反式-芥子酸鹽在大鼠平滑肌周期性移行性復(fù)合運(yùn)動(dòng)（MMC）中作用機(jī)制性研究

陳 域 劉靖圓 石秦川（通訊作者） 李艷茹 劉玉梅

（空軍第九八六醫(yī)院肛腸外科，陜西 西安 710054）

中藥萊菔子為十字花科植物蘿卜（Raphanus sativus.L.）的干燥成熟種子。味甘、辛，性平，歸肺、脾、胃經(jīng)。具有消食除脹，降氣化痰之功效[1]?？捎糜谥委熞蝻嬍惩?dǎo)致的脘腹脹痛、瀉痢、大便秘結(jié)等[2]。現(xiàn)代研究證實(shí)萊菔子還具有降血壓[3]，降血脂、抗癌[4-5]等作用，這與其所含化學(xué)成分有關(guān)。經(jīng)過對(duì)萊菔子化學(xué)成分的研究，所得混合物靜置分層的乙酸乙酯部分寬度明顯多于其余有機(jī)溶劑。經(jīng)過色譜分離和羧丙基葡聚糖凝膠純化，所占比例高達(dá)80%的化合物為反式-芥子酸鹽，而《中國藥典》也以芥子堿硫氰酸鹽的含量為指標(biāo)對(duì)萊菔子進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量評(píng)定[6]。腸脹氣是手術(shù)后常見并發(fā)癥之一，多與手術(shù)局部刺激、麻醉藥物代謝和患者情緒緊張等因素有關(guān)。本文用大鼠模擬機(jī)械性腸梗阻導(dǎo)致腸脹氣，用反式-芥子酸鹽作用于大鼠胃腸道平滑肌，觀察平滑肌周期性移行性復(fù)合運(yùn)動(dòng)（Migrating motor complex，MMC），現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：準(zhǔn)備20kg 盛夏成熟炒干的萊菔子，搗爛備用，同時(shí)準(zhǔn)備好石油醚、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑和萃取、硅膠柱色譜分析等器材設(shè)備。嚴(yán)選106只機(jī)械性腸梗阻的大鼠。隨機(jī)分為3 組，治療組36例，對(duì)照組35 例，對(duì)照組35 例。

1.2 方法

1.2.1 提取反式芥子酸鹽：將20kg 萊菔子用石油醚加熱至60～90℃，脫脂揮發(fā)溶劑后再用75%乙醇回流萃取2 次，1h/次，所得溶液完全回收乙醇后加水靜置至分層。依此再用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水混勻并靜置分層。單取含量最多的乙酸乙酯部分并加熱提純。所得白色和淡黃色結(jié)晶存在反式-芥子酸結(jié)構(gòu)。經(jīng)X4 型顯微熔點(diǎn)測定儀在52.0～54.0℃時(shí)得到的白色結(jié)晶提示：1H-NMR（300 MHz，CDCL3-d6）δ：5.769（1H，br，s）為1 個(gè)酚羥基質(zhì)子信號(hào)；δ3.928（6H，s）為兩個(gè)化學(xué)環(huán)境相同的芳環(huán)上的甲氧基質(zhì)子信號(hào)。表明該化合物為具有對(duì)稱結(jié)構(gòu)的芳香化合物。δ7.577（1H，d，J=16.0 Hz）和δ6.284（1H，d，J=16.0 Hz）提示該化合物具有1 個(gè)反式雙鍵；而δ4.259（2H，q，J=6.9 Hz）和1.34（3H，t，J=6.9 Hz）表明該結(jié)構(gòu)中尚存在1 個(gè)乙氧基片段。δ144.8 和116.07為與酯羰基相連的兩個(gè)烯碳信號(hào)，且與苯環(huán)相連。經(jīng)鑒別可以確定該化合物為3，5-二甲氧基-反式-苯丙烯酸乙酯[7]，即反式-芥子酸乙酯。而熔點(diǎn)在180～183℃時(shí)得到淡黃色針狀結(jié)晶，可溶于甲醇等有機(jī)溶劑，分析得到的化學(xué)結(jié)構(gòu)：1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：7.57（1H，d，J=15.9 Hz），6.34（1H，d，J=15.9 Hz）是反式雙鍵的質(zhì)子信號(hào)；6.89（2H，s）和3.88（6H，s）均是兩個(gè)化學(xué)環(huán)境相同的芳香質(zhì)子和甲氧基質(zhì)子信號(hào)。而13C-NMR（500MHz，CD3OD）δ：170.8，147.5×2，147.1，139.6，126.8，116.4，106.7×2，56.9 則為芥子酸的特征信號(hào)。根據(jù)1H-NMR 與13C-NMR 數(shù)據(jù)，經(jīng)鑒別可以推斷出反式-芥子酸結(jié)構(gòu)[8]。

1.2.2 模擬大鼠機(jī)械性腸梗阻：目前在國內(nèi)常用的腸梗阻動(dòng)物模型中，一類是采取對(duì)腸管進(jìn)行鉗夾、壓迫、切除等方法造成一種機(jī)械性的梗阻。而另一類為腸缺血?jiǎng)游锬Ｐ停赐ㄟ^結(jié)扎腸系膜血管或限制腸系膜血管血流量的方法來模擬腸缺血狀態(tài)，進(jìn)一步發(fā)展即可達(dá)到血運(yùn)性腸梗阻[9-11]，本實(shí)驗(yàn)采取第一類方法。

1.2.3 措施：治療組36 例大鼠均采取灌服該反式-芥子酸鹽治療處理，灌服方法為1h/次，連服3 次。對(duì)照組35 例大鼠采取肌肉注射新斯的明0.1mg 觀察效果；對(duì)照組35 例大鼠采用小腹局部溫水熱敷等物理措施對(duì)照處理，不用任何藥物干預(yù)治療。分別在三組治療完成后的30min，1h，2h，6h，12h 及24h 以后觀察大鼠腸脹氣情況。反式-芥子酸鹽2g加水1000mL 溶解，每60min 取2mL 分次灌服。溫水熱敷為熱水袋隔布表層45℃適宜。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)：消化間歇性復(fù)合運(yùn)動(dòng)（MMC）[12]：胃在空腹?fàn)顟B(tài)下除存在緊張性舒縮外，也出現(xiàn)間歇性強(qiáng)力舒縮伴有較長時(shí)間的靜息期為特點(diǎn)的周期性運(yùn)動(dòng)。術(shù)后腸脹氣診斷：由各種原因引起的胃腸道不通暢或腸梗阻，使腸道的氣體不能隨胃腸蠕動(dòng)排出體外而產(chǎn)生腹脹，腸鳴音減弱等癥狀。

1.4 療效標(biāo)準(zhǔn)：顯效：經(jīng)治療處理后1h 內(nèi)肛門排氣，2h 后腹脹消失；有效：經(jīng)治療處理2h 內(nèi)肛門排氣，6h 后腹脹緩解；無效：經(jīng)治療處理6h 后癥狀緩解不明顯，肛門仍不能排氣，腹脹持續(xù)加重。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：運(yùn)用SPSS 19.0 軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

治療組總有效率達(dá)97.2%，其中顯效率為83.3%；對(duì)照組1 總有效率為85.7%，其中顯效率為40.0%；對(duì)照組2 總有效率為88.6%，顯效率為34.3%，且對(duì)照組2 中有2 例因癥狀無明顯原因出血明顯的膀胱區(qū)鼓脹現(xiàn)象，詳見表1。

表1 3 組模擬腸脹氣大鼠治療處理后療效統(tǒng)計(jì)表 [n（%）]

3 討論

萊菔子被祖國醫(yī)學(xué)評(píng)為除脹良藥。現(xiàn)代中藥提純技術(shù)為我們揭開了萊菔子的神秘面紗。反式-芥子酸鹽是單味萊菔子湯中分離出來的重要成分之一。MMC 始于胃體上部，并向胃腸方向傳播。每一周期為90～120min，分為四個(gè)時(shí)相：Ⅰ相內(nèi)只能記錄到慢波電位，稱為靜息期，可持續(xù)45～60min。Ⅱ相內(nèi)不規(guī)律的鋒電位，并開始出現(xiàn)不規(guī)則的胃腸蠕動(dòng)，持續(xù)時(shí)間30～45min。Ⅲ相內(nèi)每個(gè)慢波電位上均出現(xiàn)成簇的鋒電位，并有規(guī)律的高幅胃腸收縮，持續(xù)時(shí)間5～10min，然后收縮停止，轉(zhuǎn)入Ⅳ相。

消化間期MMC 是胃腸保持?jǐn)嗬m(xù)的運(yùn)動(dòng)，特別是Ⅲ相的強(qiáng)力收縮可起到“清道夫”的作用。產(chǎn)生這種機(jī)制的原因就在于支配胃腸平滑肌的副交感神經(jīng)興奮機(jī)制上。因?yàn)楦苯桓猩窠?jīng)的大部分節(jié)后纖維釋放的遞質(zhì)是乙酰膽堿（ACh），ACh 通過激活M 受體，促進(jìn)消化道的運(yùn)動(dòng)和消化腺分泌，而試驗(yàn)研究證實(shí)反式-芥子酸鹽能夠有效激活A(yù)Ch 受體，使得交感神經(jīng)興奮，進(jìn)而加劇了MMC 反應(yīng)最終導(dǎo)致腸相的發(fā)生。

腸脹氣是外科常見臨床癥狀之一。腸脹氣的發(fā)病機(jī)理與平滑肌MMC 運(yùn)動(dòng)障礙有關(guān)。目前臨床多采用溫水熱敷、小腹膀胱區(qū)域局部按摩或肌注新斯的明注射液等方法對(duì)癥處理，甚至有人通過艾灸通調(diào)腸腑、針刺足三里等方法增加腸蠕動(dòng)來緩解癥狀，但效果均不盡如人意。本實(shí)驗(yàn)通過模擬大鼠機(jī)械性腸梗阻，探尋治療術(shù)后腸梗阻的有效方法。研究發(fā)現(xiàn)，反式-芥子酸鹽水溶液分灌服大鼠可以有效促進(jìn)MMC 腸相的發(fā)生，增加ACh 活性，進(jìn)而治療腸脹氣。這與湯中的特征性物質(zhì)反式-芥子酸鹽的分解代謝作用有關(guān)。并且通過Agilent Technologies 高效液相色譜儀、ULTRASONIC CLEANER 潔拓超聲波機(jī)械超聲波清洗機(jī)以及遠(yuǎn)紅外可控調(diào)溫電爐證實(shí)具有反式-芥子酸結(jié)構(gòu)的化合物還有：①萊菔硫苷，可用以抑制細(xì)菌生長；②（4E）-5-[（6-O-芥子酰基）-β-D-吡喃葡萄糖基硫基）] 戊-4-烯腈，可用以降壓等。這對(duì)擴(kuò)展反式芥子酸的臨床應(yīng)用也有一定的指導(dǎo)意義。

以上試驗(yàn)數(shù)據(jù)證實(shí)了反式-芥子酸鹽激活A(yù)Ch的作用機(jī)理，但關(guān)于ACh 如何誘發(fā)MMC 則又是另一個(gè)復(fù)雜課題，期待相關(guān)的試驗(yàn)研究。