急性心肌梗死患者血清lncRNA p21表達水平及臨床意義

王永生 韓婉青 張俊偉

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是由于心肌細胞持續(xù)性缺血引起的心肌細胞發(fā)生損傷、壞死的疾病，早期準(zhǔn)確診斷AMI對降低不良心血管事件至關(guān)重要[1]。臨床AMI診斷依據(jù)主要是心肌損傷標(biāo)志物及心臟超聲心動彩超，但肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme，CK-MB)及肌鈣蛋白I(cardiac troponin I，cTnI)檢測靈敏度易受檢測條件的影響，造成漏診以及誤診。近年來發(fā)現(xiàn)，長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)在心血管疾病中發(fā)揮重要作用[2]。lncRNA p21是p53依賴型轉(zhuǎn)錄基因，在調(diào)控組織代謝、病理過程中發(fā)揮重要作用[3]。李昌等[4]研究顯示，腦動脈粥樣硬化患者血清lncRNA p21表達水平明顯下降，并參與腦動脈粥樣硬化的病理過程發(fā)生。基于以往研究報道，本研究探討AMI患者血清lncRNA p21表達水平及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院2019年1月至2021年1月收治92例AMI患者(AMI組)，其中男性54例，女性38例，年齡38～80歲，平均(59.86±10.81)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合急性ST段抬高型AMI的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②接受12導(dǎo)聯(lián)心電圖、二維超聲心動圖及冠狀動脈(冠脈)造影；③在發(fā)病6 h內(nèi)入院，血清心肌標(biāo)志物水平發(fā)生改變。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有血運重建病史、原發(fā)性心肌病、結(jié)構(gòu)性心臟病、心源性休克；患有嚴重肝、腎功能異常、惡性腫瘤；②合并急慢性感染。同期選擇本院體檢健康者92例為對照組，其中男性52例，女性40例，年齡38～79歲，平均(59.96±10.52)歲，兩組性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。本研究所有受試者知情同意，通過本院倫理委員會批準(zhǔn)(批準(zhǔn)文號：20190217)，符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

1.2 實驗室指標(biāo)收集 收集患者入院后24 h內(nèi)常規(guī)體檢、血常規(guī)、血生化數(shù)據(jù)。血生化包括：cTnI、CK-MB。血常規(guī)包括：三酰甘油(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)。cTnI、CK-MB水平采用DXI800全自動免疫分析儀(美國貝克曼庫爾特公司)檢測。HDL-C、LDL-C、TG、TC水平采用7170A全自動生化分析儀(日本日立公司)測定。

1.3 實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測lncRNA p21表達 采集AMI患者入院12 h內(nèi)、經(jīng)皮冠狀動脈植入術(shù)(percutaneous coronary intervention，PCI)治療后3天及健康者體檢當(dāng)天靜脈血4～5 mL，離心，留血清，用RNA提取試劑盒(北京索萊寶科技有限公司)提取血清總RNA，用NanoDrop 2000分光光度計(美國Thermo Scientific公司)檢測RNA濃度，用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本Takara公司)反轉(zhuǎn)錄得到cDNA。用7300型實時熒光定量PCR儀(美國ABI公司)對lncRNA p21進行擴增反應(yīng)，以GAPDH為內(nèi)參。引物由上海生工合成。lncRNA p21正向引物5’-CCCGGGCTTGTCTTTTGTT-3’，反向引物5’-GAGTGGGTGGCTCACTCTTCTC-3’；內(nèi)參GAPDH正向引物5’-TGAAGCAGGCATCTGAGGG-3’，反向引物5’-CGAAGCTGGAAGAGTGGCAG-3’。反應(yīng)條件：95 ℃，3 min；95 ℃，30 s；61 ℃，30 s；72 ℃，40 s；38個循環(huán)。對lncRNA p21相對表達量用2-ΔΔCT法計算。

1.4 冠脈造影檢查 由2名有經(jīng)驗、高年資醫(yī)師行常規(guī)冠狀動脈造影(coronary angiography，CAG)檢查，采用Allura Xper FD20大平板血管造影系統(tǒng)(荷蘭飛利浦公司)定量分析冠脈病變支數(shù)和狹窄程度。冠脈病變程度根據(jù)Gensini評分系統(tǒng)進行評價[6]，輕度病變?yōu)?～30分，中度病變?yōu)?1～60分，重度病變?yōu)?60分，根據(jù)Gensini評分將患者分為輕度病變組(n=29)、中度病變組(n=43)和重度病變組(n=20)。

1.5 隨訪 所有患者在PCI術(shù)后隨訪24個月，收集患者MACE發(fā)生情況及發(fā)生時間，將患者分為心血管不良事件(major adverse cardiovascular events，MACE)組(n=22)和非MACE組(n=70)。MACE指發(fā)生再發(fā)心肌梗死、不穩(wěn)定型心絞痛、惡性心律失常、心力衰竭、支架內(nèi)血栓形成、靶血管再次血運重建及全因死亡[7]。隨訪方式：電話或復(fù)診。

2 結(jié)果

2.1 兩組對象臨床資料比較 兩組對象年齡、性別、糖尿病史比例、高血壓史比例、高脂血癥史比例、HDL-C、LDL-C、TC、TG水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與對照組相比，AMI組血清CK-MB、cTnI水平較高(P<0.05)。見表1。

表1 兩組對象臨床資料比較

2.2 兩組對象血清lncRNA p21相對表達水平比較 與治療前相比，AMI組治療后血清lncRNA p21相對表達水平較高(P<0.05)。與對照組相比，AMI組治療前血清lncRNA p21相對表達水平較低(P<0.05)，兩組治療前后差值比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組對象血清lncRNA p21相對表達水平比較

2.3 不同冠脈病變嚴重程度AMI患者lncRNA p21相對表達水平及CK-MB、cTnI水平比較 與輕度病變組相比，中度病變組、重度病變組血清lncRNA p21相對表達水平較低(P<0.05)，CK-MB、cTnI水平較高(P<0.05)；與中度病變組相比，重度病變組血清lncRNA p21相對表達水平較低(P<0.05)，CK-MB、cTnI水平較高(P<0.05)。見表3。

表3 AMI患者lncRNA p21相對表達水平及CK-MB、cTnI水平比較

2.4 AMI患者lncRNA p21表達水平與CK-MB、cTnI水平相關(guān)性分析 Pearson分析顯示，AMI患者血清lncRNA p21水平與cTnI、CK-MB水平均呈負相關(guān)(r=-0.778，r=-0.737，P<0.05)。見圖1、2。

圖1 AMI患者血清lncRNA p21表達水平與cTnI水平的散點圖(n=92)

圖2 AMI患者血清lncRNA p21表達水平與CK-MB水平的散點圖(n=92)

2.5 lncRNA p21表達水平聯(lián)合cTnI、CK-MB對AMI的預(yù)測價值 以lncRNA p21表達水平、cTnI、CK-MB血清水平為檢驗表量，以是否患AMI為狀態(tài)變量繪制ROC曲線,結(jié)果顯示，lncRNA p21水平預(yù)測AMI的曲線下面積(area under the curve，AUC)為0.861(95%CI:0.808～0.914)，lncRNA p21相對表達量最佳截斷值為0.80，其靈敏度、特異度分別為70.70%、89.10%；lncRNA p21聯(lián)合cTnI、CK-MB預(yù)測AMI的AUC為0.956(95%CI:0.928～0.983)，其靈敏度、特異度分別為89.10%、94.60%。見圖3。

2.6 AMI患者治療前、后血清lncRNA p21表達水平與AMI患者預(yù)后的關(guān)系 與非MACE組相比，MACE組治療前血清lncRNA p21相對表達水平較低(P<0.05)，兩組治療后lncRNA p21相對表達水平及兩組治療前后差值比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

圖3 lncRNA p21表達水平聯(lián)合cTnI、CK-MB預(yù)測AMI的ROC曲線

表4 兩組血清lncRNA p21相對表達水平比較

3 討論

AMI發(fā)病主要是在冠狀動脈粥樣硬化基礎(chǔ)上，冠狀動脈被形成的血栓部分或完全堵塞，導(dǎo)致心肌細胞血液供應(yīng)降低或暫停，誘發(fā)缺血性心肌細胞壞死[8]。AMI患者主要臨床癥狀為體溫升高、胸骨后持續(xù)劇烈性疼痛，嚴重時可出現(xiàn)心律失常、休克等癥狀。有學(xué)者[9]發(fā)現(xiàn)，早診斷、早治療AMI，可明顯減少患者術(shù)后并發(fā)癥及改善預(yù)后。目前，診斷AMI的方法較多，其中血清心肌細胞損傷標(biāo)志物cTnI、CK-MB是常用的心肌損傷指標(biāo)[10]。當(dāng)心肌細胞受損傷后，心肌細胞會分泌大量cTnI、CK-MB，導(dǎo)致AMI患者血清cTnI、CK-MB水平迅速升高[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，輕度病變組、中度病變組和重度病變組血清CK-MB、cTnI水平依次升高，但臨床上僅依靠檢測cTnI、CK-MB水平診斷AMI，可能造成誤診、漏診。

lncRNA是長度大于200個核苷酸的非編碼RNA，可調(diào)控轉(zhuǎn)錄基因表達、多種生物學(xué)過程。據(jù)報道[12]，lncRNA對機體血管內(nèi)皮功能、免疫炎癥反應(yīng)、血管新生等都有調(diào)控作用。lncRNA可通過影響平滑肌細胞增殖、遷移及凋亡等而影響動脈粥樣硬化[13]。lncRNA p21是一種細胞增殖、凋亡的調(diào)控因子及p53依賴性細胞凋亡的基因，影響各種疾病的發(fā)生、發(fā)展[14]。p21是常見的抑癌基因，常在腫瘤細胞G0/G1期發(fā)揮作用，通過組織細胞周期而減少DNA復(fù)制[15]。以往研究[16-17]證實，過表達LncRNA p21可抑制腫瘤細胞侵襲和遷移，與Wnt/β-catenin信號通路、Notch信號通路有關(guān)。近年來有研究[18-19]顯示，lncRNA p21可在動脈粥樣硬化疾病中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。Wu等[20]研究顯示，lncRNA p21表達水平在ApoE-/-小鼠的動脈粥樣硬化斑塊中下降，進一步探索發(fā)現(xiàn)，過表達lncRNA p21可通過增強p53基因表達抑制血管平滑肌細胞增殖并促進凋亡。本研究發(fā)現(xiàn)，AMI組血清lncRNA p21相對表達水平較對照組低，輕度病變組、中度病變組和重度病變組血清血清lncRNA p21相對表達水平依次降低，提示lncRNA p21可能參與AMI發(fā)生、發(fā)展進程。lncRNA p21可能通過影響血管平滑肌細胞增殖、凋亡而影響AMI進程。本研究ROC曲線顯示，lncRNA p21水平預(yù)測AMI的AUC為0.861(95%CI：0.808～0.914)，其靈敏度、特異度分別為70.70%、89.10%，提示lncRNA p21對AMI具有一定診斷價值。本研究發(fā)現(xiàn)AMI患者血清lncRNA p21水平與cTnI、CK-MB水平均呈負相關(guān)，且lncRNA p21聯(lián)合cTnI、CK-MB預(yù)測AMI的AUC為0.956(95%CI：0.928～0.983)，其靈敏度、特異度分別為89.10%、94.60%，提示lncRNA p21可能與cTnI、CK-MB共同影響AMI病情進展，lncRNA p21聯(lián)合cTnI、CK-MB可提高臨床上單獨用lncRNA p21或cTnI、CK-MB預(yù)估AMI發(fā)生的價值。與非MACE組相比，MACE組治療前血清lncRNA p21相對表達水平較低，提示治療前l(fā)ncRNA p21相對表達水平可能與AMI患者PCI治療后MACE有關(guān)。本研究顯示，治療后血清lncRNA p21相對表達水平在MACE組與非MACE組間差異不顯著，可能是由于本研究樣本數(shù)量有限，研究區(qū)域單一。

綜上所述，AMI患者血清中l(wèi)ncRNA p21表達水平下降，但是lncRNA p21在AMI中具體作用機制在本研究中尚未探究，仍需深入探索。