淺談雞傳染性支氣管炎與傳染性喉氣管炎的比較

黃 鑫，劉婷婷，劉峻池

（南京市畜牧獸醫站，江蘇 南京 210000）

0 引言

傳染性支氣管炎和傳染性喉氣管炎是在雞的養殖過程中非常常見的兩種疾病，極大地危害了雞群的健康，進而造成養殖戶的損失，為了更好地區分雞傳染性支氣管炎和雞傳染性喉氣管炎，我們從病原學、流行病學、臨床癥狀、病理變化和診斷技術這五個方面對兩種疾病進行了比較。

1 病原學

1.1 傳染性支氣管炎

該病來自于冠狀病毒科冠狀病毒屬的傳染性支氣管炎病毒所引起，是一種急性以及高度接觸性的呼吸道傳染病，傳染性支氣管炎病毒擁有眾多不同的血清型，繼而引發出不同癥狀的傳染性支氣管炎。該種病毒的生命力并不算很強，滅活只需要在56℃環境下作用15分鐘即可，像2%氫氧化鈉溶液這類一般的消毒藥也同樣可以殺死該病毒。

1.2 傳染性喉氣管炎

該病由基因組為線性雙股DNA的皰疹病毒科的傳染性喉氣管炎病毒引起，是一種高度接觸性的上呼吸道感染疾病，傳染性喉氣管炎病毒僅有一個血清型，但根據病毒的毒力強弱的不同，依然能夠分為急性型以及溫和型。在60℃左右的生理鹽水中作用15min即可讓其失去病毒活性，若想殺死該病毒，使用普通的化學性消毒劑就可以實現。

2 流行病學

2.1 傳染性支氣管炎

該病一般情況下只會對雞造成感染，包括各個年齡段和各個品種，但其中雛雞發病率和病死率都很高。傳染源主要為發病雞、痊愈后的帶毒雞和被污染的飼料與水等。病毒主要通過呼吸道排出，空氣與飛沫都可以作為傳播媒介感染易感雞群。該病的發生季節性并不明顯，不過春、冬季寒冷天氣時最容易發生。

2.2 傳染性喉氣管炎

雞作為該病最主要的自然宿主健康最容易受到危害，育成雞最為多發且癥狀是最為典型的。傳染源參考雞傳染性支氣管炎，主要為發病雞、痊愈后的帶毒雞和被污染的飼料與水等，主要通過呼吸道、眼和消化道進行傳播。該病毒在高溫下存活率會大大降低，所以早春、秋冬季這種寒冷天氣最容易感染，夏季就會很少發生感染。康復之后的雞群會獲得較強保護力，但仍然是會帶毒以及排毒的。

3 臨床癥狀

3.1 傳染性支氣管炎

雞傳染性支氣管炎的臨床表現較為復雜，一方面文章中提到傳染性支氣管炎病毒具有眾多不同血清型而且變異較快，這就導致復雜多變的臨床癥狀；另一方面與眾多致病因子混合感染有關。該病有呼吸道型以及腎病變型這兩種病型。

3.1.1 呼吸道型

在呼吸道型中，病雞往往會忽然發病并出現呼吸道癥狀，然后迅速地波及整個雞群。雛雞表現為精神萎靡，食欲減退，伴有伸頸甩頭、張口呼吸和咳嗽等癥狀，呼吸時有啰音，個別雞還會出現鼻竇腫大，流鼻液和眼淚。成年雞的呼吸道癥狀表現相對較為輕微，癥狀主要表現在產蛋性能上，體現在產蛋量變少，畸形蛋變多，蛋品質量變差等各個方面，蛋雞即使康復以后，產蛋量也很難再達到感染之前的水平。

3.1.2 腎病變型

在腎病變型中，發病初期會有著非常輕微的呼吸道癥狀或者不出現呼吸道癥狀，包括咳嗽、打噴嚏、甩頭、喘息等，但是非常的不明顯，在夜間可能才會相對比較明顯一些，若沒有其余的并發癥或者混合感染的明顯癥狀，很容易就會被忽視掉，待呼吸道的相關癥狀消失掉以后，患病雞群會開始大量出現異常，比如精神萎靡不振、厭食、口渴和怕冷等，還會持續地排出糞便，排出糞便為白色或稀如水狀，雞群因脫水迅速消瘦，體重降低，飲水量也大大增加，病雞胸肌發紺，更甚者全身皮膚顏色發暗。死亡高峰在發病的第10～12d，死亡停止于21d之后，病死率大概為30%。

3.2 傳染性喉氣管炎

相比較于傳染性支氣管炎，傳染性喉氣管炎的臨床癥狀相對簡單一些，這歸結于傳染性喉氣管炎只有一個血清型。雖然只有一個血清型，不過根據毒力的強弱，臨床上該病可以分為急性型和溫和型。

3.2.1 急性型

高致病性病毒株會引起急性型傳染性喉氣管炎，在發病時，雞會出現流淚和眼睛分泌物增多的情況，常常伴發結膜炎，鼻孔會流出半透明狀鼻液。病雞呼吸出現異常困難的情況，呼吸時張開嘴巴，一般伏臥于地面，頭部和頸部向前向上伸出，身體伴隨呼吸像波浪式起起伏伏，表情極其的痛苦，精神十分的萎靡。病雞咳嗽強烈，咳嗽聲呈濕啰音，嚴重者會咳出干酪狀滲出物甚至咳出血痰，咳出的血痰經常會出現在料槽或者雞籠上，有的雞嘴角也會有血色痕跡，部分病雞會因為呼吸道被堵而出現窒息性死亡，病雞死亡時姿勢多為仰臥，死后雞冠呈現暗紫色。

3.2.2 溫和型

低致病性病毒株會引起溫和型傳染性喉氣管炎，溫和型傳染性喉氣管炎主要侵害三十至四十日齡的雞，在發病時，癥狀比較緩和，傳播速度較慢，死亡情況也要比急性型少的多。溫和型的癥狀集中在眼部，主要是眼睛流淚和腫脹，出現眼結膜炎，開始只是有泡沫性的分泌物在眼角出現，然后病雞不斷用爪子去抓撓眼部，這時眼睛開始有輕度的充血癥狀，再過一兩日后開始有眼淚流出，先是漿液性質的然后就是膿性質的，眼瞼也會腫脹和粘連在一起，嚴重時會出現失明。產蛋雞的產蛋率出現下降，畸形蛋數量增多。

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4 病理變化

4.1 傳染性支氣管炎

4.1.1 呼吸道型

主要病變表現為氣管、支氣管、鼻腔和竇內等呼吸道系統有漿液性、卡他性和干酪樣滲出物，鼻竇、喉頭、氣管黏膜充血、水腫、增厚，氣囊輕度混濁、增厚。產蛋雞腹腔內卵泡充血、出血、變形，出現液狀的卵黃物質，如果在雛雞階段就發生了感染，那么成年之后的雞就會出現輸卵管發育異常，包括輸卵管長度不到正常情況的一半，輸卵管的管腔會狹小以及閉塞，影響蛋雞產蛋。

4.1.2 腎病變型

主要表現為腎臟蒼白腫大出血，整個腎臟表面會出現斑駁的網線狀（花斑狀），也就是俗稱的“花斑腎”，這是由于腎小管和輸尿管擴張，白色的尿酸鹽沉積于表面而產生，嚴重的病例可以在心、肝、腹部也發現尿酸鹽的沉積。

4.2 傳染性喉氣管炎

4.2.1 急性型

喉頭和氣管組織黏膜腫脹、充血、出血。在喉頭和氣管黏膜上有帶血黏液或者血凝塊，有的會出現酪狀滲出物，滲出物會使氣管管腔變窄，形成易脫落和剝離的假膜，脫落后很容易阻塞喉頭和氣管，特別是喉裂部。在干酪狀的滲出物從黏膜上脫落之后，黏膜會迅速地發生充血，出現輕度增厚的情況，伴隨點狀或者斑狀的出血以及氣管環的出血。這種點狀出血和黏膜充血的癥狀也會發生在鼻腔以及眼眶下竇黏膜，有些病雞會有血凝塊或干酪樣物伴隨鼻腔的滲出物一起排出。

4.2.2 溫和型

表現為漿液性結膜炎，結膜會出現充血、水腫，甚至伴有點狀出血，有些雞的眼瞼特別是下眼瞼出現腫脹，鼻腔產生多量黏液。

5 診斷技術

5.1 傳染性支氣管炎

根據雞傳染性支氣管炎診斷技術的國家標準目前有病毒分離、反轉錄－聚合酶鏈反應、微量血凝抑制試驗以及氣管環組織培養血清中和試驗這四種診斷方法，以下就其中的反轉錄－聚合酶鏈反應作簡單的介紹。

首先進行樣品的采集，如果是呼吸道型的病例，要將氣管作為采樣位置采集滲出物，剛撲殺的病雞話也可采集支氣管和肺組織；如果是腎病變型和產蛋下降的病雞，要采集腎臟或輸卵管，病料要保持新鮮。

向滅菌過的0.85%的生理鹽水中加入組織樣品如肺臟或腎臟等1～3g進行研磨，研磨后制成5～10倍的懸浮液，在冷凍融化2次～3次后，離心取上清液用于核酸抽提；棉拭子在充分的擰干后除去，取0.5ml樣品液離心后取上清液用于核酸抽提。

在滅菌的1.5ml離心管中放入100μl處理好的上清液，實驗設立陰性對照和陽性對照，其中陽性對照為傳染性支氣管炎病毒M41株陽性病毒液，將900μl冰冷的裂解液分別加入待抽提的樣品和陰陽對照中，劇烈混合15s，然后在室溫下放置5min；把200μl的三氯甲烷加入進去后顛倒混勻2次，再劇烈混合10s，4℃以下離心取500μl上層液體放入新拿取的1.5ml滅菌離心管，將500μl異丙醇加入進去，在4℃放置10min后離心，將上清液小心地棄去，加入1ml75%乙醇溶液，輕輕緩慢的上下顛倒兩次，離心棄去上清后風干5～10min，隨即獲得所需要的RNA。

在0.5ml滅菌PCR管中依次加入5×AMV緩沖液2μl，10mmol/L的dNTPs 0.5μl，反轉錄引物20pmol，核糖核酸酶抑制劑10 U，反轉錄酶AMV2.5 U，總體積為25μl，剩余部分用無RNase水補齊；用配制好的反轉錄混合液重新懸浮抽提制備得到的RNA，在室溫環境下放置10min；42℃水浴1h再冰浴兩分鐘即可得到用于PCR的反轉錄產物。

將18.5μl無RNase水，2.5μl的10×PCR緩沖液，2μl的2.5mmol/L的dNTPs，1.5μl的4PS PCR混合引物，0.5μl2.5U Taq酶和2微升反轉錄產物加入0.5ml滅菌PCR管中混勻。

以94℃3min、94℃40s、53℃30s、72℃30s，30個循環，72℃7min的條件在PCR儀中運行，同時設立陰陽對照。反應結束后每個樣品吸取5μl進行瓊脂糖凝膠電泳，參照選擇標準100 bp DNA分子量標準物，75V恒壓30min，在紫外燈下進行觀察。

若陽性對照在740 bp 和290 bp 處分別有DNA條帶，陰性對照無相應條帶，則實驗成立；待檢測樣品若出現相應條帶，或者僅單獨在740 bp 和290 bp 處出現條帶，則可判為陽性。

5.2 傳染性喉氣管炎

根據雞傳染性喉氣管炎診斷技術的農業行業標準，可以通過病毒分離、血清中和試驗、瓊脂免疫擴散試驗、聚合酶鏈式反應和熒光定量PCR等技術來對傳染性喉氣管炎來進行診斷和檢測，以下就其中的熒光定量PCR技術來進行簡要的介紹。

5.2.1 熒光定量PCR

在加入了500μlDNA提取裂解液的1.5ml離心管中分別加入100μl待檢樣品、陰性對照和陽性對照，顛倒混勻，在55℃進行裂解30min，將按照25：24：1比例配置好的酚、氯仿和異戊醇等體積加入，混勻后靜置10min，離心取上清加入2倍體積的無水乙醇，混勻后可見絮狀DNA，-20℃環境下沉淀30min離心，用75%乙醇洗滌棄去上清的部分繼續離心，干燥之后加入20μl無核酸酶水即得到需要的DNA。也可以使用具有同樣效果的DNA提取試劑和方法，比如自動化的核酸提取儀以及配套的提取試劑進行提取。

按照工作濃度10pmol/μl去稀釋引物以及探針 ，根據熒光定量PCR的試劑盒說明書進行反應體系的配制，將上下游引物各1μl和探針0.5μl加入PCR管中，分別在PCR管中加入5微升的雞傳染性喉氣管炎病毒DNA和超純水作為陽性對照和陰性對照，其余PCR管中加入待檢測樣品的DNA模板5μl。在熒光定量PCR儀中設置反應程序，95℃預變性5min，然后是40個循環的95℃10s和60℃30s，在60℃時收集熒光信號。

當陽性對照的擴增曲線有明顯對數增長期并且Ct值≤35，且陰性對照擴增曲線無對數增長期，則試驗成立。在試驗成立條件下，若樣品Ct值≤35且有標準S型擴增曲線則為陽性；若樣品無Ct值或者Ct值＞38且沒有標準擴增曲線則為陰性；若樣品35＜Ct值≤38，且有標準S型擴增曲線則為可疑，重新檢測后若結果不變則為陽性，否則為陰性。