銀杏GbR2R3-MYB1基因的克隆及非生物脅迫應答分析

駱鷹 譚智 王帆 劉曉霞 羅小芳 何福林

（1.湖南科技學院化學與生物工程學院，永州 425199；2.湖南省銀杏工程技術研究中心，永州 425199；湖南省生物質資源綜合開發利用工程技術研究中心，永州 425199）

轉錄因子（transcription factors，TF）又稱反式作用因子，能夠與位于基因啟動子序列上的順式作用元件相互作用，通過轉錄因子之間，或與其它相關蛋白間的特異性結合從而激活或抑制某些基因的轉錄［1］。高等植物中轉錄因子一般由DNA結合功能域、寡聚化位點、轉錄調控區及核定位信號區等組成［2］。植物中的MYB轉錄因子成員數量較多，且大多數成員的N末端都含有保守MYB結構域，該結構域由1-4個不完全重復序列R組成，每個R片段含有50-53個保守的氨基酸殘基。根據MYB結構域所含R重復序列數量可分為：R1-MYB（1R）、R2R3-MYB（2R）、R1R2R3-MYB（3R） 和 4R-MYB（4R），其中植物中以R2R3-MYB為主要群體［3-4］。研究發現，R2R3MYB能參與植物的生理生化，次生代謝，生長發育，激素合成及信號轉導，以及響應生物和非生物脅迫過程等［4-8］。擬南芥（Arabidopsis thaliana）中的AtMYB15可以通過調控CBF基因參與抗寒和抗凍性，mby15突變體能夠增強擬南芥的抗凍性，而過表達則降低其抗凍性［9］；MYB80和MYB124可以通過影響CBF基因的表達來增強蘋果的抗寒與抗凍性［10］。水稻（Oryza sativa）OsMYB30也是對冷敏感的MYB家族成員之一，過表達OsMYB30可以增強水稻對冷敏感程度，而myb30突變體植株則表現出較強的耐寒性［11］。AtMYB30突變體對熱應激、氧化應激比較敏感，MYB30能與ANN4和ANN1啟動子結合并下調其表達，從而通過Ca2+信號來調節熱激、氧化反應［12］。高溫脅迫下過表達水稻OsMYB55株系總氨基酸含量較高，可以使營養期水稻植株的耐熱性增強［13］。過表達玉米（Zea mays）中的MYB55基因，也可以增強玉米的耐熱性［14］。菠蘿（Ananas comosus）中 MYB 家族成員能響應一種或多種非生物脅迫，例如Aco014614只受冷脅迫誘導，而Aco001113可以受高鹽、干旱和熱脅迫誘導，其中，Aco007733在高鹽、干旱、冷、熱脅迫、ABA、MeJA、SA、2,4-D八種條件處理下均被誘導表達，提示其是一種多重抗性調節因子［15］。

銀杏（Ginkgo biloba）是我國獨特的珍稀孑遺樹種，別名“公孫樹”，最早出現在2.7-3.5億年前，地球上的生命經過巨大的變動后，唯有銀杏依然保持其最初的自然生態風貌，常被業內人士比喻為植物界的“大熊貓”，現如今廣泛分布在世界各地。銀杏具有多種價值和用處，如醫藥、食品、生態、觀賞和木料等方面，尤其社會經濟價值和生態利用價值極高［16］。銀杏在醫藥和生態學上的價值是由其葉片和果實中的活性成分所共同賦予，主要涉及黃酮類、酚類、萜內酯以及多糖和生物堿類等化合物。黃酮類化合物也被稱作黃堿素，大部分結合糖形成苷類，對植物的各種生命活動是不可或缺的，在各種植物的許多器官和組織中廣泛存在，其中在銀杏葉片含量較高。大多數銀杏品種的黃酮含量在1.4%-1.9%之間［17］，銀杏黃酮類化合物在植物的生長發育生物過程、抗逆性等多個方面起著十分重要的作用，對于人類而言，其藥用和食用價值也很高，在醫藥衛生行業具有十分廣闊的開發空間。近年來，高通量測序及分子生物學技術在銀杏生物學功能研究中得到廣泛運用，人們對銀杏有了更深入了解，然而有關銀杏R2R3-MYB1轉錄因子的研究報道很少。本研究基于NCBI及生物信息相關數據庫，從銀杏葉片中克隆得到銀杏GbR2R3-MYB1轉錄因子，并對其進行生物信息學、亞細胞定位及逆境脅迫下的表達分析，為進一步研究銀杏R2R3-MYB轉錄因子的功能奠定理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料 本研究所用實驗材料來源于湖南省永州市桐子坳銀杏成年植株以及收集同株銀杏的種子，地理坐標為北緯 26°06′，東經 111°50′。采集地上自然脫落的果實置于室溫下，待果實腐爛后，去除種皮與果實，將種子清水洗干凈后晾干，用濕沙攪拌均勻放置在通風陰涼處，讓其自然層積。將沙藏種子洗凈，選取沉在水底飽滿良好的種子，用KMnO4溶液（1 000 mg/L）消毒時間為15 min，再用無菌蒸餾水沖洗5-6次。最后將處理的種子播種于裝有基質的培養盆中，35℃人工氣候箱中黑暗培養催芽，待銀杏種子長出白色嫩芽時進行光照培養（晝夜溫度為28℃/18℃，空氣相對濕度為75%，光照周期為18 h光照/6 h黑暗）。待銀杏幼苗長出4葉時，分別進行鹽、干旱、低溫和高溫逆境脅迫處理。處理條件設置為：用濃度為300 mmol/L的NaCl溶液模擬鹽脅迫，20%的聚乙二醇（PEG6000）溶液模擬干旱脅迫，以4℃和42℃人工氣候箱分別模擬低溫和高溫脅迫。上述處理均以在培養盆常溫下正常生長的銀杏幼苗為對照。4種非生物脅迫各處理的時間分別為：0 h、2 h、4 h、8 h、12 h和24 h。每處理3次生物學重復，分別將同一脅迫處理時間采集的銀杏幼苗液氮速凍后，置于-80℃冰箱保存備用。

1.1.2 菌株和載體 本研究中使用的DH5α感受態細胞、pClone007 Blunt Vector Kit載體由北京擎科公司提供；pCAMBIA1300-GFP質粒及GV3101農桿菌感受態細胞購自于武漢大智眾成公司。

1.1.3 主要試劑 限制性內切酶、總RNA提取、熒光定量PCR、瓊脂糖DNA膠回收、cDNA第一鏈合成、瓊脂糖DNA回收及質粒提取試劑盒由北京天根公司提供；無縫克隆試劑盒、引物及PCR擴增高保真酶由北京擎科公司提供；Xba I、Kpn I高保真酶購自于武漢大智眾成公司。

1.2 方法

1.2.1 總RNA提取及cDNA合成 取新鮮銀杏幼苗葉0.1 g，參考北京天根公司總RNA提取試劑盒相關步驟抽提總RNA，并將樣本保存-80℃冰箱備用。取2 000 ng總RNA，根據天根公司FastKing cDNA第一鏈合成試劑盒說明，進行cDNA第一鏈合成反轉錄實驗，合成產物保存于-20℃冰箱待用。

1.2.2 GbR2R3-MYB1基因克隆 通過NCBI官網（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/）查詢銀杏GbR2R3-MYB1基因（登錄號：ASR18086.1），從而獲取GbR2R3-MYB1的CDS、全基因組、cDNA及氨基酸序列。以銀杏幼苗葉片為材料，以逆轉錄合成的cDNA為模板，通過PCR擴增進行GbR2R3-MYB1基因克隆。運用Primer Primer5.0軟件設計本研究所用特異性引物（引物具體信息見表1），GbASR基因克隆及pCAMBIA1300-GbR2R3MYB1-GFP融合表達載體構建具體過程，參考駱鷹等［18］相關基因克隆操作方法與步驟。

表1 實驗所用引物序列信息Table 1 Primer sequences used in this study

1.2.3 生物信息學分析 通過NCBI官網CDD（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/cdd/）在線工具對GbR2R3-MYB1進行保守結構域分析；利用Expasy ProtParam（https://web.expasy.org/ protparam/） 進 行蛋白理化性質預測，SOPMA（https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=npsa_sopma.html）進行蛋白二級結構預測，SWISS-MODEL（https://swissmodel.expasy.org/）進行蛋白三級結構預測；通過Expasy Protscale（https://web.expasy.org/protscale/） 進行親疏水性分析；通過NCBI中BLAST搜索其他物種的R2R3-MYB1同源蛋白序列，并利用DNAMAN軟件進行多重序列比對分析；利用MEGA6.0軟件中鄰近法（neighbor joining，NJ）構建系統進化樹。

1.2.4 GbR2R3-MYB1基因亞細胞定位 按照謝旻等［19］有關亞細胞定位步驟操作進行GbR2R3-MYB1蛋白亞細胞定位檢測試驗。利用基因克隆方法獲得GbR2R3-MYB1目的片段，用Xba I和Kpn I高保真酶對質粒pCAMBIA1300-GFP進行酶切，并將目的片段GbR2R3-MYB1與pCAMBIA1300-GFP載體酶切片段進行體外連接，從而構建重組載體pCAMBIA1300-GbR2R3MYB1-GFP。對凍存的GV3101菌種進行復蘇，并制備感受態細胞。采用冷卻法將重組融合表達載體轉化至GV3101農桿菌感受態細胞，通過搖菌、涂板、挑選陽性單克隆等過程，然后進行菌落PCR。將陽性單克隆菌液送北京擎科公司進行測序，并用正確的陽性單克隆菌液提取質粒，以便備用。

將含有重組融合表達載體pCAMBIA1300-GbR2R3MYB1-GFP的農桿菌進行過夜培養后，移入LB液體培養基中（含有Kan和Rif），搖床培養16 h，溫度控制28℃，再加入濃度為100 mmol/L的乙酰丁香酮和0.5 mol/L的嗎啉乙磺酸（MES）。常溫4 000 r/min條件下，菌液離心10 min，然后棄除上清液，用MgCl2溶液重新懸浮菌體，加入濃度為100 mmol/L的MAS進行混勻，靜置3 h，用于后續試驗侵染液。選取正在生長期的煙草葉片，用針頭在葉片背面扎數個小孔，然后用注射器吸入侵染液，將其從葉片下表皮注射到煙草葉片內，注射后煙草葉片會出現濕潤現象，作為處理組。以轉入空載體的煙草葉片作為對照組。注射后72 h，取樣置于激光共聚焦熒光顯微鏡檢測熒光信號。GFP激發光為488 nm，DAPI激發光為405 nm。

1.2.5 GbR2R3-MYB1基因表達分析 通過上述1.1.1植物材料和1.2.1總RNA提取及cDNA合成步驟，獲得銀杏幼苗葉片總RNA和cDNA，用于逆境脅迫下GbR2R3-MYB1基因的表達情況分析。熒光定量qPCR的總反應體系、擴增條件、樣品處理及相對表達量的計算方法參考駱鷹等［18］相關基因表達實驗操作方法及步驟。

2 結果

2.1 銀杏GbR2R3-MYB1基因克隆及序列分析

以銀杏葉片cDNA為模板，利用目的基因特異性引物進行PCR擴增，將獲得GbR2R3-MYB1目的片段PCR產物用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測，出現單一DNA條帶，片段大小介于750-1 000 bp，這與本研究預測擴增片段大小一致（圖1-A）。在紫外燈下迅速切下與目的片段大小一致的條帶，利用DNA膠回收試劑盒，并參考相關說明回收目的片段，連接至pClone007 Blunt Vector Kit載體，轉化至DH5α大腸桿菌感受態細胞后，涂板，挑選陽性單克隆，并用pClone007載體引物進行菌落PCR，通過1%瓊脂糖凝膠電泳檢測（圖1-B），將陽性菌液送公司測序。通過DNASTAR軟件對陽性克隆測序獲得GbR2R3-MYB1核苷酸序列及其所編碼的氨基酸序列進行分析，結果顯示本研究克隆GbR2R3-MYB1的cDNA長為909 bp，起始密碼子ATG和終止密碼子TAA分別位于321 bp和1 139 bp處，發現銀杏GbR2R3-MYB1的CDS區全長為819 bp。該基因CDS的堿基組成A為28.21%、T為20.63%、G為26.98%、C 為 24.18%，共編碼 272 aa（圖2）。（A+T）%值是48.84%，低于（G+C）%，推測GbR2R3-MYB1的CDS區的DNA雙鏈比較穩定。

圖1 GbR2R3-MYB1基因PCR擴增瓊脂糖凝膠電泳Fig.1 Agarose gel electrophoresis of PCR amplified products of GbR2R3-MYB1

圖2 GbR2R3-MYB1基因CDS區核苷酸序列及編碼氨基酸序列Fig.2 Nucleotide and amino acid sequence in the CDS region of GbR2R3-MYB1 gene

2.2 銀杏GbR2R3-MYB1的序列比對及系統進化分析

通過NCBI官網對銀杏GbR2R3-MYB1的序列進行分析，結果表明GbR2R3-MYB1蛋白具有MYB_DNA-Bingding結構域，位于67-111 aa區域，含有兩個典型的SANT結構域，分別位于67-114 aa和69-112 aa區域（圖3）。利用在NCBI數據庫BLAST比對，下載GenBank收錄的12種植物MYB氨基酸序列，通過DNAMAN軟件進行多重序列比對（圖4），結果發現，銀杏GbR2R3-MYB1蛋白與火炬松（Pinus taeda）、白云杉（Picea glauca）MYB蛋白的氨基酸序列相似性最高，分別為67.32%和63.57%；與荷花（Nelumbo nucifera） 和 桃（Prunus persica）MYB蛋白的氨基酸序列相似性較低，分別為54.78%和55.51%。由圖5可見，GbR2R3-MYB1蛋白與火炬松（Pinus taeda）、白云杉MYB蛋白聚在一起，它們同屬于裸子植物，表明親緣關系較近。荷花（Nelumbo nucifera）和桃（Prunus persica）MYB蛋白聚在同一分支，它們同屬于雙子葉植物；玉米（Zea mays）和水稻（Oryza sativa Japonica）屬于單子葉植物，它們的MYB蛋白聚在一起，親緣關系較近。

圖3 銀杏GbR2R3-MYB1蛋白保守域Fig.3 Conservative domain of GbR2R3-MYB1 protein from G.biloba

圖4 銀杏GbR2R3-MYB1蛋白與其他植物氨基酸序列的多重比對Fig.4 Multiple alignment of the amino acid sequences of GbR2R3-MYB1 in G.biloba and other plants

圖5 植物MYB同源基因氨基酸序列系統進化樹Fig.5 Phylogenetic tree of deduced amino acid sequences of plant MYB homologous genes

2.3 銀杏GbR2R3-MYB1氨基酸序列的理化性質分析

銀杏GbR2R3-MYB1蛋白理化性質通過Protparam軟件進行預測分析，結果發現GbR2R3-MYB1由272個氨基酸殘基組成，相對分子質量為30 001.60 Da，理論等電點（PI）為6.59，在組成該蛋白的氨基酸中，丙氨酸（Ala）所占比例最高，為9.2%，而蛋氨酸（Met）、色氨酸（Trp）、酪氨酸（Tyr）所占比例最低，為1.8%。負電荷殘基（Asp+Glu）33個，正電荷殘基（Arg+Lys）31個。GbR2R3-MYB1的分子式為C1287H2028N392O406S16，不穩定指數為52.10，這表明該蛋白為不穩定酸性蛋白。GbR2R3-MYB1的脂肪族氨基酸指數（aliphatic index）為68.64，總親水性平均系數（GRAVY）為-0.628，這說明該蛋白是親水性蛋白（圖6）。

圖6 GbR2R3-MYB1蛋白親水/疏水性預測分析Fig.6 Prediction of hydrophilic/hydrophobicity for GbR2R3-MYB1 protein

2.4 銀杏GbR2R3-MYB1蛋白的二級、三級結構預測

通過SOPMA在線軟件對GbR2R3-MYB1蛋白的二級結構進行預測，結果表明（圖7），GbR2R3-MYB1蛋 白 由 28.31%的α-螺 旋、4.78%的β-轉角、5.88%的延伸鏈和61.03%的無規卷曲構成，且α-螺旋主要集中于N端的MYB結構域和C端的功能結構域位置，這與預期結果相一致。利用SWISSMODEL在線軟件對GbR2R3-MYB1蛋白三維空間結構進行預測，結果發現（圖8），在R2和R3 repeat結構域中均含有3個α-螺旋結構單位，這與二級結構預測結果相一致。

圖7 GbR2R3-MYB1蛋白二級結構預測Fig.7 Prediction of secondary structure for GbR2R3-MYB1 protein

圖8 GbR2R3-MYB1蛋白三級結構預測Fig.8 Prediction of tertiary structure of GbR2R3-MYB1 protein

2.5 GbR2R3-MYB1蛋白亞細胞定位分析

為了明確GbR2R3-MYB1蛋白的亞細胞定位情況，將克隆獲得的GbR2R3-MYB1目的片段成功連接至pCAMBIA1300-GFP載體上，構建融合表達載體pCAMBIA1300- GbR2R3MYB1-GFP，并將其轉入煙草幼苗葉片下表皮細胞中進行瞬時表達。以DAPI染劑作為參考，撕取煙草幼苗葉片表皮細胞置于激光共聚焦熒光顯微鏡觀察下觀察GFP蛋白在細胞中的表達情況，結果發現（圖9），對照組中整個煙草表皮細胞分布較強的綠色熒光信號，而處理組煙草表皮細胞僅細胞核能檢測到熒光信號，這表明GbR2R3MYB1基因所編碼的蛋白定位于細胞核。

圖9 GbR2R3-MYB1蛋白亞細胞定位結果Fig.9 Subcellular localization of GbR2R3-MYB1 protein

2.6 GbR2R3MYB1基因在非生物脅迫下的表達分析

通過RT-qPCR技術對高鹽、干旱、低溫和高溫等非生物脅迫處理下的銀杏GbR2R3-MYB1基因表達情況進行檢測分析，結果顯示，GbR2R3-MYB1受高鹽、干旱、低溫和高溫等非生物脅迫的誘導，在NaCl脅迫處理下（圖10-A），GbR2R3-MYB1基因相對表達量呈先上升后下降的趨勢，鹽脅迫4 h GbR2R3-MYB1基因的相對表達量達最達峰值，而鹽脅迫8 h，其表達量達最低值。干旱脅迫2 h，GbR2R3-MYB1的相對表達量最高，而脅迫24 h時，其表達量最低，整體上也呈現先上升后下降的趨勢（圖10-B）。在低溫（4℃）及高溫（42℃）處理下（圖10-C、D），GbR2R3-MYB1的相對表達量均呈先下降后上升再下降的趨勢，低溫脅迫12 h時GbR2R3-MYB1相對表達量峰值最高，而高溫脅迫8 h，其表達量峰值最高。

圖10 GbR2R3-MYB1基因在鹽、干旱、低溫及高溫脅迫下的表達分析Fig.10 Expression analysis of GbR2R3-MYB1 gene under salt，drought，cold，and heat stresses

3 討論

MYB轉錄因子家族成員的典型特征是含有比較保守的DNA結合域，本研究通過分子生物學技術克隆得到銀杏GbR2R3-MYB1基因，片段大小為819 bp，編碼272個氨基酸。根據結構域的不同可以將MYB蛋白家族分為4類，其中R2R3-MYB蛋白是最大一類蛋白家族。本研究通過蛋白序列比對及保守結構域分析，結果確定銀杏GbR2R3-MYB1轉錄因子含有R2、R3結構域，能夠與啟動子元件結合并發生作用，這為進一步驗證銀杏GbR2R3-MYB1對下游基因的作用奠定基礎。進化樹分析表明銀杏GbR2R3-MYB1與火炬松、白云杉等植物的R2R3-MYB轉錄因子親緣關系比較近，聚在一個分支，這可能是由于它們同屬于裸子植物。通常情況下，轉錄因子定位于細胞核［20］，可以通過調控下游基因而發生作用，如銀杏GbERF1轉錄因子定位于細胞核［21］；西瓜（Citrullus lanatus）ClWRKY54蛋白分布于細胞核［22］；本研究亞細胞定位結果顯示，銀杏GbR2R3-MYB1轉錄因子定位于細胞核。然而，一些植物轉錄因子也可能定位于細胞中的其他位置，如梁山慈竹（Dendrocalamus farinosus）DfMYB3蛋白定位于細胞核和細胞膜［23］；丹參（Salvia miltiorrhiza）SmMYB52［24］、SmMYB87 轉錄因子［25］在細胞核和細胞膜上GFP都有表達。

植物通過不同的適應調節機制來感知、響應外界各種生物及非生物學脅迫，從而使其生命得以延續。R2R3-MYBs作為MYB轉錄因子家族數量最多成員，已被證實在植物生長發育及應答非生物學脅迫過程中扮演重要角色。當植物處于鹽脅迫環境時，土壤中高濃度鹽對大多數植物是有害的，Na+、Ca2+鹽對植物的損害更大，尤其是Na+鹽［26］。研究發現，棉花（Gossypium hirsutum）GhMYB73受NaCl和ABA誘導，將GhMYB73基因沉默，突變體株系對鹽脅迫更加敏感，然而，過表達GhMYB73擬南芥株系苗期耐鹽性卻顯著增強［27］；擬南芥AtMYB2和AtMYB44基因的轉錄水平受鹽脅迫的影響，過表達AtMYB2和AtMYB44擬南芥株系抗鹽性明顯提升［28-29］；番茄（Solanum lycopersicum）SlMYB102受滲透脅迫，尤其是鹽脅迫誘導，過表達SlMYB102番茄株系在長時間鹽脅迫下，其生長抑制程度顯著降低［30］；花生（Arachis hypogaea）中 AhMYB1、AhMYB2、AhMYB6和AhMYB7基因的表達量在鹽脅迫下顯著增加［31］；小麥（Triticum aestivum）TaMYB33、TaMYB56-B和TaMYB73基 因 均 受 高鹽誘導，過表達這些基因，所獲得擬南芥株系對鹽的耐受性顯著增強［32-34］。已有研究報道，植物R2R3-MYB基因還受干旱誘導，如干旱脅迫后，白羊草（Bothriochloa ischaemum） 根 系 中 BiMYB35、BiMYB142、BiMYB143的表達量上調，促進根部的發育，從而提高其抗旱性［35］；大豆（Glycine max）GmMYB118可以通過促進干旱、鹽脅迫相關基因的表達，調節滲透及氧化物質（如脯氨酸、葉綠素、活性氧和丙二醛）含量來維持細胞內穩態，從而增強大豆對干旱、鹽脅迫耐受性［36］。本研究表明GbR2R3-MYB1基因受高鹽和干旱誘導，其相對表達量在整體上呈先上升后下降的趨勢，且GbR2R3-MYB1基因的表達量分別在高鹽處理4 h和PEG處理2 h后達到最大峰值，這與上述報道植物R2R3MYB轉錄因子能應答鹽、干旱脅迫結果相符合。

溫度是影響植物分布、生長和產量的關鍵環境因子，近年來，研究人員對植物MYB轉錄因子應答溫度脅迫進行大量的試驗研究，發現蘋果（Malus×domestica）中MdMYB88、MdMYB124基因分別通過靶向調控MdCSP3和MdCCA1基因的表達，促進花青素積累和降低H2O2毒性以應對寒冷脅迫［37］；過表達MdMYB23轉基因蘋果愈傷組織和擬南芥株系表現出更強的耐寒性［38］。低溫脅迫50 d后，GmMYB76和GmMYB177轉基因大豆株系的存活率顯著高于野生型，且轉基因大豆株系中的脯氨酸含量顯著增加［39］。高溫脅迫下，過表達R2R3-MYB相關轉錄因子TT2和MYB5擬南芥植株表現出更強的耐熱性，相反，tt2、myb5、tt2/myb5突變體植株則對熱激反應更為敏感［40］。小麥幼苗中TaMYB79、TaMYB80、TaMYB81和 TaMYB82基 因的mRNA在40℃熱處理1 h后迅速積累［41］。藍莓（Vaccinium corymbosum）中VcMYB4a是應答非生物學脅迫的重要抑制因子，在鹽、干旱、冷脅迫下，VcMYB4a基因的表達下調，但是受極度嚴寒與熱誘導；過表達VcMYB4a愈傷組織會增強對鹽、干旱、冷、極度嚴寒和高溫脅迫敏感性［42］。本次研究發現，GbR2R3-MYB1基因的相對表達量在低溫、高溫脅迫下出現先下調再上升再下調的趨勢，表明GbR2R3-MYB1基因參與應答低溫和高溫脅迫。然而，銀杏GbR2R3-MYB1基因參與響應非生物脅迫的分子機制及其信號通路，以及是否影響銀杏生長發育等還需進一步研究。

4 結論

克隆獲得1個R2R3-MYB轉錄因子基因GbR2R3-MYB1，其編碼區長度為819 bp，編碼272個氨基酸，其相對分子量大小為30 001.60 Da，編碼蛋白為不穩定親水蛋白，定位于細胞核；GbR2R3-MYB1蛋白二級結構含有28.31% α-螺旋，4.78%β-轉角，61.03%無規卷曲，5.88%延伸鏈；與火炬松、白云杉中的R2R3-MYB蛋白親緣關系較近；GbR2R3-MYB1基因對鹽、干旱、低溫及高溫脅迫均有響應。