昆明地區(qū)6 091 名女性HPV 篩查結(jié)果及基因分型初步探討

李心怡 ，朱 燕 ，黃蓉霞

（1）昆明市婦幼保健院藥學(xué)部;2）婦女保健部，云南 昆明 650031）

生殖器人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染會(huì)導(dǎo)致人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖，目前已知的HPV 有160 多個(gè)型別，其中高危型持續(xù)感染已被國(guó)內(nèi)外多個(gè)研究證實(shí)與子宮頸癌發(fā)病有密切相關(guān)性，低危型感染常與生殖器疣、皮膚疣等病變有關(guān)[1-2]。亞洲地區(qū)HPV16、18、52 等高危型感染較為常見(jiàn)[3]。宮頸癌是我國(guó)女性惡性腫瘤發(fā)病率排第二位的疾病，我國(guó)每年新發(fā)約13萬(wàn)病例，死亡病例約3.7 萬(wàn)[4]。近年來(lái)大量研究證實(shí)，宮頸癌發(fā)病率呈年輕化趨勢(shì)，且山區(qū)高于平原[5]。昆明地區(qū)地處西南高原地區(qū)，因此了解昆明地區(qū)女性HPV 感染情況非常有必要，根據(jù)篩查結(jié)果提前干預(yù)可有效控制宮頸癌前病變。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2021 年1 月～12 月在昆明市婦幼保健院婦科門(mén)診、住院部和健康管理中心進(jìn)行常規(guī)治療或體檢，經(jīng)知情同意后自愿進(jìn)行宮頸HPV 篩查的女性病歷資料6 091 份，年齡16～86 歲，平均年齡（37.57±8.66）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）既往有性生活史；（2）非經(jīng)期；（3）非妊娠期。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）宮頸癌患者；（2）檢測(cè)前1 d 有陰道灌洗史；（3）月經(jīng)期、妊娠期；（4）無(wú)性生活史者。本項(xiàng)目經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過(guò)后進(jìn)行。

1.2 儀器與試劑

采用上海透景生命科技股份有限公司的人乳頭瘤病毒檢測(cè)試劑盒和基因擴(kuò)增儀，運(yùn)用流式熒光雜交法進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。Luminex200 多功能流式點(diǎn)陣儀購(gòu)自美國(guó)Luminex 公司。

1.3 方法

將標(biāo)本進(jìn)行震蕩混勻后離心棄去上清液，加入核酸提取試劑后渦旋混勻，100 ℃孵育15 min，再離心提取上清液可得DNA，-20 ℃保存標(biāo)本。將標(biāo)本取出后按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增、PCR 產(chǎn)物雜交。使用 Luminex200（48 ℃預(yù)熱15 min）進(jìn)行雜交產(chǎn)物的檢測(cè)。觀測(cè)陽(yáng)性內(nèi)對(duì)照Globin 信號(hào)，當(dāng)該信號(hào)大于150 且HPV 型別特異性探針信號(hào)大于150 時(shí)，則判斷值該探針對(duì)應(yīng)的HPV 型別為陽(yáng)性，否則為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS26.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)和率[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜ 0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV 感染率

6 091 人次標(biāo)本中共檢出HPV 陽(yáng)性1 301 人次，陽(yáng)性率21.36%。單一感染1 027 例，占陽(yáng)性感染者比例78.94%。多重感染274 例，占陽(yáng)性感染者比例21.06%。

2.2 HPV 感染分型

本次研究共檢出25 種HPV 基因分型，高危型包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、55、56、58、59、61、66、68、82、83 型，低危型包括HPV6、11、42、43、44、81 型。

所有基因分型陽(yáng)性標(biāo)本共計(jì)1 689 例，其中以高危型居多，占82.95%（1 401/1 689），低危型17.05%（288/1 689）。陽(yáng)性標(biāo)本中，HPV52 型占比最 多（21.83%），其次為HPV16 型（11.38%）、HPV58 型（10.76%），見(jiàn)表1。

表1 HPV 感染亞型分布（n）Tab.1 Distribution of HPV infection subtypes（n）

2.3 感染模式

單一感染1 027 例，主要亞型為HPV52 型，占單一感染患者比例20.06%（206/1 027），其次為HPV16（9.83%）、HPV58（9.06%）。多重感染274 例，以二重感染人數(shù)最多，主要亞型為HPV52 型+HPV53 型，最多檢出7 種亞型同時(shí)感染，見(jiàn)表2。多重感染模式中以高危+高危組合模式為主，見(jiàn)表3。

表2 HPV 感染模式（n）Tab.2 Patterns of HPV infection（n）

表3 HPV 多重感染基因亞型組合模式（n）Tab.3 Combination patterns of HPV multiple infection gene subtypes（n）

2.4 感染年齡分布

將參檢者按年齡分為≤20 歲組、21～30 歲組、31～40 歲組、41～50 歲組、51～60 歲組、＞ 60歲組[6-8]。＞ 60 歲組HPV 感染率最高，其次為21～30 歲組、51～60 歲組。將各年齡組感染率進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=42.790，P=0.000），見(jiàn)表4。組間兩兩比較，21～30 歲組感染率高于31～40 歲組、41～50 歲組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.740，P=0.001；χ2=22.221，P=0.000；χ2=8.792，P=0.003）。其余組間比較結(jié)果均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.003）。

表4 HPV 感染年齡分布[n（%）]Tab.4 Age distribution of HPV infection [n（%）]

各年齡組間高危型感染率差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.820，P=0.080）。

3 討論

HPV 主要通過(guò)性交、皮膚接觸感染，也存在母嬰垂直傳播的情況[9]。多數(shù)HPV 感染是存在自限性，能夠通過(guò)自身免疫性清除。但持續(xù)的感染會(huì)引起宮頸癌、尖銳濕疣等疾病。HPV 感染通常具有隱匿性，臨床癥狀不明顯，不能被輕易識(shí)別[10]。因此了解昆明地區(qū)女性宮頸HPV 感染情況非常有必要。

分析2021 年1 月～12 月昆明市婦幼保健院就診的6 091 名女性的HPV 檢測(cè)結(jié)果顯示。去年我院最常見(jiàn)的HPV 亞型分別為HPV52、HPV16、HPV58，這與唐鳳祝等[11]報(bào)道的四川省21 776 例女性的HPV 檢查結(jié)果基本一致。張愛(ài)鳳等[7]報(bào)道的北京通州地區(qū)的常見(jiàn)類型依次為HPV16、HPV51、HPV52，王睿等[8]報(bào)道的山東地區(qū)的常見(jiàn)類型依次為HPV16、HPV52、HPV6。說(shuō)明HPV 感染亞型分布存在地域差異，南方地區(qū)HPV52 類型較常見(jiàn)，接種者在選取HPV 疫苗時(shí)需盡量覆蓋該類型。

本研究顯示本地HPV 感染模式以單一高危型感染為主，與我國(guó)其他地域檢查結(jié)果相近[7-8，11-12]。不同年齡段的HPV 感染結(jié)果顯示，21～30 歲組HPV 感染率高于31～50 歲人群。這與該年齡段性行為活躍、保健預(yù)防意識(shí)不足有關(guān)。31～50 歲女性 HPV 感染人數(shù)下降，可能原因?yàn)槠渥陨砻庖呦到y(tǒng)發(fā)育成熟、預(yù)防防護(hù)意識(shí)增強(qiáng)，性伴侶較為固定[13]。本研究 ＞ 60 歲人群HPV 率最高，這可能與該年齡段人群免疫力低下，自身清除病毒能力下降有關(guān)[14]，而且該年齡段人群常常是因?yàn)槌霈F(xiàn)癥狀后就診，因而陽(yáng)性率更高。

綜上所述，昆明地區(qū)30 歲以下和60 歲以上人群有較高HPV 感染幾率，HPV52、HPV16、HPV58 是感染風(fēng)險(xiǎn)較高的亞型。HPV 感染呈年輕低齡化趨勢(shì)，筆者認(rèn)為應(yīng)加大對(duì)青少年人群對(duì)宮頸癌防治的宣教力度，提高他們預(yù)防HPV 感染和接種宮頸癌疫苗重要性的認(rèn)識(shí)[15]。我國(guó)目前上市的能覆蓋HPV52、HPV58 的疫苗不多，相關(guān)疫苗的研發(fā)很有必要。