噠唑等藥物的耐藥基因）的突變進行檢測[15]。

2.1 磁性免疫PCR 技術(Immunomagneticseparation，IMS-PCR)

有研究指出，與常規PCR 技術相比，用IMSPCR 進行糞便Hp 基因檢測的敏感度較高。Enroth H等[16]的研究顯示，采用IMS-PCR 檢測糞便HpUreA基因的敏感度和特異度分別為61.4%、100%。MonteiroL 等[17]的 研 究 顯 示，采 用IMS-PCR 檢 測糞便HpUreA 基因的敏感度和特異度分別為80.9%、100%。在2019 年，陳麗麗等[18]開發了一種基于免疫磁珠（IMBs）技術的新型糞便Hp 基因檢測方法。實踐表明，用該方法檢測糞便Hp 基因的敏感度非常高。

2.2 套式-PCR 技術(Nested-PCR)

Bamford KB 等[19]在進行糞便標本Hp 檢測時，采用Nested-PCR 進行了2 次擴增處理，這在提高了檢測敏感度的同時，又降低了檢測的假陰性率。GramleyWA 等[20]對22 例研究對象的冷凍糞便樣本進行了DNA 提取，用16S rRNA 基因的通用引物進行擴增后對相同的糞便DNA 模板與Hp 16S rRNA 基因的特異性引物進行二次擴增和雜交，然后檢測Hp 基因。結果顯示，采用上述方法檢測糞便Hp 基因的敏感度和特異度分別為73% 和100%。?ELIGOVá B 等[21]為找到一種可靠的巢式PCRHp 檢測技術，使用針對16S 核糖體RNA(rRNA) 基因可變區的引物精心設計了巢式PCR，并用于檢測活檢組織、糞便和唾液中的Hp。隨后其將上述方法在來自同一個體的81 份臨床活檢組織、糞便和唾液樣本上進行了驗證。結果顯示，該巢式PCR 檢測可作為對具有基本設備實驗室中爭議樣本（出血患者或服用質子泵抑制劑患者的樣本）進行Hp 檢測的輔助方法。雖然PCR 檢測能快速、精確地檢出Hp，但其具有費用高、需使用特殊設備、不能區分活性生物體和死亡生物體（不能鑒別區分既往與現癥感染）等缺點。

3 基于培養法的Hp 糞便檢測

Hp 分離培養是最經典、最可靠的診斷Hp 的方法之一。糞便是一種容易獲得的標本, 臨床上很早就有對糞便中Hp 進行分離培養的報道。1994 年英國的一項研究表明，能夠從Hp 陽性患者的糞便中分離培養出Hp。這一發現意味著，Hp 感染可通過糞口途徑傳播[22]。1998 年加利福尼亞北部的一家醫院發現，從接受磷酸鈉導瀉前后的Hp 感染者的糞便中可分離培養出Hp[23]。這與DoreMP 等[24]的研究結果相符。但有研究指出，進行Hp 分離培養存在以下缺點：1）耗時耗力，Hp 是一種挑剔難養的細菌，其培養結果與培養環境密切相關；2）Hp 分離的敏感性在不同實驗室存在較大的差異；3）胃炎活動度、消化道出血、飲酒習慣、H2 受體拮抗劑和質子泵抑制劑的使用、抗菌藥物的使用等因素對培養結果均有影響[25]。

4 小結與展望

1996 年WHO 將Hp 列入人類五大生物致癌因素之一。大量的研究表明，Hp 不僅與多種消化道疾病密切相關，而且還與高血壓、冠心病、營養代謝相關疾病、皮膚病等有關。近年來，隨著臨床上對Hp 研究的不斷深入，Hp 感染與相關疾病的關系日益受到人們的重視[26]。準確、快速地檢出Hp 對相關疾病的早期預防、正確治療和復發預防具有重要的意義。糞便標本留取容易，相關Hp 檢測方法操作簡便、省時、無創，適合在常規檢查中應用，尤其適用于幼兒、孕婦、高齡患者Hp 感染的診斷及Hp 根除治療后的復查。筆者認為，此類檢測方法今后必將擁有更加廣闊的應用前景。