冠狀動脈粥樣硬化患者外周血Th17細胞與IL-17的水平及意義

王江鳳 高美華 張娟

摘要：目的 ?探究冠狀動脈粥樣硬化患者外周血Th17細胞與IL-17水平變化的意義。方法 ?收集青島阜外心血管病醫院冠狀動脈粥樣硬化患者200例，根據疾病類型分為心肌梗死（AMI）組（52例）、不穩定型心絞痛（UA）組（68例）、穩定型心絞痛（SA）組（80例），另外選取同期200例體檢者作為對照組。采用流式細胞術檢測患者Th17細胞頻率，ELISA法檢測各組血清中IL-17、CRP表達水平。結果 ?流式細胞檢測結果顯示，與對照組比較，各組Th17細胞的頻率表達均升高，差異具有統計學意義（P<0.05），且AMI組升高水平高于SA組和UA組，差異具有統計學意義（P<0.05）; ELISA檢測結果顯示，與對照組比較，各組IL-17及CRP表達水平均升高，差異具有統計學意義（P<0.05），且AMI組升高水平高于SA組和UA組，差異具有統計學意義（P<0.05）。結論 ?冠狀動脈粥樣硬化患者血中Th17及IL-17水平的升高，可能是導致冠狀動脈粥樣硬化患者板塊不穩定的原因。

關鍵詞：冠狀動脈粥樣硬化;Th17;IL-17;CRP

中圖分類號：R541.4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.12.020

文章編號：1006-1959（2019）12-0064-03

Abstract：Objective ?To investigate the significance of changes in Th17 cells and IL-17 levels in peripheral blood of patients with coronary atherosclerosis. Methods ?A total of 200 patients with coronary atherosclerosis were enrolled in Qingdao Fuwai Cardiovascular Hospital. According to the disease type， they were divided into myocardial infarction （AMI） group （52 cases）， unstable angina （UA） group （68 cases）， stable angina pectoris. In the （SA） group （80 cases）， another 200 physical examination subjects were selected as the control group. The frequency of Th17 cells was detected by flow cytometry. The expression levels of IL-17 and CRP in serum of each group were detected by ELISA. Results ?The results of flow cytometry showed that compared with the control group， the frequency of Th17 cells in each group increased， the difference was statistically significant （P<0.05）， and the elevated level of AMI group was higher than that of SA group and UA group，the difference was statistically significant （P<0.05）. The results of ELISA showed that compared with the control group， the expression levels of IL-17 and CRP increased in each group， the difference was statistically significant （P<0.05）， and the AMI group increased. The level was higher than that of SA group and UA group，the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion ?The elevated levels of Th17 and IL-17 in patients with coronary atherosclerosis may be responsible for plate instability in patients with coronary atherosclerosis.

Key words：Coronary atherosclerosis;Th17;IL-17;CRP

冠狀動脈粥樣硬化病（coronary atherosclerosis）是一種慢性炎癥性動脈硬化性疾病，世界范圍內病死率較高，在中國其發病人數顯著增加[1]。有研究發現T細胞參與該病發生發展，過去研究大多發現Th1、Th2參與冠狀動脈粥樣硬化炎癥病理過程，認為Th1細胞可促進動脈粥樣硬化發展[2]。最新研究發現Th17細胞也參與炎癥反應，Th17細胞被視為炎癥反應重要調節因子，IL-17作為TH17分泌的特征性細胞因子，參與多種炎癥性疾病的發展。TH17/IL-17在系統性紅斑狼[3，4]等免疫性疾病的研究較多，其在冠脈粥樣硬化中相關作用仍在研究。CRP作為一種敏感的炎癥和組織損傷標志物，在冠狀動脈粥樣硬化發生發展進程中扮演重要作用。大量臨床和基礎研究數據表明，CRP在冠脈硬化癥中發揮重要作用[5]。Th17與冠狀動脈粥樣硬化密切相關，CRP在冠狀動脈粥樣硬化癥里的報道也漸增多，因此研究TH17、IL-17及CRP在冠狀動脈粥樣硬化癥的機制有重要意義。本文通過檢測Th17細胞在冠狀動脈粥樣硬化患者血清中的變化，探討TH17、IL-17、CRP與冠狀動脈粥樣硬化癥的關系，為臨床提供參考依據。

1資料與方法

1.1一般資料 ?收集2017年6月～2018年6月青島阜外心血管病醫院冠狀動脈粥樣硬化患者200例，男122例，女78例。根據疾病類型分為心肌梗死（AMI）組、不穩定型心絞痛（UA）組、穩定型心絞痛（SA）組。其中AMI組52例，伴有突發性的胸前區疼痛，且持續時間>30 min，不緩解，心肌標志物超過正常范圍，有典型心電圖波段變化或動態改變;UA組68例，胸痛時有進行性加重，伴有ST段一過性改變;SA組80例，休息或含化硝酸甘油可在幾分鐘內緩解，日常活動下心電圖無異常，發作時或行心電圖負荷試驗有波段壓低，檢測心肌壞死標志物未超過正常范圍;另外選擇同期排除冠狀動脈病變的體檢者200例為對照組。各組年齡、性別、血壓、血糖、吸煙史、血脂情況比較，差異無統計學意義（P>0.05），研究可比，見表1。

1.2標本收集 ?冠狀動脈粥樣硬化患者均于發病后6 h內采集肘部靜脈血5 ml，體檢者于早上10點前采集肘部靜脈血5 ml，離心后分離取上清凍存與-80℃冰箱供后續實驗用。

1.3相關標準 ?高血壓參照《中國高血壓防治指南》2018修訂版：在未使用降壓藥物的情況下 SBP≥140 mmHg 和（或）DBP≥90 mmHg。糖尿病參照最新糖尿病診斷標準：一個隨機的靜脈血漿葡萄糖濃度≥11.1 mmol/L或空腹血糖濃度≥7.0 mmol/L（全血≥6.1 mmol/L）或餐后2h血糖濃度≥11.1 mmol/ L與75 g 2 h后無水葡萄糖在口服葡萄糖耐量試驗（OGTT）。血脂異常：TG>1.8 mmol/L，CHO>5.69 mmol/L，HDL>1.55 mmol/L，LDL>3.12 mmol/L。

1.4實驗儀器及試劑 ?全自動生化分析儀P800（德國羅氏診斷有限公司）、AU580全自動生化分析儀（美國貝克曼集團有限公司）、MK3酶標儀（美國Thermo）、流式細胞儀（美國BD公司）。總膽固醇（CHOL）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、尿酸（UA）試劑盒、葡萄糖（GLU）測定試劑盒，試劑盒購自上海羅氏;血清IL-17、CRP ELISA試劑盒購自武漢基因美公司;Intracellular Fixation&Permeabilization Buffer Set、抗人CD4FITC抗體、抗鼠CD4FITC抗體、抗人IL-17A-PE抗體、抗鼠IL-17A-PE抗體購自美國eBioscience公司。

1.5方法 ?①采用全自動生化分析儀P800檢測標本中CHOL、HDL-C、LDL-C、UA、GLU表達水平，按試劑盒說明書設定各項指標參數;②FCM 檢測外周血中TH17細胞頻率，將待檢血清50 μl及Th17抗體15 μl加入流式管內混勻后避光條件下孵育20 min，隨后加入500 μl溶血素繼續孵育10 min，再加入500 μl PBS混勻，2000 rpm 離心5 min，棄上清，用300 μl PBS重懸細胞，上機檢測Th17細胞百分比;③細胞因子IL-17、CRP檢測：取待測標本血清，采用雙抗體夾心法參照相應試劑盒說明書操作，使用MK3酶標儀在450 nm下測定吸光度（OD值），并通過標準曲線計算樣品中IL-17、CRP濃度。

1.6統計學分析 ?應用Prism 5.0軟件進行統計分析，計量資料采用（x±s）表示，兩兩比較采用t檢驗，多組數據比較采用F檢驗，P<0.05 認為差異有統計學意義。

2結果

與對照組比較，各組Th17細胞的頻率表達均升高，差異具有統計學意義（P<0.05），且AMI組升高水平高于SA組和UA組，差異具有統計學意義（P<0.05）; ELISA檢測結果顯示，與對照組比較，各組IL-17及CRP表達水平均升高，差異具有統計學意義（P<0.05），且AMI組升高水平高于SA組和UA組，差異具有統計學意義（P<0.05），見表2。

3討論

冠心病是一種血管冠狀動脈粥樣硬化病變導致的血管管腔狹窄繼而引起心肌缺血壞死誘發的心臟疾病。該病以嚴重的胸痛、心律失常、心衰為典型臨床特征[6]。依據心電圖ST段抬高分為兩大類[7]， 該病目前起病急，因此尋找更快更合適的血清學指標，及時給予干預治療，具有重要意義。近年來，不少學者提出炎癥學說，炎癥在動脈粥樣硬化的所有階段起著關鍵作用[8， 9]。

Th細胞協調免疫應答的主要手段之一是產生細胞因子。現已明確定義[10]的有分泌的Th1細胞亞群、Th2細胞亞群，最新研究發現Th17作為一種新型T細胞分子，與炎癥性疾病，過敏性疾病有重要關系。IL-17主要來自于Th17的分泌，其不光能夠分泌IL-6、IL-8，還能水解蛋白酶，另一方面也能募集中性粒細胞，一定程度上參與炎癥過程[11]。外周血中高水平的IL-17在急性冠脈綜合征患者表達，這也就說明IL-17在冠脈硬化性疾病中有著重要作用。本次研究顯示，與對照組比較，各組TH17及IL-17表達水平差異均有統計學意義（P<0.05），SA組TH17及IL-17表達水平均升高，UA組TH17及IL-17表達水平均升高，AMI組TH17及IL-17表達水平均升高，且AMI組升高水平高于SA組，AMI組升高水平高于UA組，差異均有統計學意義（P<0.05）。這些也與之前文獻所提到的結果相一致，這些數據進一步說明TH17、IL-17在冠狀動脈硬化疾病發生發展密切相關。

CRP是由肝臟合成的一種急性時相反應蛋白，主要作用于淋巴細胞膜表面受體，促進淋巴細胞增生，進一步抑制T淋巴細胞增生分化[12]， 在正常人血清中能檢測到的含量很少，當機體出現感染、損傷、炎癥或者腫瘤等情況時，其含量明顯升高。CRP與急性冠狀動脈粥樣硬化癥的發生發展密切相關[13]。研究發現，CRP作用于血管內皮細胞誘導粘附分子，從而釋放炎性介質，進一步加劇脂質的沉積，最終加重疾病進展。本研究中結果表明，與對照組比較，SA組CRP表達水平升高，UA組CRP表達水平升高， AMI組CRP表達水平升高，UA組CRP表達水平低于AMI組，且高于對照組，可說明CRP在冠狀動脈粥樣硬化中起到促進作用。

綜上所述，本次試驗發現TH17、IL-17和CRP在冠狀動脈粥樣硬化癥發生發展中起到重要作用，或可導致冠狀動脈粥樣硬化患者斑塊的不穩定性，然而其更為具體的機制需要后期進一步研究。

最后，感謝青島阜外心血管病醫院為本次研究提供數據支持！

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收稿日期：2019-2-13;修回日期：2019-3-13

編輯/成森