GC法同時測定3種川芎茶調制劑中8種揮發性成分

劉 杰， 劉長河， 王艷艷

(河南省中醫藥研究院,河南 鄭州 450004)

川芎茶調散始載于《太平惠民和劑局方》，由川芎、白芷、羌活、細辛、防風、荊芥、薄荷、甘草組成，具有疏風止痛功效，用于治療風邪頭痛、惡寒、發熱、鼻塞等癥，2020年版《中國藥典》收載了該方及其丸劑、顆粒劑等現代劑型[1]。研究表明，川芎茶調散具有解熱、鎮痛、抗炎作用[2]，能預防偏頭痛[3]，顆粒劑也有著解熱鎮痛活性[4]。目前，關于川芎茶調制劑的研究包括液質聯用法測定丸劑成分含量[5]、HPLC-CAD法測定散劑、顆粒劑成分含量[6-7]、HPLC法建立顆粒劑指紋圖譜[8]、GC-MS法分析揮發性成分組成[9-10]、顆粒劑質量標準[11]。

川芎茶調制劑中羌活[12-13]、薄荷[14]、荊芥[15]、川芎[16-17]含有多種揮發性成分，但2020年版《中國藥典》僅在川芎茶調顆粒項下有薄荷腦的TLC鑒別。因此，本實驗參照藥典和文獻[1,18]報道，建立GC法同時測定川芎茶調散、丸、顆粒中α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬烯、薄荷酮、薄荷腦、胡薄荷酮、胡椒酮、藁本內酯的含量，以期更全面地評價上述制劑質量。

1 材料

Clarus 500氣相色譜儀，配置FID檢測器、TotalChrom色譜數據工作站(美國PE公司)；DB-5石英毛細管氣相色譜柱(30 m×0.32 mm×0.25 μm)(美國Agilent Technologies公司)；SB-5200DT超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司)；AE240電子分析天平(瑞士Mettler-Toledo公司)。

川芎茶調散(河南省中醫藥研究院附屬醫院制劑室，批號210401、210501、210502、210601、210602)；川芎茶調丸(山西華康藥業股份有限公司，批號20200801、20200802、20200803、20210203、20210401、20210404)；川芎茶調顆粒(貴州威門藥業股份有限公司，批號201003、201201、B201001、B201003、B201102；湖南安邦制藥股份有限公司，批號210301；國藥集團德眾佛山藥業有限公司，批號21001)。

薄荷腦(批號110728-201707，純度99.8%)對照品購自中國食品藥品檢定研究院；α-蒎烯(批號PS020431，純度96.55%)、β-蒎烯(批號PS020105，純度95.53%)、檸檬烯(批號PS020126，純度97.19%)、(-)-薄荷酮(批號PS020152，純度94.44%)、胡薄荷酮(批號PS012550，純度99.50%)、胡椒酮(批號PS020565，純度95.0%)、藁本內酯(批號PS011687，純度98.0%)對照品均購自成都普思生物科技股份有限公司。所用試劑均為分析純；水為純化水。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

2.1.1 對照品溶液 精密稱取對照品α-蒎烯4.92 mg、β-蒎烯5.16 mg、檸檬烯9.58 mg、薄荷酮31.02 mg、薄荷腦55.92 mg、胡薄荷酮14.52 mg、胡椒酮6.58 mg、藁本內酯34.25 mg，置于同一25 mL量瓶中，乙酸乙酯定容至刻度，搖勻，制成質量濃度分別為0.196 8、0.206 4、0.383 2、1.240 8、2.236 8、0.580 8、0.263 2、1.370 mg/mL的貯備液，精密量取1、1、1、2、5 mL，分別置于50、25、10、10、10 mL量瓶中，乙酸乙酯定容至刻度，搖勻，即得(各成分質量濃度分別為α-蒎烯0.003 94、0.007 87、0.019 7、0.039 4、0.098 4、0.197 mg/mL，β-蒎烯0.004 13、0.008 26、0.020 6、0.041 3、0.103、0.206 mg/mL，檸檬烯0.007 66、0.015 3、0.038 3、0.076 6、0.192、0.383 mg/mL，薄荷酮0.024 8、0.049 6、0.124、0.248、0.620、1.241 mg/mL，薄荷腦0.044 7、0.089 5、0.224、0.447、1.118、2.237 mg/mL，胡薄荷酮0.011 6、0.023 2、0.058 1、0.116、0.290、0.581 mg/mL，胡椒酮0.005 26、0.010 5、0.026 3、0.052 6、0.132、0.263 mg/mL，藁本內酯0.027 4、0.054 8、0.137、0.274、0.685、1.370 mg/mL)。

2.1.2 供試品溶液 取散劑約8 g、丸劑和顆粒劑各約12 g，精密稱定，置于500 mL燒瓶中，加200 mL水，連接揮發油提取器，自提取器上端加水至充滿刻度并溢流入燒瓶為止，再緩慢加入乙酸乙酯4 mL，接上冷凝管回流提取4 h，放冷，從提取器上端小心吸取乙酸乙酯層，通過鋪有少許無水硫酸鈉的漏斗至10 mL量瓶中，乙酸乙酯分次洗滌提取器及冷凝管，洗滌液通過漏斗并入量瓶中，乙酸乙酯定容至刻度，搖勻，即得。

2.1.3 陰性樣品溶液 取缺羌活、缺薄荷、缺荊芥、缺川芎的陰性樣品適量，按“2.1.2”項下方法制備，即得。

2.2 色譜條件 載氣氮氣；程序升溫(初始100 ℃保持2 min，5 ℃/min升至200 ℃，20 ℃/min升至220 ℃，保持7 min)；進樣口溫度200 ℃；分流進樣，分流比10∶1；FID檢測器溫度250 ℃；氫氣、空氣體積流量45、450 mL/min；進樣量1 μL，色譜圖見圖1。由此可知，各成分色譜峰與相鄰峰均能達到基線分離，陰性無干擾。

2.3 線性關系考察 精密吸取對照品溶液1 μL，在“2.2”項色譜條件下進樣測定。以對照品質量濃度為橫坐標(X),峰面積為縱坐標(Y)進行回歸，并以信噪比(S/N)10∶1為定量限，3∶1為檢出限，結果見表1，可知各成分在各自范圍內線性關系良好。

1.α-蒎烯 2.β-蒎烯 3.檸檬烯 4.薄荷酮 5.薄荷腦 6.胡薄荷酮 7.胡椒酮 8.藁本內酯1.α-pinene 2.β-pinene 3.limonene 4.menthone 5.menthol 6.pulegone 7.piperitone 8. ligustilide

表1 各揮發性成分線性關系

2.4 精密度試驗 取散劑(批號210502)適量，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液, 在“2.2”項色譜條件下進樣測定6次，每次1 μL，測得α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬烯、薄荷酮、薄荷腦、胡薄荷酮、胡椒酮、藁本內酯峰面積RSD分別為2.82%、2.64%、2.35%、1.50%、1.60%、1.65%、1.23%、2.64%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩定性試驗 取散劑(批號210502)適量，于0、2、4、6、8、12、24 h在“2.2”項色譜條件下進樣測定7次，每次1 μL，測得α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬烯、薄荷酮、薄荷腦、胡薄荷酮、胡椒酮、藁本內酯峰面積RSD分別為1.33%、1.33%、1.06%、1.11%、1.74%、1.85%、2.35%、2.16%，表明溶液在24 h內穩定性良好。

2.6 重復性試驗 取同一批散劑(批號210502)適量，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液, 在“2.2”項色譜條件下進樣測定6次，測得α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬烯、薄荷酮、薄荷腦、胡薄荷酮、胡椒酮、藁本內酯含量RSD分別為1.65%、1.24%、1.03%、1.60%、0.85%、1.20%、1.15%、1.26%，表明該方法重復性良好。

2.7 加樣回收率試驗 稱取各成分含量已知的散劑(批號210502)6份，每份約4.0 g，精密稱定，精密加入含對照品的乙酸乙酯溶液2 mL，振搖混勻，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.2”項色譜條件下進樣測定6次，計算回收率。結果，α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬烯、薄荷酮、薄荷腦、胡薄荷酮、胡椒酮、藁本內酯平均加樣回收率分別為98.74% (RSD=1.51%)、97.05% (RSD=1.08%)、96.56% (RSD=1.02%)、96.42% (RSD=1.14%)、98.38% (RSD= 1.29%)、96.46% (RSD=1.37%)、96.24% (RSD=0.93%)、95.87% (RSD=2.84%)。

2.8 樣品含量測定 取18批樣品，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.2”項色譜條件下進樣測定，計算含量，結果見表2。

表2 各揮發性成分含量測定結果(n=3)

由此可知，散劑中8種揮發性成分均有檢出，其中藁本內酯、薄荷腦、薄荷酮含量較高，胡薄荷酮次之，其余較低；丸劑中藁本內酯、薄荷腦含量較高，薄荷酮、胡薄荷酮、胡椒酮次之，但均未檢測到α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬烯，可能是由于三者揮發性較大，在干燥過程中損失較多所致；顆粒劑中薄荷腦、薄荷酮含量較高，胡薄荷酮次之，其余較低，但均未檢測到藁本內酯，這是因為在制備過程中川芎采用水煎煮提取，并未專門提取其揮發性成分。

3 討論

3.1 色譜條件選擇 本實驗考察了DB-5、DB-WAX(PEG-20M)、DB-624色譜柱，發現DB-WAX色譜柱中薄荷腦、胡薄荷酮完全重疊；DB-624色譜柱中各揮發性成分保留時間較長，基線抬高，分離效果不理想，最終確定為DB-5色譜柱。再分別以80、90、100、110 ℃為色譜柱初始溫度，考察了不同升溫程序，發現“2.2”項下條件最佳，各揮發性成分色譜峰與相鄰成分分離完全，而且分析時間較短。

3.2 供試品溶液制備方法選擇 預實驗采用甲醇等溶劑進行超聲提取，發現僅含量較高的揮發性成分被檢出，而且溶劑提取后直接進樣會對色譜柱造成污染，影響柱效。因此，本實驗改成揮發油提取器制備供試品溶液，可增加取樣量，更有利于測定含量較低的揮發性成分。

3.3 結果分析

3.3.1 成分歸屬 根據相關文獻和陰性樣品色譜，發現α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬烯是羌活主要成分，胡薄荷酮是荊芥主要成分，薄荷腦是薄荷主要成分，薄荷酮是薄荷、荊芥主要成分，藁本內酯是川芎主要成分。

3.3.2 含量測定 同一廠家3種川芎茶調制劑中各揮發性成分的種類和含量較穩定，均在一定范圍內浮動。但2批川芎茶調顆粒中成分含量很低，表明其內在質量較差，需引起關注。

3.4 建議 有關部門可將揮發性成分的含量測定項納入川芎茶調制劑質量標準中，可更全面地控制其質量。另外，企業也可將上述項目作為內控質量標準，以期提高產品競爭力。