高寒牧區(qū)蕨麻豬豬瘟、口蹄疫免疫抗體消漲規(guī)律研究

摘要：本試驗(yàn)隨機(jī)篩選出60頭O型口蹄疫和豬瘟為陰性的45日齡蕨麻仔豬為試驗(yàn)動(dòng)物，隨機(jī)分成A、B、C3組，每組20頭豬，使用豬口蹄疫O型合成肽疫苗和豬瘟兩種疫苗同步兩點(diǎn)注射，并采用仔豬45日齡首免，首免后第155d進(jìn)行第二次補(bǔ)免的免疫程序，在免疫后21、50、80、110、145和180d進(jìn)行免疫抗體跟蹤監(jiān)測(cè)，探索蕨麻豬口蹄疫O型合成肽疫苗和豬瘟免疫后免疫抗體的消長(zhǎng)規(guī)律。結(jié)果表明：A、B、C組的群體保護(hù)率都較高，未見(jiàn)免疫副反應(yīng)，效果較好。

關(guān)鍵詞：蕨麻豬：豬瘟疫苗：口蹄疫疫苗：同步分點(diǎn)免疫：抗體消漲

蕨麻豬生長(zhǎng)在海拔2. 500m以上的高寒牧區(qū)，由于其終年采食草原植物“蕨麻”而得名。當(dāng)?shù)鼐用窳?xí)慣稱之為“蕨麻豬”[1]。豬瘟是由豬瘟病毒引起的一種以高熱、出血等為特征的烈性、高度接觸性傳染病。該病是嚴(yán)重危害我國(guó)乃至全球養(yǎng)豬業(yè)的重大疫病之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病[2-4]。目前甘肅省主要采取以免疫為主的綜合防控策略，養(yǎng)豬業(yè)也十分重視該病的免疫。但近年來(lái)由于非典型豬瘟、溫和性豬瘟造成的持續(xù)隱性感染，以及免疫程序不合理等因素的影響常常導(dǎo)致豬瘟疫苗免疫失敗，給養(yǎng)豬場(chǎng)帶來(lái)極大的風(fēng)險(xiǎn)[5]。豬0型口蹄疫是由0型口蹄疫病毒引起的豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，該病傳播迅速，發(fā)病率高，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病[6-8]。使用豬0型口蹄疫疫苗免疫接種是我國(guó)預(yù)防本病的重要措施[9]。為科學(xué)制定豬0型口蹄疫的免疫程序，合理使用豬口蹄疫0型滅活疫苗和合成肽疫苗。有效控制豬瘟在甘南州的發(fā)生與流行，確保豬瘟疫苗免疫效果，2019年10月至2021年6月“非洲豬瘟形勢(shì)下農(nóng)牧村散養(yǎng)生豬程序化免疫新模式新技術(shù)研究與推廣應(yīng)用”項(xiàng)目課題組，開(kāi)展了蕨麻豬豬瘟、口蹄疫兩種疫苗同步分點(diǎn)注射后的抗體消漲規(guī)律研究，旨在探索一套合理的免疫程序，以指導(dǎo)全州蕨麻豬豬瘟和口蹄疫的防控工作。

1 材料與方法

1.1 材料

1）試驗(yàn)動(dòng)物：選擇合作勒秀鄉(xiāng)、迭部縣旺藏鄉(xiāng)、卓尼縣扎古錄鎮(zhèn)三鄉(xiāng)鎮(zhèn)的12戶5頭以上的合作蕨麻豬養(yǎng)殖戶家中，選擇散養(yǎng)的45日齡的斷奶蕨麻豬仔豬各20頭，選擇的試驗(yàn)仔豬胎次、飼養(yǎng)狀況、環(huán)境條件相近，共計(jì)60頭。

2）接種疫苗：豬瘟活疫苗（細(xì)胞源）批號(hào)為（2021013）購(gòu)自哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司，豬口蹄疫0型合成肽疫苗批號(hào)為（20170710）購(gòu)自申聯(lián)生物醫(yī)藥（上海）股份有限公司。

3）試驗(yàn)試劑：豬瘟病毒間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20200221，規(guī)格192孔／盒），購(gòu)自青島立見(jiàn)診斷技術(shù)發(fā)展中心；口蹄疫0型抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20200615，規(guī)格200孔／盒），購(gòu)自蘭州獸醫(yī)研究所生物科技有限公司。

4）試驗(yàn)儀器：酶標(biāo)儀ONM-9606），北京普朗公司；自動(dòng)洗板機(jī)（DNX-96），北京普朗公司；超純水儀（WP-UP-YJ-20），四川優(yōu)普超純科技有限公司；超聲波清洗器（SB25-12DT），寧波新芝生物科技股份有限公司；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（3H24RI），湖南湘儀；超低溫冰箱（DW-861338J），青島海爾醫(yī)療有限公司；自動(dòng)高壓滅菌器（IDZM-80KCS-III），上海申安醫(yī)療器械廠；恒溫水浴鍋（HH-S8），常州國(guó)宇儀器制造有限公司。

1.2 方法

1）免疫注射方法：選取45日齡斷奶仔豬60頭，分為A、B、C共3組，頸部右側(cè)肌肉注射豬瘟活疫苗（細(xì)胞源）1mL，同時(shí)同步在左側(cè)耳根后肌肉注射口蹄疫0型滅活苗1mL進(jìn)行試驗(yàn)。

2）免疫副反應(yīng)觀察：免疫接種的試驗(yàn)豬在注射疫苗后的1～3d內(nèi)，觀察并記錄每頭豬的免疫副反應(yīng)情況，檢查豬只精神、食欲、行為、體溫等臨床特征。

3）免疫抗體檢測(cè)：試驗(yàn)豬注射疫苗后21、50、80、110、145和180d分別測(cè)定豬瘟、0型口蹄疫兩種疫苗的免疫抗體水平，按照中國(guó)農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所改進(jìn)型口蹄疫病毒0型抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明以及豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明進(jìn)行操作及判斷結(jié)果，觀察其抗體消漲規(guī)律。

2 結(jié)果與分析

2.1 疫苗副反應(yīng)調(diào)查結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)表1，試驗(yàn)組60頭中共有10頭蕨麻豬出現(xiàn)了不同程度的免疫副反應(yīng)，表現(xiàn)為體溫升高、精神沉郁、食欲不振和腹瀉，10頭豬均在72h內(nèi)自愈，表現(xiàn)為一般副反應(yīng)，呈一過(guò)性。

2.2 0型口蹄疫抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)測(cè)定結(jié)果 結(jié)果見(jiàn)表2，3個(gè)試驗(yàn)組在免疫豬口蹄疫0型合成肽疫苗后產(chǎn)生抗體，從2ld開(kāi)始監(jiān)測(cè)一直持續(xù)到180d，其中50～145d群體保護(hù)率一直維持在較高水平，均達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%以上的標(biāo)準(zhǔn)，110d開(kāi)始有所下降，在試驗(yàn)中使用了疫苗使用說(shuō)明書推薦劑量免疫，可以獲得較好的保護(hù)力。

2.3 豬瘟抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)測(cè)定結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)表3，3個(gè)試驗(yàn)組在免疫豬瘟活疫苗（細(xì)胞源）后產(chǎn)生豬瘟抗體，從21d開(kāi)始監(jiān)測(cè)一直到180d，一直維持在較高水平，由此推斷“同步分點(diǎn)注射”口蹄疫和豬瘟2種疫苗，豬瘟抗體效價(jià)不會(huì)受到影響。

3 討論與小結(jié)

3.1 兩種疫苗同步分點(diǎn)接種副反應(yīng)較小

同步分點(diǎn)接種豬瘟疫苗、豬口蹄疫0型合成肽疫苗72h內(nèi)，試驗(yàn)組出現(xiàn)免疫副反應(yīng)的頭數(shù)是：A組7頭、B組5頭、C組4頭，分別占免疫數(shù)的35%、25%和10%，均未出現(xiàn)嚴(yán)重免疫副反應(yīng)和死亡副反應(yīng)，而且基本上呈一過(guò)性反應(yīng)，這說(shuō)明蕨麻豬本身的抵抗力強(qiáng)，疫苗副反應(yīng)小，在臨床上可以進(jìn)行“同步分點(diǎn)”免疫注射方法。

3.2 同步分點(diǎn)免疫豬瘟和口蹄疫兩種疫苗，試驗(yàn)組均得到了很好的免疫保護(hù)

首免刺激的免疫應(yīng)答迅速有效，但抗體效價(jià)和群體保護(hù)率隨著時(shí)間的延長(zhǎng)有所降低。豬瘟疫苗在免疫后各個(gè)檢測(cè)階段均在要求的保護(hù)率以上，在免疫后110d（豬已經(jīng)達(dá)到155日齡左右）其抗體水平依然維持較高水平，保護(hù)率達(dá)到100%，效果顯著?？谔阋叩目贵w水平在免疫后50d達(dá)到峰值，125日齡左右保護(hù)率達(dá)到100%。運(yùn)用“同步分點(diǎn)”這種新的免疫方法，安全有效，免疫副反應(yīng)小，可以有效地保證和提高口蹄疫、豬瘟的免疫抗體水平和質(zhì)量。這種新的免疫程序進(jìn)行免疫可以減少防疫人員工作量，同時(shí)能降低反復(fù)抓豬而造成的應(yīng)激反應(yīng)。

鑒于口蹄疫免疫1次其抗體水平產(chǎn)生有限。建議在運(yùn)用此方法的同時(shí)，對(duì)口蹄疫在155日齡左右再實(shí)施1次強(qiáng)化免疫，以保證口蹄疫的免疫效果。通過(guò)蕨麻豬口蹄疫0型合成肽疫苗免疫抗體消漲變化的研究表明，豬口蹄疫0型合成肽疫苗免疫一次，即可確保高效價(jià)抗體維持至155d。豬口蹄疫0型合成肽疫苗具備免疫原性高，生物安全性好，免疫副反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn)，接種口蹄疫0型合成肽疫苗后豬群的群體保護(hù)率均較好，且抗體水平和群體保護(hù)率的時(shí)間較穩(wěn)定，說(shuō)明接種該疫苗效果好。在生產(chǎn)實(shí)踐中值得普及推廣。

3.3 通過(guò)對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，建議蕨麻豬免疫程序如下

仔豬45日齡首免0型口蹄疫疫苗，同步另一側(cè)注射豬瘟，在155日齡左右再實(shí)施1次0型口蹄疫和豬瘟強(qiáng)化免疫。此外，口蹄疫和豬瘟的防控還應(yīng)該加強(qiáng)豬群的飼養(yǎng)與管理、疫苗的質(zhì)量與操作等因素有關(guān)，只有這樣才能有效減少蕨麻豬口蹄疫和豬瘟的發(fā)生，從而提高農(nóng)牧民的收入。

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