重癥肌無力患者血清PD-1、TLR4、IL-23水平與病情嚴重程度相關性及其預測效能分析

任瑩瑩

河南科技大學第一附屬醫院(河南 洛陽 471000)

重癥肌無力(MG)是一種抗體介導、與T細胞功能密切相關的慢性自身免疫疾病,主要臨床表現為肌無力,部分發生肌無力危象患者可具有較高的死亡風險[1]。目前臨床已經能夠根據不同抗體類型對MG進行分析,但MG具體發病機制并未完全闡明。相關研究顯示,T細胞激活需協同刺激信號來參與反應,而程序性死亡受體1(PD-1)是一種重要的負性協同刺激分子[2]。此外,白細胞介素-23(IL-23)可刺激輔助性T細胞(Th17)參與機體免疫反應,而Th17在MG發生發展過程中起到重要作用[3]。Toll樣受體4(TLR4)是一種參與天然免疫系統的模式識別受體,目前已經發現其參與了多種自身免疫性疾病和炎癥疾病的發生發展[4]。故本次研究旨在探討血清PD-1、TLR4、IL-23水平與MG患者病情嚴重程度關系及對MG發生危象的預測價值,以期為MG臨床診療提供依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月到2021年1月我院收治的91例MG患者作為MG組,納入標準:(1)確診為MG,參考《中國重癥肌無力診斷和治療專家共識》[5],典型肌無力癥狀,低頻重復神經電刺激顯示波幅遞減>10%;(2)采血檢測前未使用免疫抑制劑或膽堿酯酶抑制劑治療;(3)患者知情并簽署同意書。排除標準:(1)合并慢性脫髓鞘性多發性神經疾病、Guillain-Barra綜合征、Lambert-Eaton綜合征患者;(2)合并甲亢、甲減、糖尿病等其他可引發外周神經病變患者;(3)存在其他自身免疫疾病;(4)妊娠或哺乳婦女;(5)患者臨床資料不全或中途離院、轉診者。另選91例體檢健康人員作為對照組。MG組,男23例,女68例,年齡18～75(38.14±6.85)歲;對照組,男27例,女64例,年齡19～72(37.95±7.04)歲。兩組一般資料比較無統計學差異(P>0.05)。本研究經我院醫學倫理委員會審核通過。

1.2方法 采集所有受試者晨起空腹靜脈血4mL,以3000r/min離心15min取上清液,采用ELISA法檢測其血清PD-1、TLR4、IL-23水平,試劑盒均來自于美國Thermo Fisher Science公司。比較MG患者與對照組血清PD-1、TLR4、IL-23水平差異,同時按MGFA分型[3]將患者按照病情嚴重程度分為Ⅰ-Ⅴ型,比較不同病情嚴重程度患者血清PD-1、TLR4、IL-23水平。記錄患者住院期間發生危象情況:以住院期間因肌無力癥狀出現自主呼吸功能障礙需要進行機械通氣者作為出現危象,建立ROC曲線分析血清PD-1、TLR4、IL-23水平對發生危象的診斷價值。

2 研究結果

2.1各組血清PD-1、TLR4、IL-23水平 MG組血清PD-1、TLR4、IL-23水平高于對照組,且隨MG病情嚴重程度增加,PD-1、TLR4、IL-23水平逐漸升高(P<0.05),見表1。Spearman相關性分析顯示,血清PD-1、TLR4、IL-23水平與MG患者病情嚴重程度呈正相關(r=0.741、0.844、0.785,P<0.001)。

表1 各組血清PD-1、TLR4、IL-23水平[n(%)]

2.2血清PD-1、TLR4、IL-23水平與發生危象關系 發生危象患者血清PD-1、TLR4、IL-23水平高于無危象患者(P<0.05),見表2。

表2 血清PD-1、TLR4、IL-23水平與發生危象關系

2.3血清PD-1、TLR4、IL-23水平對發生危象的預測價值 血清PD-1、TLR4、IL-23預測MG患者發生危象的AUC分別為0.799、0.739、0.722,三者聯合檢測的AUC為0.873,高于單一檢測指標(P<0.05),見表3。

表3 血清PD-1、TLR4、IL-23水平對發生危象的預測價值

3 討論

MG發病機制涉及自身抗體和細胞免疫,參與其中細胞因子眾多[6-7]。既往研究多報道存在多種分子參與MG的發生發展,且能根據不同抗體表達情況將患者分為不同亞型,但目前臨床上MG發病機制尚未完全闡明,且部分患者治療效果并不十分理想[8],探究MG相關細胞因子表達情況有助于為臨床治療提供新的靶點。

本次研究顯示,MG組血清PD-1、TLR4、IL-23水平高于對照組,且隨MG病情嚴重程度增加,PD-1、TLR4、IL-23水平逐漸升高,提示MG患者存在明顯PD-1、TLR4、IL-23上調,且與患者病情嚴重程度有關。PD-1多表達在激活的T細胞、B細胞、單核細胞等免疫細胞表面,與其配體結合后能使活化的T細胞無法及時獲得足夠強大的負性調控信號,引發T細胞過度活化增殖,從而對自身抗原造成持續的免疫反應和組織損傷[9-10]。Dalakas等人[11]研究發現血清PD-1表達水平與MG患者年齡存在一定相關性,且在早發型患者中表達水平低于晚發型患者,提示PD-1可能參與了MG的發生發展過程,與本次研究結果一致。TLR4是Toll樣受體家族成員之一,能通過識別病原體相關分子模式而參與天然免疫。MG是與胸腺功能密切相關的自身免疫疾病,目前已經發現多種Toll樣受體在MG患者體內表達上調[12]。且多項研究認為Toll樣受體能激活MyD88-IRAK/TRAF6-NF-kB信號通路,誘導IL-6、IL-23等多個促炎細胞因子表達,而該通路異常被認為可能是MG發病的重要機制之一[13]。IL-23是Th17細胞分泌的促炎細胞因子,能通過核因子-kB(NF-kB)信號通路[u5]產生促炎因子和趨化因子,提示IL-23可能通過該機制參與MG的病情進展[14]。目前臨床靶點為IL-23的單克隆抗體已經應用于銀屑病、類風濕性關節炎等多種自身免疫疾病中,推測IL-23拮抗劑或許也能為MG治療提供新的思路[15]。Spearman相關性分析顯示,血清PD-1、TLR4、IL-23水平與MG患者病情嚴重程度呈正相關,驗證了此三者與MG病情嚴重程度相關。而MG患者發生肌無力危象往往提示預后不良,本次研究中發生危象患者血清PD-1、TLR4、IL-23水平高于無危象患者,提示MG患者血清PD-1、TLR4、IL-23水平上調更能提示預后不良,這可能與此類患者病情更為嚴重有關。建立ROC曲線分析,發現血清PD-1、TLR4、IL-23預測MG患者發生危象的AUC分別為0.799、0.739、0.722,三者聯合檢測的AUC為0.873,高于單一檢測指標,提示三者對MG患者預后不良均具有較好的預測價值,且三者聯合檢測預測效能更高,提示血清PD-1、TLR4、IL-23水平可作為預測MG預后的評估指標,監測此三者的水平變化具有重要的臨床意義。

綜上所述,MG患者血清PD-1、TLR4、IL-23水平明顯上調,且與病情嚴重程度呈正相關,對預測MG預后具有一定的臨床價值。本次研究尚有不足之處,首先受到醫院規模限制納入樣本量較少,后續計劃將納入更多樣本量進行分析,必要時可增加多中心病例來源進行進一步研究,此外,本次采用的是ELISA作為血液中指標的檢測方法,后續可增加放射免疫、免疫印跡實驗等多種方法進行驗證以提高檢測結果的準確度,具體情況有待進一步的研究和論證。