農產品中農藥殘留檢測能力驗證實施方案及關鍵控制點分析

王 瑋，劉憲麗

（鄒城市檢驗檢測中心，山東濟寧 273500）

現以山東省農業農村廳組織開展的種植業領域能力驗證活動為例，將實施方案及關鍵控制點分析如下。

1 材料與方法

1.1 考核樣品

本次考核共發放A和B兩組樣品，每組樣品均包括1份考核樣和1份空白樣，每份樣品的質量約200 g。A組樣品的基質為甘藍，B組樣品的基質為芹菜。樣品發放采用郵寄的方式，收到快遞立即檢查樣品狀態，仍為冷凍勻漿狀態[1]。

1.2 考核項目及檢測方法

蔬菜中農藥殘留檢測項目及檢測方法見表1。

表1 蔬菜中農藥殘留檢測項目及檢測方法

1.3 檢測儀器設備

根據給定的考核項目及檢測方法確定每個項目所用儀器及檢測方法，有無檢測資質，依托檢測方法以氣相色譜儀、液相色譜儀定量為主，氣相色譜-三重四極桿質譜聯用儀、液相色譜質譜聯用儀定性為輔，多個儀器比對來定量為原則，綜合考量，確定上報結果，檢測項目所用的比對儀器見表2。儀器型號為安捷倫8890A-7000D氣相色譜-三重四極桿質譜聯用儀、液相色譜質譜聯用儀、WATERS液相色譜儀和安捷倫7890A氣相色譜儀。

表2 蔬菜中農藥殘留檢測項目所用的比對儀器

2 考核前的準備工作

2.1 購買有證標準物質

按給定的農藥殘留檢測項目購買農業農村部定制的有證標準物質。

2.2 確定前處理方法

前處理方法按照《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留檢測方法》（NY/T 761—2008）進行處理。

2.3 前處理用品準備

申請新的未拆封甲醇、正己烷、丙酮和氯化鈉（可140 ℃烘4 h）；玻璃器皿如樣品分裝瓶、具塞量筒（做好檢漏測試）、漏斗、稱量勺、移液管、10 mL玻璃離心管清洗干凈備用（最后用三級水清洗）；移液管助吸器充滿電備用；標液配制專用針校準清洗備用；檢查均質機和氮吹儀，清洗干凈刀頭和氮吹針，洗刀頭的杯子4個，清洗順序為超純水→乙腈→丙酮→超純水[2]。

2.4 儀器維護

GC及GC-MS的維護：①檢查儀器設備所用氣源壓力是否正常，所使用載氣、助燃氣能夠滿足檢測需要，檢查氣體管路是否有漏氣；②更換進樣口的襯管、隔墊、O型圈；③更換進樣針，保證洗針溶劑與進樣溶劑相匹配，洗針瓶和廢液瓶清洗干凈備用；④檢查色譜柱兩端是否需要截取，柱子是否需要老化；⑤檢查分流平板是否需要清洗或更換；⑥檢查氣質離子源和燈絲并進行調諧。

HPLC的維護：清洗系統，拆卸色譜柱，按水∶乙腈∶甲醇∶異丙醇=1∶1∶1∶1的比例輸送液體，清洗后，用水∶甲醇=1∶1的比例充分清洗。

LC/MS/MS的維護：檢查離子化、噴霧是否正常、清洗離子源、檢查碰撞器、氮氣發生器、做質量調諧。

2.5 準備空白基質

準備空白基質（不含農藥殘留且與考核樣品同類型的空白樣品）供后期模擬實驗及添加回收實驗使用（添加回收實驗可在添加后冷凍過夜后再做）。

2.6 配制標準溶液

配制高濃度（10 mg·L-1）的農藥混合標準儲備溶液，作為加標溶液使用（上機前繼續稀釋成1.0 mg·L-1的混合溶液作為配制標準使用溶液用，標準使用溶液要使用基質配制）。配標原則是逐級稀釋。

2.7 建立儀器檢測方法

優化檢測方法，使被檢測的化合物在色譜柱上盡可能分開，氣相色譜儀、氣相色譜-三重四極桿質譜聯用儀上新換的襯管要反復進標準溶液，使稱管穩定飽和后再測定樣品。

2.8 模擬能力驗證

進行能力驗證的模擬實驗，提前熟悉實驗過程，發現問題及時解決。

3 樣品前處理過程

3.1 上機標液的配制

兩人合作進行，一人配標一人輔助洗針。

3.2 樣品分裝

樣品有1個考核樣，1個空白樣，每盒約200 g。樣品到達實驗室后應避光、室溫解凍，然后由2～3人將樣品分裝到50 mL具塞廣口瓶中，每個瓶中稱25.0 g，瓶上做好標記并記錄好質量。稱樣時用勺子攪拌均勻后再稱，樣品不要沾到具塞廣口瓶壁上。

3.3 樣品提取

樣品要在剛剛解凍的狀態下進行提取，前處理方法采用NY/T 761—2008的方法。

（1）第一次實驗：初篩。每組做3個空白、4個樣品，其中一個空白做空白樣品CK，另兩個空白樣品用于配基質標，再做3個預先準備的空白基質來做加標回收驗證，兩組共計20個樣品。25 g樣品加入50 mL乙腈（容量瓶量取），均質2 min，然后過濾到加有10～14 g氯化鈉的具塞量筒中（多放氯化鈉保證鹽析效果，過濾時保證濾液盡可能多，足夠使用），劇烈振搖2 min，避光靜置30 min（靜置時提前調節好氮吹儀，溫度設到40 ℃）。吸取靜置好的乙腈溶液1 mL到10 mL容量瓶，用甲醇-水溶液（1∶9）定容后進小瓶上液相色譜質譜聯用儀測定，然后用移液管再吸取30 mL乙腈溶液到3個玻璃離心管中，每個離心管10 mL，分別用于氮吹復溶后上氣相色譜儀的FPD檢測器、ECD檢測器和液相色譜儀的紫外檢測器測定，吸取上層液時要避免吸到下層液體，氮吹時氣流不要過大，后期要勤觀察，固定1～2人看氮吹，保證不吹干，大約剩半滴，微微濕潤；上氣相ECD的樣品用針吸取正己烷2 mL復溶，上氣相FPD和氣質質的共用一個樣品，用針吸4 mL丙酮復溶，上液相的樣品用針吸2.5 mL乙腈-水溶液（1∶9）復溶，進小瓶后準備上機測定；序列編輯順序為試劑空白（丙酮、正己烷或甲醇）→樣品空白（CK）→白標→基質標→樣品溶液→加標回收→白標→基質標→樣品溶液→加標回收[3]。

（2）第二次實驗。經過初篩確定了所加農藥的種類，每組做了5個空白，4個樣品。其中，2個空白用于基質配標，3個空白用于加標回收，兩組共計18個樣品。根據第一次的定量結果，加標樣的濃度應與樣品濃度接近，配標濃度也應和樣品濃度接近[4]。

4 關鍵控制點

①整個能力驗證實驗包括前處理過程和儀器分析過程。前處理實驗過程中要保證操作過程準確，避免發生對結果造成重大誤差的不規范操作，要求操作人員細心、準確和操作平穩；而儀器分析過程則要求檢測項目在儀器上有很好的分離度和響應。②進行前處理時，多放氯化鈉保證鹽析效果，均質均勻，過濾時保證濾液盡可能多，足夠使用，振搖要劇烈充分，靜置時間要足夠，吸取上層液時要避免吸到下層液體，氮吹后期要勤觀察，保證不吹干，大約半滴微微濕潤[5]。③多次能力驗證結果均發現第一次結果定量最為準確，可以第一次實驗時盡量多處理幾個樣品，避免后續樣品由于冷凍時間過久和反復解凍造成農藥降解，使定量結果偏小。④液質上農藥殘留可先配不加基質的大混標對待測樣快速定性和初步定量，再根據目標物濃度準確配制與之濃度接近的基質標來單點校正，這樣可以節省很多配標時間。為提高回收率，最后一步進樣品瓶前可不過濾膜。⑤氣質質上農藥殘留定量必須用基質標，可降低基質效應，且峰形較好。

5 結語

綜上所述，本文以山東省農業農村廳組織開展的種植業領域能力驗證為例制定實施方案并對關鍵控制點進行分析，為農產品質量安全檢測機構提高能力驗證水平提供參考與借鑒。