短時受精對夫精IVF 胚胎參數及妊娠結局的影響

高松城 王立雅 王惠潔 余秋鋒 黃智勇

隨著體外受精(in vitro fertilization,IVF)技術的不斷改進,人們正在尋找改進實驗的方法,以此產生更高質量的胚胎和更高的臨床妊娠率［1］。然而,仍然有一些IVF 周期中卵子未完全發(fā)育,約為10%～20%［2,3］。為了避免IVF 失敗,越來越多的生殖中心采用短時受精方案,以盡早確認卵子的受精狀態(tài),并提供補救卵胞漿內單精子顯微注射技術(ICSI)的可能性［4,5］。常規(guī)的長時IVF 胚胎移植是在培養(yǎng)基中加入精子和卵子,培養(yǎng)過夜(16～18 h),受精后繼續(xù)培養(yǎng)。然而,研究表明,哺乳動物在遇到配偶后20 min 發(fā)生受精,精子可以在平均15 min 內進入人類的卵子細胞［6］。80%的卵子在大約1 h 內通過與精子接觸而發(fā)生改變。此外,顆粒細胞和精細胞代謝產生的活性氧化物引起不飽和脂肪酸的過氧化影響細胞膜流動性,強化細胞質膜,有助于胚胎的分裂、發(fā)育和促進發(fā)育；相關研究表明,短時IVF和早期補救ICSI 可以防止由于IVF 完全不受精而導致的周期中斷,并產生更好的臨床結局［7］。然而,短期精卵共培養(yǎng)和早期受精是否會改變IVF 周期中卵子的正常受精能力、胚胎發(fā)育潛力和臨床結局仍存在爭議。因此本研究對長時和短時受精患者進行回顧性分析,分析其對胚胎參數及妊娠結局的影響,報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析本院2020 年6 月～2022 年5 月725 例進行IVF 的不孕患者的臨床資料,根據IVF方式分為短時組(347 例)和常規(guī)組(378 例)。兩組一般資料比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),具有可比性。見表1。

表1 兩組一般資料比較()

表1 兩組一般資料比較()

注：兩組比較,P＞0.05；HCG：人絨毛膜促性腺激素

1.2 納入及排除標準 納入標準：①女方符合IVF指征且為第一助孕周期；②患者均為原發(fā)性不孕；③男方精液常規(guī)檢查符合IVF 標準；④臨床資料完整；⑤均為長效長方案。排除標準：①女方年齡≥40 歲；②合并有其他重大疾病者；③女方基礎內分泌異常；所有研究對象均簽署知情同意書,并經醫(yī)院倫理委員會批準。

1.3 方法

1.3.1 控制性促超排卵 所有患者均接受長效促性腺激素釋放激素(GnRHa)降調,達到下調標準后給予促性腺激素(Gn)并利用陰道B 超及激素測定監(jiān)測卵泡發(fā)育情況,當卵泡達到收針標準后進行HCG 注射促進卵子成熟,32～34 h 后B 超下經陰道穿刺采集卵細胞。

1.3.2 精液處理 根據世界衛(wèi)生組織(WHO)標準,通過標準精液分析和巴氏染色對精子進行嚴格的形態(tài)學檢查。取卵當天男子手淫取精,并將所有精子收集在無菌、無毒的容器中。收集的精液在37℃下液化并通過密度梯度離心洗滌及上游處理,將用于添加精子的濃度調整為5×106/ml,并置于37°C、6% CO2的培養(yǎng)箱中進行孵育,然后用于加精。

1.3.3 受精方案 常規(guī)組采用常規(guī)長時受精,取卵日14:30,將足夠的上游精子添加到含有卵丘卵母細胞復合體 (COCs) 的3037 個培養(yǎng)皿中,每個卵子的平均精子數為(1～1.5)×106/ml,每箱3037 皿COCs 數≤8 個。短時組采用短時受精,加精時間為取卵日11:30,受精卵孵育4～6 h 后,將卵轉移到另一個3037 培養(yǎng)皿,此時,卵周圍僅剩少量卵丘細胞。

1.4 觀察指標及判定標準 比較兩組胚胎參數及妊娠結局,主要包括平均獲卵數、受精率、正常受精率、多原核受精率、卵裂率、優(yōu)質胚胎率、平均移植胚胎數、冷凍周期率、平均冷凍胚胎數、種植率、臨床妊娠率。優(yōu)質胚胎：孵育第3 天的胚胎應為卵裂球大小均勻或輕度不均勻,細胞數為7～9 細胞,優(yōu)質胚胎級別為1～2 級,胚胎碎片率＜20%。臨床妊娠：移植后1 個月時通過超聲觀察存在妊娠囊。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差()表示,采用t檢驗；計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

短時組的優(yōu)質胚胎率高于常規(guī)組,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；短時組平均獲卵數、受精率、正常受精率、多原核受精率、卵裂率、平均移植胚胎數、冷凍周期率、平均冷凍胚胎數、種植率、臨床妊娠率與常規(guī)組比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表2。

表2 兩組胚胎參數及妊娠結局比較(,%)

表2 兩組胚胎參數及妊娠結局比較(,%)

注：與常規(guī)組比較,aP＜0.05

3 討論

據報道,短期受精(精子和卵母細胞共培養(yǎng)1～4 h)可提高胚胎質量和妊娠率［8］。短時受精可以在6 h 后觀察第二極體的發(fā)射來確定受精狀態(tài),及時對未排出第二極體的卵子實施補救ICSI 是預防受精失敗的有效方法［9］。因此,許多生殖中心正在逐步引入短時受精［10］。短時受精結合補救ICSI 可以有效減少大多數胚胎不受精造成的周期失敗,其效果已經被臨床認可［11］。然而,短期受精是否會影響卵子正常受精周期的受精潛力、胚胎的發(fā)育潛力以及妊娠的臨床結局仍存在疑問,本研究調查了短時和長時受精對IVF 和臨床妊娠結局的影響。

本研究中,對常規(guī)組采用常規(guī)長時受精,對短時組采用短時受精,結果顯示,短時組的優(yōu)質胚胎率48.87%高于常規(guī)組的37.29%,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。兩組平均獲卵數、受精率、正常受精率、多原核受精率、卵裂率、平均移植胚胎數、冷凍周期率、平均冷凍胚胎數、種植率、臨床妊娠率比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。短時受精不影響常規(guī)受精率是因為卵丘細胞中的某些成分不僅可以促進精子獲能和頂體反應,還會降低多精受精比例,例如,卵丘細胞團含有大量的透明質酸,會降低多精受精的發(fā)生率［12］。在短時受精過程中早期去除卵細胞會使卵母細胞與周圍的卵巢細胞及其分泌因子分離,將微環(huán)境與卵細胞分離,并增加多精受精的可能性［13］。此外,卵子細胞的去除是一個機械過程,機械刺激可能會損害卵母細胞,尤其是透明帶,例如卵母細胞。雖然短期受精增加了多精受精率,但不影響整體正常受精率。多原核受精是一種異常受精現象,體外受精造成的多核受精的胚胎一般是多倍體,不能用于移植,導致胚胎和卵子資源大量流失［14］。許多因素是多核受精的起源,主要與女性的卵母細胞成熟度和男性的精子質量有關［15］。研究表明,短期受精可以降低多核受精率［16］。本研究發(fā)現短時組多原核受精率略低于常規(guī)組,但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),說明短時受精并不能有效降低多原核受精率。

綜上所述,不孕患者在IVF 過程中短時受精的優(yōu)質胚胎率由于縮短精卵孵育時間,在一定程度上能提高胚胎質量,短時受精可以在不影響正常受精率的前提下為臨床提供更多的優(yōu)質胚胎,可在臨床推廣使用。