熒光原位雜交技術在產前診斷染色體嵌合體中的作用分析

鄢 一

（葫蘆島市中心醫院，遼寧 葫蘆島 125001）

產前診斷是現代臨床上產科應用十分常見的診斷方式[1]，其主要目的是盡可能降低現代人口的出生缺陷率，使現代人口的綜合素質能夠得到有效提高。雖然染色體病癥在目前臨床上還尚無有效且良好的治療方式，但進行有效的產前診斷能夠避免染色體異常患兒的出生[2]。傳統的染色體核型分析技術對于染色體疾病具有極高的診斷準確率，屬于染色體疾病的診斷金標準，這種診斷方式是臨床上應用最為廣泛且效果最優的產前診斷技術，但這種診斷技術不僅診斷周期較長，且各項操作流程極為繁瑣，對相關操作技術人員的要求也較高，故而在臨床上難以推廣使用[3-4]。利用FISH可以在無菌狀態下對羊膜分裂間期的細胞進行直接的檢測，并能對最常用的異倍體進行早期的產前檢查，并對可能存在的缺陷進行早期的羊膜細胞核型分析。FISH能夠對未培養的細胞進行直接檢測，這種診斷方式能夠有效縮短檢測時間，大大提高了臨床的診斷效率，而目前臨床上已經越來越普遍應用這種診斷方式，對胎兒染色體異常進行產前診斷[5-6]。這種診斷方式操作簡單，對于技術人員的要求較低，并且在部分臨床研究中認為，這種診斷方式的診斷準確率較高，可適用于多種兒童的染色體異常診斷[7]。本文探究將FISH應用于產前診斷染色體嵌合體中的效果，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2018年9月至2020年2月作為研究時段，在該時段選取我院收治的600例存在產前診斷指征的產婦進行羊膜穿刺術，獲得其羊水細胞后，分別對其進行染色體異常診斷。納入標準：①孕周為19～24+6周。②單胎妊娠。③具有胎兒畸形高危因素，如高齡妊娠、先天性心臟病家族史、妊娠期糖尿病等。④對研究知情同意，自愿配合研究。排除標準：①存在認知障礙。②先兆流產。③中途失訪，脫落研究。將患者資料錄入Excel表格后進行資料分析，我院統計學人員分析患者資料。

1.2 方法 本次研究中所有產婦在入院后簽署知情同意書并接受相關的健康知識教育，在超聲引導下對產婦進行羊膜穿刺術。將最初的1 mL羊水去除后，避免出現母體細胞污染，隨后取出羊水25 mL，將其中20 mL作為細胞培養，其余5 mL進行FISH檢測。

細胞遺傳學診斷：將在無菌操作條件下取出的20 mL羊水裝入無菌離心管內進行10 min離心，收集羊水細胞，采用貼壁細胞培養法進行7～14 d的培養確認細胞生長狀況良好后，對培養皿中加入秋水仙堿、收集羊水細胞后常規制片，由醫務人員對其進行觀察。

FISH檢測：采用雅培公司生產的FISH探針進行定位，對其中的熒光信號進行分析，確認綠色與紅色熒光信號。

1.3 觀察指標 本次研究中，按照試劑和說明對患者細胞進行處理，玻片處理、雜交、洗片、復染均在熒光顯微鏡下進行觀察分析，每個雜交區域應當隨機至少記錄50個信號強且無重疊的雜交細胞。90.00%以上的細胞確認正常，則記錄為正常標本，而其中60.00%細胞若出現異常，則記錄為異常標本。

1.4 統計學方法 本研究選擇SPSS 20.0 For windows開展統計學分析；應用t值對計量數據進行檢驗；應用χ2對計數數據進行檢驗；P＜0.05提示數據差異具有統計學意義。

2 結果

在本次研究完成后，對所有患者進行染色體核型分析，共計存在71例染色體異常情況，染色體異常率為11.83%，其中染色體非整倍體例數為58例（81.69%），存在4例漏診情況；FISH診斷中確診染色體異常為67例，染色體異常率為11.17%，其中染色體非整倍體例數67例（100.00%），其中8例嵌合體異常完全確認，無漏診情況，最終兩種診斷結果比較無顯著性差異（χ2=0.1310，P=0.7173）。見表1。

表1 胎兒畸形的兩種產前篩查方法結果比較

3 討 論

胎兒的染色體嵌合是影響胎兒出生質量的一個主要原因，其原因可能是由于父母的遺傳原因，也可能是由于胎盤等原因造成的。胎兒是否有嵌合現象，如有絨毛或羊水染色體的染色體異常，則應考慮是否有嵌合。但是，在基因測試中是否存在著染色體嵌合，這給臨床醫師帶來了很大的困難，因此，要了解其起源、形成機制等問題，為產前診斷奠定基礎。

目前，隨著我國產前技術水平的提高，有關胎盤是否能夠真實地表現出胚胎的遺傳特征的爭論也越來越多。羊水穿刺手術很困難，與取樣方式和術者的技術水準有關，很有可能會出現母體污染。而FISH可以對染色體的特征進行分析，從而判斷其是否為非整倍體，從而對胎兒的染色體異常情況進行確診。FISH使產前確診的周期縮短到24～48 h。因此，理解染色體嵌合的起源，形成機制和測試的意義是非常關鍵的。本研究通過對染色體嵌合的分類、機制和對胎兒檢查效果的分析，以期更好地了解胎兒的缺陷，為臨床提供科學的指導。

采用穿刺方法獲得絨毛、羊水、臍帶血等胎兒細胞進行遺傳學診斷，能夠有助于現代優生優育理念的推廣[8]。細胞培養以及染色體核型分析依然是對染色體病癥進行診斷的金標準。染色體核型分析在臨床上具有極高的準確性及敏感度，可達99.5%左右，但羊水細胞通常需要經過7～14 d的培養后才能進行分析，這不僅對產婦和家屬造成了極大的心理壓力，也會對醫務人員造成額外的工作壓力[9]。羊膜腔羊水穿刺術的危險性較低，由于采集時間的差異，所得到的結果也不盡相同。羊膜腔穿刺是當前的常規產前檢查方法，因為其來源廣泛，包括胎兒泌尿生殖道、呼吸器官以及代表不同胚層的上皮組織。其主要是將羊膜質細胞進行免疫，經過7～8 d的時間，再進行制片及染色體類型的測定，最后確定胚胎的染色體類型。從胚胎的發生情況看，羊膜的中胚層細胞與胎兒的真正的染色體狀況是最相近的。羊膜腔的檢查能準確地顯示出胚胎的染色體狀況。因此，在做絨毛活組織檢查時，必須進行羊膜腔的檢查以確定是否存在有染色體嵌合癥。而FISH作為一種新型的分子生物學技術，具有快速、簡便、安全、靈敏度高、特異性高等特點，在細胞遺傳學、間期遺傳學、DNA序列檢測等方面有著重要的作用。FISH是以DNA為基礎，將DNA或RNA探針與已變性的單鏈RNA進行互補配對，由具有熒光基團的抗體來鑒別，或將其與靶基因結合，再由螢光基將其與靶基因連接，在螢光顯微鏡下，直接在細胞核、染色體或切片上發現靶基因的位置，FISH能夠對妊娠16周以后的孕婦的羊水間期細胞進行檢測[10]，能夠對產婦進行穿刺后24 h內的快速診斷，明確胎兒13、18、21、X和Y染色體數目異常。在目前臨床研究中發現這5對染色體的非整倍體占所有胎兒染色體異常的60.00%～80.00%，并且占所有染色體異常活嬰的95.00%，所以對這5對染色體進行診斷，能夠快速明確胎兒是否存在染色體異常狀況，對于緩解孕婦和家屬的心理壓力來說有積極意義。

在本次研究結果中發現，應用與FISH能夠檢出染色體異常67例，確診率為11.17%，與染色體核型分析方案對比差異未見統計學意義。并且在FISH中對染色體非整倍體的確診率為100.00%，未見出現漏診情況。FISH在應用過程中，應用5 mL左右的羊水即可獲得準確的診斷[11]。這種新型的診斷方式，所有檢測均可在48 h內完成，大大降低了醫務人員的工作壓力，并且這種診斷方式的操作和分析較為簡便，對于工作人員的素質要求較低，無須對細胞進行培養，不僅能夠對活細胞進行檢測，還能夠對流產組織、胎兒組織進行檢測，具有較高的可用性[12]。

產前診斷染色體嵌合體主要是利用絨毛細胞的染色體圖譜，在對細胞的中期分裂階段進行鑒別時，由于材料較多，細胞間的分離數量較小，導致其檢測的準確性受限。利用FISH可以與中間分裂階段和間期進行雜交，可以得到許多具有雜合的細胞，從而可以快速準確地診斷X、Y、13、18、21號染色體的異常。利用全絲標記的探針、X、Y、13、18、21號染色體的標記探針和全染探針對孕中期的羊水細胞進行了熒光原位雜交，應用熒光技術對胎兒進行早期診斷，有利于預防胎兒異常和智力低下染色體異常胎兒應選擇及時終止妊娠。

染色體核型分析是診斷染色體相關疾病的重要方式，可以在顯微鏡下，直觀的觀察染色體數量和異常結構，是當今臨床診斷染色體疾病的金標準[13]。有研究提出[14]，傳統細胞遺傳學產前診斷是預防染色體異常患兒出現的重要途徑。隨著近年來產前診斷技術的不斷完善，很多研究發現，在羊水與絨毛培養中，容易出現嵌合問題，但是其中部分為假性嵌合。如何判定并且識別嵌合的真假度已成為現階段研究的重要問題。染色體微陣列比較基因組雜交檢測是以微陣列技術為基礎，包括基于比較基因組雜交的微陣列、基于單核苷酸多態性的微陣列[15]。FISH將熒光標記的特異性寡核苷酸片段作為探針，利用熒光系統檢測，定位分析DNA定性以及相對定位分析。與核型分析技術相比，FISH的直觀性更強，特異性更高，FISH可以對未培養羊水細胞間期細胞進行直接檢測，還可以快速進行產前診斷。尤其是針對羊水核型少者直接進行FISH檢測，可以更好的對胎兒情況進行判定。

綜上所述，染色體核型分析能夠完全確認染色體數目和結構異常，而FISH在產前診斷中的效率和成功率較高，但單獨應用FISH，可能會出現小概率的誤診情況，故而在臨床上盡可能選擇兩種診斷方式聯合應用的方案，這樣才能使產前診斷發揮最大化的診斷效能。