不同處理方法對溪黃草種子萌發的影響

王吉文，黃燕俊，胡倩倩，楊聯林，唐初紅，馬宏亮,4*

(1.中山市中智藥業集團有限公司，廣東中山 528437；2.中藥破壁飲片國家地方聯合工程研究中心，廣東中山 528437；3.靈川縣靈興魚腥草種植專業合作社，廣西桂林 541200；4.甘肅中智順和中藥材有限責任公司，甘肅定西748400)

溪黃草為唇形科植物線紋香茶菜[Rabdosialophanthoides(Buch.-Ham.ex D.Don)H.Hara]及其變種纖花香茶菜[Rabdosialophanthoides(Buch.-Ham.ex D.Don)Hara var.graciliflora(Benth.)H.Hara]或溪黃草[Rabdosiaserra(Maxim.)H.Hara]的干燥地上部分,其作為嶺南地區特色中草藥，具有清熱解毒、涼血散瘀的功能，常被用作清肝利膽的藥物[1]。根據實地調查及文獻研究[2]顯示，嶺南地區溪黃草藥用資源以纖花香茶菜為主流品種。溪黃草主要繁殖方式有種子繁殖、分株繁殖和扦插繁殖3種；研究表明，3種繁殖方式以種子繁殖最好，種子實生苗具有抗性好、病蟲害少、生長發育快等優點[3]。藥用植物種子采收、貯藏及播前處理對保持和提高種子活力有較大影響，為中藥材GAP生產實踐奠定基礎[4]。目前，有關溪黃草種子處理及貯藏方面相關研究鮮見報道。筆者通過對溪黃草種子采收、貯藏及播種前處理開展研究，以期為該味藥材規范化生產提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料2019年1月在位于廣東省的中智溪黃草生態種植基地采集成熟褐色的溪黃草果穗。原植物由中國科學院華南植物園葉華谷教授鑒定為纖花香茶菜[Rabdosialophanthoides(Buch.-Ham.ex D.Don)Hara var.graciliflora(Benth.)H.Hara]。將果穗曬干，敲打出種子，篩去雜質，放入紙質信封備用。

RTOP-260智能人工氣候箱(浙江托普儀器有限公司)；DW-YL270醫用低溫箱(中科美菱低溫科技有限責任公司)；HYC-260醫用冷藏箱(青島海爾特種電器有限公司)；赤霉素(純度99%，木木生物)；激動素(純度99%，廣州市林國化肥有限公司)；高錳酸鉀(純度99.5%，國藥集團化學試劑有限公司)；水為純化水。

1.2 處理方法

1.2.1種子形態、千粒重測定。觀察記錄溪黃草種子外觀形態，從溪黃草種子樣品中隨機取8個重復，每個重復100粒，分別稱重，計算平均重量和標準差[5]。

1.2.2不同顏色種子處理。將從褐色果穗中敲打出的溪黃草種子按照種皮顏色不同分為淡黃色、褐色兩組，分別用純水浸泡12 h，晾干表面水分備用。

1.2.3不同光照處理。選擇褐色溪黃草種子，純水浸泡12 h，取出晾干種子表面水分，分為兩組放入不同培養皿，一組放入套有黑色不透光袋的避光培養皿，一組放入正常透光的培養皿。

1.2.4不同試劑處理。選擇褐色溪黃草種子，分別采用不同濃度試劑浸泡12 h，取出純水洗凈種子表面試劑，晾干水分備用。不同濃度試劑浸泡12 h具體方法分別為① 純水浸種；② 10、50、200 mg/L赤霉素浸種；③2.5、10.0、50.0 mg/L激動素浸種；④ 0.05%、0.10%、0.50%高錳酸鉀浸種。

1.2.5不同貯藏方式處理。選擇褐色溪黃草種子，裝入紙質信封，分別采用室溫、4 ℃、-4 ℃、-20 ℃冰箱進行貯藏，在貯藏0、90、180、270、360 d，取出測定種子萌發數量。

1.3 測定方法試驗設置每個處理50粒溪黃草種子，3次重復。將不同處理組種子放入墊有雙層濾紙培養皿中，滴入適量純化水保濕，置于人工氣候箱中進行萌發試驗，人工氣候箱溫度25 ℃，光照12 h/黑暗12 h，光照強度5 500 lx。每日統計發芽數量，并及時補充純化水保持濾紙濕潤。種子發芽以胚根突破種皮的長度為種子長度50%為計數標準，規定放入培養箱后第4天計算發芽勢，發芽率、發芽勢計算公式如下：

發芽率=(正常發芽種子數/供試種子數)×100%

發芽勢=(4 d內已正常發芽種子數/供試種子數)×100%

1.4 統計分析數據結果采用SPSS 22.0處理，不同處理組間均值分析采用完全隨機設計單因素方差分析中LSP多重比較。

2 結果與分析

2.1 種子形態特征溪黃草種子極小，呈卵圓形，種皮淡黃色至褐色(圖1)。淡黃色種子千粒重為(102.00±5.29)mg，褐色種子千粒重為(118.00±3.57)mg。

圖1 溪黃草種子形態特征

2.2 不同顏色種子萌發比較從表1可以看出，褐色種子與淡黃色種子發芽率、發芽勢均差異顯著，褐色種子發芽率和發芽勢均明顯高于淡黃色種子。

表1 不同顏色種子發芽率、發芽勢比較(n=3)

2.3 不同光照處理對種子萌發的影響從表2可以看出，光照和黑暗2種處理條件下溪黃草種子發芽率、發芽勢均無顯著差異，表明是否光照對溪黃草種子發芽無顯著影響。

表2 不同光照處理種子發芽率、發芽勢比較(n=3)

2.4 不同試劑處理對種子萌發的影響從表3可以看出，不同濃度赤霉素處理與空白組對比，10、50 mg/L赤霉素處理與空白組種子萌發結果無顯著差異，200 mg/L赤霉素處理組種子發芽率、發芽勢降低明顯，對溪黃草種子萌發有明顯抑制作用。不同濃度激動素處理與空白組對比，各激動素處理組種子發芽率均有明顯降低，表明激動素對溪黃草種子萌發有顯著抑制作用，高濃度激動素抑制種子發芽作用更強。不同濃度高錳酸鉀處理與空白組對比，種子發芽率結果無明顯差異，其中0.05%高錳酸鉀處理組可明顯提高溪黃草種子發芽勢，4 d內發芽勢高達78.67%,發芽率為84.00%。

表3 不同濃度與種類試劑對溪黃草種子發芽的影響(n=3)

2.5 不同貯藏方式對種子萌發的影響從表4～5可看出，溪黃草在室溫條件下，隨貯藏時間的延長，發芽率直線降低，僅貯藏90 d發芽率就由84.00%降至30.00%，貯藏180 d溪黃草種子基本喪失活力，發芽率降為1.33%。4 ℃條件下溪黃草種子貯藏前90 d發芽率顯著下降，由84.00%下降至73.33%，而后270 d貯藏時間內，發芽率基本趨于穩定。-4 ℃與-20 ℃條件下，溪黃草種子貯藏360 d過程中發芽率基本穩定。不同溫度下溪黃草種子發芽勢變化趨勢與發芽率變化趨勢基本一致。由表4～5分析結果可知，溪黃草種子在-4 ℃與-20 ℃條件下發芽率、發芽勢隨貯藏時間延長變化規律不明顯，種子在-4 ℃與-20 ℃貯藏條件下，隨著貯藏時間延長，種子發芽率、發芽勢顯著高于4 ℃貯藏。

表4 不同貯藏方式對溪黃草種子發芽率的影響(n=3)

表5 不同貯藏方式對溪黃草種子發芽勢的影響(n=3)

3 討論

通過觀察，溪黃草果穗轉為深褐色后，果穗內種子種皮顏色仍存在較大差異，可分為淡黃色和褐色2種。該試驗結果顯示，淡黃色種子發芽率為16.00%，顯著低于褐色種子的發芽率(84.00%)，且淡黃色種子千粒重明顯小于褐色種子，因此，可判斷淡黃色種子并未完全成熟，褐色種子基本已成熟，萌發率高，應選擇褐色種子進行實際生產。

光是影響種子萌發的諸多環境因素之一，根據種子萌發過程對光的不同響應，可將種子分為需光性、忌光性、光中性3類。需光性種子萌發需要光照，在黑暗下不能萌發或萌發率降低；忌光性種子在光照誘導下產生休眠；光中性種子萌發不受光照與否影響[6-7]。該試驗結果顯示，是否光照對溪黃草種子發芽率及發芽勢均無顯著影響，說明溪黃草為光中性種子。溪黃草種子極小，大田春季直播于土壤表面易受天氣影響，常被雨水沖走。雖其為光中性種子，覆厚土不影響其發芽并防止雨水沖刷，但因種子小，覆厚土嚴重阻礙其破土生長，故建議將種子與細土混合后撒于整好的土地表面，搭棚育苗后進行移栽。

溪黃草種子放入培養箱第3天開始萌發，第4天發芽達到高峰，為較容易發芽種子。該試驗結果表明，常用植物激素如赤霉素、激動素不僅對溪黃草種子萌發無促進作用，高濃度甚至明顯抑制其發芽。不同試劑處理對溪黃草種子萌發影響試驗表明，0.05%高錳酸鉀處理組可明顯提高溪黃草種子發芽勢，促進種子快速、整齊發芽，該處理組放入培養箱第4天基本全部萌發。高錳酸鉀溶于水后，可提高水中氧氣濃度，釋放出的鉀離子可作為營養元素，促進實生苗生長，錳離子作為微量元素可以活化種子體內酶系統，促進種子萌發，同時可對種子進行消毒，具有藥肥兼用特點[8]，因此，適合用作溪黃草播種前浸種處理。

種子劣變(衰老)是其伴隨貯藏時間的增加而發生和發展的、自然的、不可逆的種子活性逐漸喪失的過程，其衰老機制復雜，分子水平上和線粒體變化密切相關[9]，種子含水量和貯藏溫度則是影響種子衰老的2個關鍵外在因子[10]。該研究從不同貯存方式的對比試驗可看出，溪黃草種子在室溫條件下劣變速度非常快，僅180 d種子基本完全失活，360 d貯藏試驗期內，溪黃草種子在-4 ℃與-20 ℃冷藏條件下活力無明顯變化。考慮到溪黃草主產地為我國南方，氣候溫暖、濕度大，結果顯示室溫條件非常不利于其種子保存，-4 ℃為普通家用冰箱可達到控溫條件，故實際溪黃草生產中推薦采用-4 ℃冷藏方式貯藏其種子。

4 結論

溪黃草在實際種子繁殖過程中，應選擇褐色成熟種子，采用搭棚育苗后移栽的方式開展種植。春季播種前，采用0.05%高錳酸鉀浸種12 h，播種時，將種子與細土混合均勻撒播于苗床表面即可，澆水保濕。種子采集干燥后，若需貯藏至隔年種植，應放入-4 ℃進行冷藏。