規模豬場非洲豬瘟復養前之環境評估

摘要：從非洲豬瘟第一例發生到目前為止，已經過去四年多的時間，很多養殖場都遭受了不同程度的損失，并且對我國的養豬業造成了巨大的損失，生物安全級別也達到了前所未有的高度，為了能夠協助部分發生非洲豬瘟的養殖場盡快進行復養，筆者對養殖場內環境的洗消情況進行了評估：對于評估后的結果令人擔憂，很多場未能按照復養的要求進行清洗消毒，造成復養接連失敗。

關鍵詞：非洲豬瘟病毒：復養：環境評估

非洲豬瘟病毒是一個基因組大，復雜而古老的DNA病毒，它也非常容易變異，一般的消毒劑都可以將其殺死，非洲豬瘟病毒耐低溫，不耐高溫，低溫血液中可以存活5～6年的時間，常溫下可存活10多天的時間；但不耐高溫，60℃的溫度幾十分鐘就可以把它殺死；非洲豬瘟病毒的傳播主要依靠直接或者間接接觸傳播，但也有報道非洲豬瘟病毒也可以通過空氣短距離傳播，在規模化豬場尤其在風機的帶動下，非洲豬瘟病毒很有可能通過空氣短距離傳播，筆者曾在一個標準化的規模場的出風口處檢測到非洲豬瘟病毒的核酸，這也印證了非洲豬瘟病毒可以在外力的作用下可以通過空氣短距離的傳播，這對于非洲豬瘟的防控又增加了難度。目前的生物安全高度雖然提高到一個很高的高度，但仍然時不時還是有養殖場發生疫情，并且復盤時無法找到發生疫情的原因；所以復養一個艱難的過程，復養之前一定經過分析本場是如何發生疫情的，這樣才能避免下次發生同樣的漏洞；復養的成功幾率就會增加。洗消過程中最好使用4%火堿進行，避免污染物污染到其它地方。

2018年8月3日，中國第一例非洲豬瘟事件在遼寧沈陽被OIE（現WOAH）所報道，然而，實際上這不一定是最早的發病案例，因為在2個月之前，已經在沈陽郊區已經出現過類似癥狀的豬只發病[1]。比如，3月24日，在鄰省（吉林省）非法購買的一些斷奶仔豬就表現出類非洲豬瘟癥狀，死亡率高達28%。7月6日，該養豬場老板將余下的45頭仔豬賣給附近的其他養殖場，結果很快全部死亡，且觀察到的主要臨床癥狀及病理變化同急性非洲豬瘟所致癥狀一樣。采集2頭死亡仔豬的脾臟組織做檢測，在電鏡下，觀察到了類非洲豬瘟病毒顆粒樣，且PCR檢測組織樣品分析結果為脾臟、肝臟和腎臟都呈非洲豬瘟陽性。

從報道的第一例非洲豬瘟到現在已經過去四年多的時間，為了滿足普通百姓日常的消費，很多地方都在非瘟后時代積極地復養[2]；但復養并不是一帆風順，無論規模化場還是中小養殖場在復養前會進行認真的洗消，有的甚至用火焰消毒，但卻忽略了對消毒后效果的評估，筆者通過大半年對一些經過洗消后的養殖場進行環境評估[3-6]，經過近兩年的環境評估發現很多的養殖場在洗消后空欄一段時間（3～10個月）仍然檢測到非洲瘟豬瘟核酸片段為陽性，這包含了規模化豬場和中小養殖場。

1 材料及方法

1.1 樣品來源

樣品來源于遼寧省某些規模化洗消后的豬場。

1.2 試劑及材料

AXYGENmi n i核酸提取試劑盒，非洲豬瘟檢測試劑盒及所用實驗耗材均由金宇保靈生物藥品公司技術服務部提供，農場生物安全柜。

1.3 試驗方法

試驗前進行溝通并實地對豬場清洗消毒的效果進行眼觀評估，確定后再進行采集樣品，穿上防護服，帶上乳膠手套及一次性手套，戴上口罩，然后對每棟豬舍進行采集樣品；每個部位用一張棉柔巾進行擦拭，棉柔巾在擦拭前用3mL左右的純凈水將其弄濕（濕潤但不滴水），然后對棟舍不同部位進行采集樣品，每個位點采集完樣品后單獨放入自封密閉袋中等待后續處理。

1）樣品處理。將采集后的樣品放入生物安全柜中，對自封袋中的樣品進行處理，加入適量的純凈水反復揉使其混勻，從中取出1. 5mL的樣品放入離心管中，將所有的樣品按照上述步驟操作后放入離心機中離心，離心后取上清液200？L放入離心管中。

2） DNA提取。樣品的DNA提取按照AXYGEN公司的AxyPrepBody Fluid Vi ral說明書操作。

3） qPCR檢測。利用明日達試劑盒進行擴增，反應體系如表1：

反應條件如下：50℃ （UNG酶反應）2min；95℃（Taq酶活化）5min；95℃（變性）10s；45cycle 60℃（退火、延伸采集熒光）30s。

2 結果與分析

從2019年6月到當前，筆者已檢測了380份環境樣品，陽性檢出率2.1%，檢出的CT值大多在30～42之間（表2），個別也有20多的，這個主要是由于場里的病毒載量比較高，未進行徹底清洗及消毒導致差別比較大，如果經過反復認真洗消及干燥的情況下，大多數的CT值比較高；雖然檢測出非洲豬瘟病毒的核酸，但目前無法判斷病毒是否存活，這也從側面反映出場里的洗消狀況；很多經過認真反復洗消及干燥的情況下是檢測不到核酸的。部分樣品qPCR結果見圖1：

3 小結與討論

非洲豬瘟的發生給我國的養豬業造成了巨大的損失，但同時也使我國養豬業生物安全的高度得到了很大的提高，但通過采集的樣品發現檢出率相對比較高的地方都是一些邊角不容易清洗和不容易清洗干凈的地方，檢出率最高的點就是漏糞板和化糞池及飼料袋表面，當然這個也是因場而異；有些發病比較輕微的養殖場，由于病毒載量比較低，經過認真清洗消毒空欄后，熒光定量PCR檢測出CT值相對比較高；發病比較嚴重的養殖場病毒載量比較高，經過認真清洗消毒空欄后熒光定量PCR檢測出CT值相對比較低；所以對于想要復養的養殖場在做過認真清洗消毒后，最好能夠經過環境評估后再進行進豬。筆者曾經對一個規模化的養殖場進行環境評估，該場發病比較輕微，經過洗消后空欄達到10個月的時間，仍然在化糞池中檢測到非洲豬瘟病毒核酸片段陽性，所以對于清洗消毒空欄后最好能夠進行一下環境評估，目前的非瘟和以前的情況又不太一樣，毒力沒有之前那么強，導致現在的非瘟想要拔牙難度非常大，以前早期拔牙可以通過口腔鼻腔及肛拭子，可以及早發現感染的陽性豬只，迅速進行剔除帶毒的豬，但現在由于弱毒的出現，導致口腔鼻腔和肛拭子無法檢測到病毒，所以也就無法及時發現。現在的非瘟弱毒導致臨床出現的癥狀也沒有之前那么典型，現在的有些弱毒會出現皮膚的潰爛，所以在發現有這種情況的時候及時懷疑是不是又非瘟弱毒存在。

特別對于中小養殖場由于豬舍條件簡陋，這樣會增加清洗消毒的難度；目前對于打算復養的養殖場，筆者建議對于條件比較好的養殖場能夠做到認真清洗消毒，經過空欄一段時間后，經過環境評估以后再進行進豬；另外消毒的效果會受到溫度的影響，特別對于冬季北方溫度能達到零度以下，這樣洗消就會非常困難，建議把豬舍溫度升高，另外用熱水進行清洗和消毒；這樣對于環境中的病毒能夠起到很好的效果，并且復養之前對于豬舍進行有效的改造，不同圈舍之間最好用實體墻進行隔開，料槽不再是通體料槽，地面整潔平整，便于清洗和消毒。

在復養環境評估過程中一定要注意回顧本場發生的原因，這樣有助于后續查缺補漏，避免后續再次出現相同的漏洞，另外豬場還要注意老鼠方面的問題，因為老鼠也會在非瘟傳播過程中起到一個間接傳播的作用，還有一些可以間接傳播的因素也需要注意；當然肯定有疑問存在，檢測到非洲豬瘟核酸片段能不能代表就是活病毒，如果經過很長時間還能在環境中檢測到核酸片段，筆者認為這很有可能是活病毒存在；因為病毒會慢慢降解，那么環境中能夠檢測到的幾率應該非常小；所以如果能夠檢測到非洲豬瘟核酸片段即判定為活病毒，這僅代表個人意見。

參考文獻：

[1]趙啟祖，王琴，非洲豬瘟緊急預防控制技術需求[J]中國獸藥雜志，2018，10（52）：1-4

[2]趙書平，王杰，家庭農場復養防控技術方案[J]國外畜牧學豬與禽，2019，39（10）：63-69

[3]迂斌，饒文敏，生物安全措施結合中藥防控非洲豬瘟經驗分享[J]國外畜牧學豬與禽，2019，39（6）：65-70

[4]余奎，張世新，一例疑似非洲豬瘟”拔牙式”處理案例[J]豬業科學，2019.4（5）：85-87

[5] 華偉，張曉曦，豬場生物安全體系建設效果不佳的深層次原因分析[J]豬業科學.2019，8（36）：54-55

[6]付雅，董燕玲，鄭海燕，防控非洲豬瘟恢復生豬生產九項關鍵技術[J]農民日報2019，8（7163-64