營養小肽對黃金鯽血清生化指標、腸和肝組織的影響

胡 賀，陳 鵬，萬 兵，袁 化

(1.江蘇福潤德科技有限公司，江蘇 南京 210036；2.南京農業大學，江蘇 南京 210036；3.大連海洋大學，遼寧 大連 116023)

黃金鯽(Carassiusauratus)是我國傳統淡水養殖魚類鯉、鯽的雜交品種。該雜交組合具有雜交鯉鯽最好的雜種優勢，生長速度超快(是普通鯽的2～3倍)、適應性強、食性雜、抗病力強、飼料轉化率高、含肉率高、營養價值豐富，是農業農村部向全國推廣養殖的淡水魚類品種。

蛋白質在體內代謝的最終分解產物是小肽和氨基酸，營養小肽能以完整形式直接被機體吸收[1]，具有提高養殖動物餌料轉化率，促進養殖動物生長，提高生產性能等作用[2-5]。

試驗選擇江蘇省東臺市弶港鎮養殖區，以養殖黃金鯽為試驗動物。在基礎飼料中添加營養小肽，經投喂養殖128 d后，隨機抽樣檢測血清生化指標、腸(前腸)和肝組織。通過觀察添加營養小肽后黃金鯽血清生化指標的變化，以及腸和肝組織的組織結構，探討營養小肽作為飼料添加劑對養殖黃金鯽健康的影響，為營養小肽在水產養殖中的應用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 基礎飼料和營養小肽

基礎飼料為混養魚配合飼料，產品標準Q/320924 YCHD 001-2021。產品成分分析執行標準為GB/T 18823，粗蛋白≥28.0%，粗脂肪≥2.5%，賴氨酸≥1.35%，水分≤12.2%，粗纖維≤11.5%，粗灰分≤15.0%，總磷≥0.7%。

營養小肽為江蘇福潤德科技有限公司產品，商品名為天樂泰(SBP)。該產品以豆科植物為原料，選用四聯菌分階段式密閉深層發酵，通過生物發酵和物理處理等工藝消除抗營養因子,同時保留豐富的不飽和脂肪酸，并充分分解釋放不同肽段，為營養小肽類產品。產品部份檢測指標為：粗纖維0.9%，粗脂肪1.5%，粗蛋白4.32%，酸溶蛋白(占總蛋白)33.5%，水蘇糖和棉子糖均未檢出，活菌數：乳桿菌22.6×107CFU/g、酵母1.02×107CFU/g、芽孢桿菌105CFU/g，pH值 3.5。

1.2 試驗魚養殖與管理

試驗在江蘇省東臺市弶港鎮養殖區進行，設2個試驗組和1個對照組。在苗種放養7 d后，對照組投喂基礎飼料，試驗組投喂添加營養小肽(天樂泰)的飼料。魚種放養時的平均體重50 g/尾。

試驗組營養小肽(天樂泰)添加量為基礎飼料重量的2.0%。每天投喂前用自來水將天樂泰溶解，充分混合后，在基礎飼料中均勻噴灑，待表面干燥后投喂。投飼量均按魚體重2.0%～3.0%計算。每天投喂4次，投喂時間為7:00、10:00、13:30和16:30。養殖期間水溫26～33 ℃，溶氧控制在3.5～8.3 mg/L，pH值8.5～8.8。

投飼養殖128 d后，試驗組和對照組隨機取樣黃金鯽10尾，進行體重、體長和體高檢測，觀察黃金鯽的生長情況。

1.3 血清制備

試驗組和對照組隨機取樣黃金鯽各5尾，一次性注射器尾靜脈取血(無抗凝劑)，4 ℃靜置24 h后，2 500 r/min，-5 ℃離心5 min，取上層血清，-20 ℃保存，備用。

生化檢測儀為羅氏cobas C311全自動生化分析儀。檢測指標為總蛋白(TP2)、白蛋白(ALB2)、堿性磷酸酶(ALP2L)、脂肪酶(LIPC)、血糖(GLUC3)和尿素氮(U-BUN)。

1.4 組織學觀察

試驗組和對照組隨機取樣黃金鯽各5尾，進行解剖觀察，分別取前腸和肝組織。前腸以腸道開口處為起點至第一個回折處之間的部分，切取0.5～1.0 cm組織。肝組織取肝臟中間部分，修切0.5×0.5 cm組織。純凈水沖洗，浸泡4.0%甲醛溶液，固定24 h后，更換甲醛溶液(4.0%)，備用。

組織切片采用美國賽默飛公司全自動組織脫水機(Excelsior AS)，染色機(Gemini AS)，包埋機(Histo STAS)和切片機(HM 325)完成。切片厚度4～5 μm，HE染色，中性樹膠封片，Olympus光學顯微鏡觀察，顯微照片記錄。

1.5 數據統計分析

試驗數據以Excel整理，平均值±標準差(Means±SD)表示。采用GraphPad prisn 8.0軟件進行方差分析和多因素比較分析，P≤0.01差異極顯著，0.01

2 結果

2.1 黃金鯽生長情況

在基礎飼料中添加2.0%天樂泰，經128 d養殖，試驗組體重大于對照組(0.01

表1 添加營養小肽養殖128黃金鯽生長情況 (n=10)

2.2 血清生化指標

在基礎飼料中添加營養小肽(天樂泰)投喂黃金鯽128 d后，試驗組間血清總蛋白無顯著差異(P≥0.05)，試驗Ⅰ組與對照組差異極顯著(P≤0.01), 試驗Ⅱ組與對照組無顯著差異(P≥0.05)；試驗Ⅰ組血清白蛋白與對照組差異極顯著(P≤0.01)，試驗Ⅱ組與對照組無顯著差異(P≥0.05)；試驗組與對照組、試驗組間血清堿性磷酸酶、脂肪酶和尿素氮均無顯著差異(P≥ 0.05)；試驗組與對照組間血清血糖有極顯著差異(P≤0.01)，試驗組間無顯著差異(P≥0.05)。見表2。

表2 營養小肽對黃金鯽血液生化指標的影響 (n=5)

2.3 腸組織結構觀察

解剖觀察：腸道緊連食道之后，管徑逐漸變細，前、中、后腸分界不明顯，呈粉色。

組織結構觀察：試驗組前腸組織各層顯示清晰，由內向外依次為黏膜層(A)、黏膜下層(B)、肌層(C)和漿膜層(D)。黏膜層是消化管的最內層，有許多向腸腔凸出的腸絨毛組成，腸絨毛結構清晰，絨毛層非常豐厚。肌層有內層環肌(F)和外層縱肌(E)兩層平滑肌組成。腸的外表均覆一層漿膜。試驗組兩層平滑肌結構排列緊密，內層環形肌層較為發達，外層縱行肌層則比較薄。黏膜下層與肌層之間的基底層(H)結構清晰，明顯較厚且致密(見封三圖1a)。黏膜層的上皮層有單層柱狀上皮細胞(M)構成，其間散布少量杯狀細胞(N)，上皮層下的固有層(L)清晰可見(見封三圖1b)。

對照組內環肌(f)和外縱肌(e)結構排列疏松，黏膜下層與肌層之間的基膜結構不清晰(h)，固有層和黏膜下層細胞成分增多(b)(見封三圖1c)。

2.4 肝組織結構觀察

肝臟形態觀察：肝臟大小形態正常，呈鮮亮的暗紅色，緊貼腸系膜上，胰腺彌散性地分布在肝臟組織中，膽囊與肝臟相連。

組織結構觀察顯示：肝組織結構較清晰，肝細胞形狀較規則(A)，呈略帶圓形的多角形，細胞核1個，核仁清晰，位于細胞中間，細胞界限分明，細胞質HE紅染。肝細胞圍繞中央靜脈(C)呈放射狀排列，成串形成肝索樣結構，肝細胞間可見肝血竇(B)，中央靜脈和血竇中可見血細胞(見封三圖2)。

3 討論

3.1 營養小肽對黃金鯽血清生化指的影響

魚類的血液與機體代謝、營養狀況和疾病有著密切的關系，是重要的生理、病理和營養評價的指標[6]。血清指標與營養狀況密切相關，不僅反映魚類的生理代謝狀態，還可以闡明營養對機體代謝變化的作用機制。血清總蛋白是反映動物的營養水平和動物對蛋白質的消化程度，以及魚的健康狀況的指標[6-7]。血清白蛋白是由肝實質細胞合成，具有維持血漿滲透壓和pH的平衡，作為轉運蛋白調節被運輸物質的生理作用。當營養狀況良好時，血清蛋白維持在較高的水平。檢測數據分析，血清總蛋白含量試驗組為(28.26±1.37)g/L和(25.54±3.41)g/L，對照組(25.20±0.92)g/L，均低于硬骨魚類血清總蛋白含量30～50 g/L范圍[6]。由于黃金鯽生長速度高于普通鯽2～3倍，基礎飼料28%的粗蛋白和營養小肽(天樂泰)2%的添加量，沒有滿足35%飼料蛋白的需求量[8]。營養小肽(天樂泰)作為飼料添加劑，對于不同的基礎飼料和養殖魚類的添加量還有待深入研究。

血清堿性磷酸酶主要來源于肝臟、腸道和骨骼等組織，是動物生長和生存的重要調控酶，其活性在一定程度上反映了動物的生長速度[9-10]。試驗組血清堿性磷酸酶均低于對照組，結合黃金鯽形體指標檢測結果(表1)，試驗Ⅰ組與羅莉等[10]堿性磷酸酶活性與動物的生長呈正相關理論相符合，而試驗Ⅱ組與之相反。試驗組間的差異是否與取樣有關，還有待繼續跟綜檢測。

魚類的肝胰腺是生成脂肪酶的主要器官。脂肪酶的活性與餌料中的脂肪含量呈正相關[11-13]。脂肪含量高的食物會增加脂肪酶活性，而攝食脂肪含量低的食物，則脂肪酶的活性也隨之降低。試驗組血清脂肪酶平均值略高于與對照組，多重比較無顯著差異(P≥0.05)，反映了黃金鯽的脂質代謝狀況良好，處于健康水平。

血糖是反映糖代謝和機體組織細胞功能狀態的重要指標，同時也反映餌料和營養的合理性[14]。在基礎飼料中添加2%營養小肽(天樂泰)后，試驗組血糖值均高于對照組，多重比較顯示，試驗組間無顯著差異(P≥ 0.05)，試驗組與對照組比較均有極顯著差異(P≤0.01)。分析認為，低蛋白的飼料中碳水化合物的比例相對較高，養殖動物為攝食足量的蛋白質而加大攝食量，間接增加了碳水化合物的攝入量，導致血糖水平的升高[15-16]。

血清中尿素氮水平反映了肝臟和腎臟功能，以及體內蛋白質分解和沉積情況[17-18]。試驗結果顯示試驗組血清尿素氮平均值均低對照組。試驗結果與小肽可以減少尿素在腎臟中的沉積，提高動物機體蛋白質的沉積率的研究結果一致[19]。營養小肽(天樂泰)促進了氨基酸的吸收，提高了蛋白質沉積率作用。

3.2 營養小肽對黃金鯽腸組織的影響

黃金鯽攝食添加營養小肽(天樂泰)飼料128 d后，在一定程度上對黃金鯽的腸道結構產生了影響。試驗組兩層平滑肌結構排列緊密，對照組內環肌和外縱肌結構排列疏松。環肌的波狀收縮形成腸的蠕動，縱肌的舒縮形成腸的擺動。因此，試驗組前腸的腸壁收縮力強，有助于食物的混勻和運輸。試驗組黏膜層的上皮層單層柱狀上皮細胞豐富，其間散布杯狀細胞。對照組單層柱狀上皮細胞排列緊密，杯狀細胞極少。杯狀細胞能分泌黏液和消化酶，柱狀上皮細胞具有吸收作用，黏膜褶的增多，表現出較大吸收面積，有助于食物的消化和營養物質的吸收。黏膜下層由疏松結締組織構成，是腸黏膜的支柱，同時有利于腸壁相應的擴張，將營養物質由此輸入血液并到達全身。試驗組黏膜下層與肌層之間的基底層結構清晰，且致密。對照組黏膜下層與肌層之間的基膜結構不清晰，固有層和黏膜下層細胞成分增多，有待于擴大樣本的檢測量，進一步研究探討。

3.3 營養小肽對黃金鯽肝胰腺組織的影響

試驗組黃金鯽肝臟表面被漿膜，大小形態正常，呈鮮亮的暗紅色。試驗組肝胰腺組織結構較清晰，密集形成網狀，肝細胞呈略圓形的多角形，細胞界限分明。細胞核1個，核仁清晰，位于細胞中間。細胞質豐富，HE紅染。肝細胞圍繞中央靜脈呈放射狀排列，成串形成肝索樣結構，每2～3層肝細胞間可見肝血竇，中央靜脈和血竇中可見血細胞。在飼料中添加營養小肽(天樂泰)有助于養殖黃金鯽營養的吸收，健康狀態良好。

通過對黃金鯽血清生化指標、腸和肝組織病理觀察。在基礎飼料中添加2%營養小肽(天樂泰)，有助于食物的消化，促進了氨基酸的吸收，提高了蛋白質的合成，反映出黃金鯽良好營養狀況和健康水平。營養小肽(天樂泰)作為養殖魚類飼料添加劑，具有良好的促生長效果，無殘留，無抗藥性和無污染的優勢，是作為綠色飼料添加劑的首選。