圓柱瘤蛋白、白細胞介素-6、白細胞介素-8在結直腸癌及癌前病變中的表達差異及其與患者臨床病理特征的關系

朱紹華，何創業，趙 芯

(空軍軍醫大學西京醫院消化內科，陜西 西安 710032)

結直腸癌(Colorectal cancer，CRC)是一種嚴重威脅人類生命的消化系統惡性腫瘤，相關統計顯示，與現階段相比，CRC發病率在未來十年內預計將增加60%左右[1-2]。此外，流行病學調查顯示，不論是在發達的西方國家，還是處于發展中的中國，CRC病死率也呈現出不斷增加的趨勢[3]。基因突變、飲食習慣以及環境等因素均會導致CRC發病。結腸息肉在上述因素的影響下會發展成為低級上皮肉瘤變(Low-grade intraepithelial neoplasia，LGIN)，嚴重時會形成高級別上皮內瘤變(High-grade intraepithelial neoplasia，HGIN)及CRC，但具體的發病機制尚無統一定論[4-5]。目前臨床上主要是通過結腸鏡檢查來對患者進行診斷，但由于該方式對患者自身身體狀況要求較高，且費用昂貴，限制了其廣泛應用，因此如何采取更加精確有效的檢測指標來診療CRC在臨床研究中具有極高的必要性[6]。

圓柱瘤蛋白(Cylindroma protein，CYLD)屬于一種泛素化酶，主要參與機體炎癥反應、細胞凋亡、惡性細胞增殖分化等，還能夠抑制癌癥發展，其異常表達能夠對機體是否存在自身免疫性疾病、心血管疾病起到警示作用[7]。白細胞介素(Interleukin，IL)-6屬于機體中一種多效應細胞因子，IL-8則來源于免疫細胞及腫瘤細胞，兩者都與多種惡性腫瘤的進展及轉移存在密切關聯[8-9]。本研究主要探究CYLD、IL-6及IL-8在CRC及癌前病變患者中的表達差異，并分析其與CRC患者臨床特征的關聯性，進而為患者的臨床診療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年5月至2022年5月在本院就診并進行治療的CRC患者70例、LGIN患者35例和HGIN患者35例，分別納入CRC組、LGIN組和HGIN組，同時選取體檢健康者70例納入正常組(N組)。四組一般資料比較差異無統計學意義(均P<0.05)，見表1。納入標準：研究所取標本均經臨床病理學組織診斷確定符合研究；所有研究對象均具有完整的臨床資料且對本研究知情同意；配合度較高。排除標準：研究對象納入研究前接受過放療、化療、生物療法或其他非手術治療；合并其他系統惡性腫瘤；存在其他系統疾病或感染疾病；妊娠期及哺乳期；理解、溝通能力差或意識障礙；心、肝、腎等臟器嚴重障礙。本研究所選取實驗標本及病理切片均經過醫院醫學倫理委員會審批通過。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫組化染色檢測CYLD、IL-6、IL-8表達情況：使用生理鹽水將取得的病理組織樣本沖洗干凈后，進行固定脫水，之后采用石蠟進行包埋并于切片機中切片(厚度保持在4 μm)。對切片依次進行脫蠟、復水、水化、抗原修復處理，在得到的組織切片上加入相應一抗并置于冰箱中過夜。沖洗后加入相應二抗室溫下放置30 min，再次沖洗后加入顯色液室溫下放置5～10 min，沖洗結束后脫水、封片，并于顯微鏡下分析染色結果。研究過程中所用的兔抗-CYLD多克隆抗體一抗(批號：ab137524)、小鼠抗-IL-6單克隆抗體一抗(批號：ab83053)、小鼠抗-IL-8單克隆抗體(批號：ab18672)一抗以及抗小鼠/兔IgG過氧化物酶聚合物二抗(批號：ab6728)均購自美國Abcam公司。測定過程中的標本均由2名工作經驗豐富的病理科醫師進行獨立檢閱，并給出評定結果。

表1 四組一般資料比較

1.2.2 CRC患者臨床病理資料統計：主要包括年齡、性別、腫瘤位置、臨床分期、腫瘤浸潤深度以及是否存在淋巴轉移。

1.3 觀察指標 比較各組CYLD、IL-6、IL-8表達情況，分析CYLD、IL-6、IL-8與CRC患者臨床病理特征的相關性以及CYLD與IL-6、IL-8表達的相關性。

2 結 果

2.1 四組CYLD、IL-6、IL-8表達情況比較 見表2。四組CYLD、IL-6、IL-8陽性表達率比較，差異有統計學意義(均P<0.05)。

表2 四組CYLD、IL-6、IL-8表達情況比較[例(%)]

2.2 CYLD與CRC患者臨床病理特征的關系 見表3。CYLD表達在CRC患者性別、年齡及腫瘤位置方面比較差異無統計學意義(均P>0.05)，在臨床分期、腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移等方面比較差異有統計學意義(均P<0.05)。

表3 CYLD與CRC患者臨床病理特征的關系[例(%)]

2.3 IL-6與CRC患者臨床病理特征的關系 見表4。IL-6表達在CRC患者性別、年齡及腫瘤位置方面比較差異無統計學意義(均P>0.05)，在臨床分期、腫瘤浸潤深度、淋巴結是否轉移等方面比較差異有統計學意義(均P<0.05)。

表4 IL-6與CRC患者臨床病理特征的關系[例(%)]

2.4 IL-8與CRC患者臨床病理特征的關系 見表5。IL-8表達在CRC患者性別、年齡及腫瘤位置方面比較差異無統計學意義(均P>0.05)，在臨床分期、腫瘤浸潤深度、淋巴結是否轉移等方面比較差異有統計學意義(均P<0.05)。

表5 IL-8與CRC患者臨床病理特征的關系[例(%)]

2.5 CRC患者CYLD與IL-6、IL-8表達的相關性 Spearman相關性分析結果顯示，CRC患者CYLD與IL-6、IL-8表達呈現負相關(r=-0.765、-0.289，均P<0.05)。

3 討 論

在我國，CRC不僅在導致癌癥相關性死亡的原因中占主導位置，其發病率、病死率在所有惡性腫瘤中也位居前列[10]。研究[11]顯示，約有20%的CRC患者確診時出現癌癥轉移的現象，且患者經臨床治療后預后轉歸仍不理想。CRC的臨床篩查主要分為非侵入性檢查和結腸鏡檢查。非侵入性檢查具有無創、安全、操作簡便等優點，但存在一定的誤診及漏診。結腸鏡檢查準確率雖較高，但風險較高。因此，不僅需要探究更有效的治療方案，如何采用更有效的標志物來早期評估患者病情并進行積極有效的干預也尤為重要[12]。

CYLD作為一種腫瘤抑制因子，參與NF-κB、Hippo、Notch、Wnt等多種信號通路傳導。在不同類型的癌癥患者中，CYLD表達水平均會出現不同程度的降低。相關研究[13-14]證實，NF-κB信號通路與CRC患者病情的進展存在顯著關聯性，NF-κB激活直接參與結腸炎及CRC的病變過程，當機體CYLD表達異常時NF-κB信號通路得到激活，加速了細胞的增殖分化，降低了凋亡基因的表達，從而導致腫瘤形成。研究[15-16]表明，IL-6/信號轉導及轉錄激活蛋白3(STAT3)信號通路可能會導致CRC細胞的增殖分化。IL-6的受體蛋白能夠與Janus激酶進行結合，通過STAT3來上調靶基因的表達，同時IL-6/STAT3信號通路還能夠促進腫瘤細胞分裂，調整細胞生長周期，介導腫瘤細胞的增殖分化。另一方面，腫瘤的形成過程與機體的免疫系統環境密不可分，成纖維細胞已被證實是IL-6的重要來源，而腫瘤微免疫環境與CRC細胞的生長均會受到成纖維細胞的影響，IL-6表達上調會加速CRC的發展。IL-8屬于NF-κB信號通路下游的基因，作為趨化因子的一種，其表達水平也與腫瘤的增殖、轉移存在一定關聯[17]。研究[18]顯示，IL-8表達增加會刺激CRC細胞的增殖，同時腫瘤及周圍區域的新生血管數量明顯增加，說明其能夠通過刺激腫瘤細胞侵襲來參與CRC的發生；另一方面，CYLD表達受到抑制時，NF-κB下游基因IL-8表達上調，進而促進CRC細胞增殖。本研究結果顯示，CYLD在所有組別研究對象中的陽性表達率由高到低依次為N組、LGIN組、HGIN組、CRC組，IL-6、IL-8陽性表達率由高到低依次為CRC組、HGIN組、LGIN組、N組，提示隨著機體病變程度的加深，CYLD的表達下調，IL-6、IL-8表達上調，說明CYLD、IL-6、IL-8表達可能與機體結直腸發生病變存在顯著關聯，它們可能直接或間接參與了癌前病變到CRC的發展過程，能夠對CRC患者病情起到警示作用。

通過分析CRC患者CYLD、IL-6、IL-8表達與其臨床病理特征之間的關系，發現CYLD、IL-6、IL-8表達均與CRC患者臨床分期、腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移存在顯著關聯，說明它們參與了結直腸腫瘤的增殖、侵襲以及轉移過程，與其在CRC及癌前病變中的表達呈現一致性[19]。進一步分析CRC患者CYLD與IL-6、IL-8表達的相關性，得知CYLD與IL-6、IL-8表達均呈現顯著負相關，推測在CRC進程中，NF-κB與IL-6/STAT3信號通路存在共同的作用途徑，后續可將上述信號通路聯系起來對CYLD、IL-6、IL-8在CRC患者中的臨床意義進行更深層次的探究[20]。

綜上所述，隨著結直腸病變程度的加深，CYLD的表達呈現下調趨勢，IL-6、IL-8的表達均呈上調趨勢；同時在CRC患者組織標本中，CYLD、IL-6、IL-8的表達均與臨床分期、腫瘤浸潤深度及淋巴結轉移存在顯著關聯，且CYLD與IL-6、IL-8表達呈現顯著負相關，提示CYLD的表達受到抑制可能會上調IL-6、IL-8的表達，從而加速CRC病情的發展，具有一定的臨床診療價值。