木屑培養基對傳代金針菇菌種的復壯效果探究

王 雷 劉 暉 景雪梅 茍登科 淡媛媛 劉 亮 陶 軍

（天水眾興菌業科技股份有限公司，甘肅 天水 741000）

金針菇（Flammulina velutipes）又名構菌、冬菇、毛柄金錢菌等[1,2]，屬木腐菌類，是我國重要的栽培食用菌之一，工廠化栽培規模已穩居世界首位[3]。金針菇在工廠化栽培過程中，常出現菌絲老化、出菇不整齊、出菇延遲、產量嚴重下降等現象，這些現象大多是由菌種種性退化造成的[4]。造成菌種退化的原因較多，包括核型改變、基因突變、菌株無性繁殖體感染病毒、細胞內酶合成能力下降等；還有受菌種自身遺傳多樣性、營養不良、無限傳代、長期低溫保藏等因素的影響[5,6]。為保持菌種的穩定性，生產上多采用蒸餾水、液氮等保藏技術來抑制菌絲的無性生長；如果保存操作不當，也會對菌種造成損傷，導致種性退化[7-9]。

目前，金針菇菌種一般采用PDA 培養基進行傳代培養，雖然方便省時，成活率高，但成本較高。與PDA 培養基相比，木屑培養基含有木腐菌所必需的纖維素、半纖維素和木質素等營養物質，對菌絲各種酶的活性有保持和促進作用，能減緩菌絲老化，有利于保持菌株原有的特性和活力[10]。木屑培養基還具有較強的保水能力，使得菌絲在保藏過程中不會因失水而降低活性。食用菌菌種復壯的方法主要有傳統的組織分離法、菌絲尖端分離法、原生質體再生法等[4]。關于木屑培養基傳代培養保持金針菇菌種穩定性的方法研究較為少見。本研究以選取的11 個白色金針菇菌株為對象，采用木屑培養基對其菌種進行復壯培養，通過測定其菌絲生長速度、子實體農藝性狀及子實體品質等指標，探究木屑培養基對傳代金針菇菌種的復壯效果。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試白色金針菇菌株共11 個（表1），均由天水眾興菌業科技股份有限公司研發中心提供。

1.2 培養基配方

木屑培養基：木屑48 g，葡萄糖5 g，麩皮45 g，米糠5 g，蛋白胨 5 g，KH2PO40.5 g，MgSO40.5 g，豆粕8 g，維生素B10.067 g，水130 mL。每試管（20 mL）裝7 g。母種培養基：PDA 培養基（來源于日本）39 g，水1 000 mL。液體培養基：白砂糖12.8 g，豆粕2.11 g，MgSO40.42 g，KH2PO40.42 g，水640 mL，pH 6.3～7.3。每三角瓶（1 L）裝640 mL。栽培料（干料）配比：玉米芯34.5%，麩皮8.1%，米糠36.1%，大豆皮5.1%，棉籽殼5.1%，啤酒糟5.1%，貝殼粉1.7%，甜菜渣3.6%，碳酸鈣0.7%，含水量為66%～67%。

1.3 液體菌種的制作

從長滿菌絲的PDA 培養基上切取6 塊邊長為4 mm 的菌種塊，接入三角瓶液體培養基中，在黑暗、19 ℃、150 r/min 條件下振蕩培養7 天。

1.4 測定指標及方法

（1）菌絲生長速度。參考楊慧等[11]的方法，稍作修改。從母種試管中切取邊長為2 mm 的菌種塊轉接至木屑培養基（試驗組）和PDA 培養基（對照組）上，在19～20 ℃、空氣相對濕度60%～70%下避光培養10 天，定時觀察試驗組與對照組的菌絲生長情況并測量菌落半徑。每個菌株設3 次重復，每重復4 個平板。計算菌絲日平均生長速度。

（2）子實體農藝性狀。將試驗組和對照組的11 個菌株按照工廠化瓶栽模式栽培，栽培瓶容積為1 500 mL，每瓶裝培養料1 120～1 190 g（以濕料計）。經121 ℃高壓滅菌，待瓶體冷卻至低于20 ℃后，采用液體菌種發酵罐培養8 天后進行接種，接種量為40 mL，每個菌株接種3 筐，每筐16瓶。于14～18 ℃、空氣相對濕度70%～80%條件下避光培養23 天后搔菌，移入育菇房。按照常規工廠化調控方法進行培育，經過菌絲恢復期、出芽期、抑制期、生長期，共27 天左右采收。分別測定試驗組與對照組的單瓶產量、菌蓋直徑、干爽度、切根面白度、根部緊實度和菌柄硬度等。

1.5 數據分析

利用SPSS 26 進行數據統計分析。

2 結果與分析

2.1 木屑培養基培養的菌株菌絲生長特性

11 個供試菌株在木屑培養基復壯培養下的菌絲生長速度測定結果見表1。1225③、816-1S、CF-2、Q10、Q19-1D、Q2004-1S、Q2004-2S、T-0415②等8 個菌株的菌絲生長速度均有不同程度的提高，Q30、ZY-10、ZY-14 在處理前后無明顯變化。其中，菌株1225③和T-0415②經木屑培養基復壯的3 次重復的菌絲生長速度均顯著高于對照；CF-2、Q19-1D、Q2004-1S 等3 個菌株有2 次重復顯著高于對照；菌株816-1S、Q10、Q2004-2S 僅有1 次重復顯著高于對照。

表1 不同處理11 個白色金針菇菌株的菌絲生長情況

從菌絲長勢方面看，經木屑培養基復壯后，菌株Q10 和Q30 的各重復菌絲長勢均優于對照；菌株816-1S 和Q2004-2S 有2 次重復優于對照；而菌株Q19D 有2 次重復的長勢比對照差；其余6 個菌株在培養前后菌絲長勢差異不明顯。

綜上，木屑培養基復壯培養能顯著提高大部分菌株的菌絲生長速度，但對菌絲長勢的促進作用不明顯，僅對個別菌株有效果。

2.2 木屑培養基處理的子實體農藝性狀表現

11 個菌株的單瓶產量和菌蓋直徑測定結果見表2。其中，1225③、Q2004-1S 和Q2004-2S 等3個菌株經木屑培養基復壯后，3 次重復的單瓶產量均顯著高于對照，菌蓋直徑為4.0～10.0 mm，與對照比差異不明顯；CF-2、Q19-1D、Q30 和ZY-10等4 個菌株的平均單瓶產量有2次重復顯著高于對照，菌蓋直徑為4.0～12.0 mm，與對照相比也無明顯差異；其余的菌株816-1S、Q10、T-0415②和ZY-14 僅有1 個重復的平均單瓶產量顯著高于對照。

表2 11 個白色金針菇菌株經木屑培養基復壯后的子實體農藝性狀

綜上，木屑培養基復壯處理能夠顯著提高大部分菌株的子實體產量，但對菌蓋直徑的影響不明顯。

一般認為，白色金針菇子實體的菌蓋越小，菇體越干爽，切根面越白，根部越緊實，菌柄越硬，則農藝性狀越佳。由表3 可知，11 個白色金針菇菌株經木屑培養基復壯后，以菌株T-0415②的菌蓋較大，切根面白度稍差，為較白凈，其總體栽培農藝性狀較差，但也能達到采收標準；其余菌株的子實體菌蓋大小、干爽度、切根面白度、根部緊實度及菌柄硬度均表現較好。表明木屑培養基復壯處理對絕大多數菌株的子實體品質有明顯的改善作用。

表3 11 個金針菇菌株經木屑培養基復壯后的子實體品質

3 結論與討論

在金針菇工廠化生產中，一個菌株需要多次的傳代培養才能滿足生產需求，現有菌種培養工藝多采用PDA 培養基進行傳代培養。雖然PDA 培養基營養豐富，但長期單一營養配方不利于促進菌絲胞外酶的分解。此外，繼代培養時菌種一直處于活躍的細胞生長和復制狀態，菌絲細胞需要經歷染色體復制、細胞核遷移、粉孢子形成、體細胞單核化等一系列生理活動，這些生理活動均會影響金針菇菌種的種性[12]。而金針菇母種的穩定性直接影響其品質和單產，因此，如何減緩菌種種性退化是金針菇產業發展中急需解決的問題。

本試驗結果顯示，經過木屑培養基復壯后，菌株1225③和T-0415②的菌絲生長速度顯著高于對照，且大多數菌株的菌絲生長速度均能提高，但僅對個別菌株的菌絲長勢有促進作用；菌株1225③、Q2004-1S 和Q2004-2S 的平均產量顯著高于對照，大部分菌株的單產都得到提升，但對菌蓋直徑沒有明顯的作用；大部分菌株的子實體農藝性狀表現較好，表明復壯效果明顯。

試驗中還發現，個別菌株經過木屑培養基復壯后，與對照相比，出菇的畸形菇數量較少，說明在同一栽培瓶內的菌種一致性較好。因此，木屑培養基可使金針菇菌種達到一定的復壯效果，且能使大多數菌株保持較好的穩定性，可在生產中推廣應用。