血清miR-1273g-3p在慢性丙型肝炎肝纖維化診療中的作用研究※

賈英杰 張曉博 張新元 楊紅霞 郭爭榮

(河北省石家莊市人民醫院消化內科，河北 石家莊 050011)

慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C，CHC)是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染引起的一種慢性肝炎。近年來HCV相關肝纖維化的研究隨著分子生物學的發展逐漸向纖維化發生相關基因轉移[1-2]。微小RNA(microRNA,miR)是一種非編碼單鏈RNA,長約22 nt[3-6]。有研究表明，人類肝星狀細胞和激活后的肝星狀細胞在靜息狀態下有miRNAs水平差異存在，循環血液中miR-1273g-3p水平可有效反映肝功能損害和肝纖維化程度[7-9]。2018年1月至2020年1月，我們采用利巴韋林聯合強肝膠囊防治CHC相關肝纖維化60例，并通過觀察患者外周血miR-1273g-3p水平變化,探討其在CHC肝纖維化診療中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取河北省石家莊市人民醫院消化內科收治的CHC患者60例作為研究組，男36例，女24例，年齡22～54歲，平均(38.14±6.36)歲。另選取同期健康體檢人員60例作為健康對照組，男38例，女22例，年齡21～53歲，平均(37.25±6.12)歲。2組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 病例選擇

1.2.1 診斷標準 CHC參照《丙型肝炎防治指南(2019年版)》中的診斷標準[10]。

1.2.2 納入標準 符合上述CHC的診斷標準；患者知情并自愿參加本研究，簽署知情同意書，經過醫院醫學倫理委員會批準。

1.2.3 排除標準 排除有甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒及戊型肝炎病毒感染者；合并酒精性、藥物性及自身免疫性肝病者；合并人類免疫缺陷病毒感染者；病情處于失代償期肝硬化者。

1.3 治療方法 研究組給予利巴韋林片(廣東華南藥業集團有限公司，國藥準字H10950323)3粒，每日3次口服；強肝膠囊 (石家莊東方藥業有限公司，國藥準字Z10980012) 5粒，每日2次口服。共治療24周。健康對照組不做任何相關藥物治療。

1.4 觀察指標及檢測方法

1.4.1 肝纖維化分期 研究組患者治療前首先在B超引導下通過肝穿刺活檢術進行肝組織病理學檢查，在10%甲醛溶液中置入2～3條肝組織，固定，送檢，分別進行肝組織HE染色及Masson染色，顯微鏡下觀察，并運用Metavir評分系統對肝纖維化程度進行判定，分析血清miR-1273g-3p與CHC肝纖維化的相關性。F 0期：無纖維化；F 1期：小葉、竇周內纖維化；F 2期：纖維化向匯管區周圍擴大；F 3期：小葉結構紊亂伴纖維間隔形成，無肝硬化；F 4期：早期肝硬化[11-12]。

1.4.2 血清miR-1273g-3p檢測 2組治療前后均采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(Real-time PCR)法檢測血清miR-1273g-3p的相對表達量，相關檢測按照試劑盒說明書進行。本研究以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)為內參，所涉及引物序列見表1。

表1 引物序列

2 結果

2.1 研究組患者CHC肝纖維化分期及病理表現情況 研究組肝纖維分期情況：F 0期14例，F 1～2期21例，F 3～4期25例。F 0期患者肝小葉結構基本正常；F 1～2期患者肝板排列整齊，小葉內可見點灶狀炎細胞浸潤，竇周纖維化不明顯，匯管區輕度擴大，纖維組織輕度增生，呈星芒狀向小葉內伸展；F 3～4期患者可見肝細胞極度水樣變、氣球樣變，竇周纖維化，匯管區明顯擴大，可見淋巴濾泡結構形成，肝小葉內纖維組織增生明顯，可見纖維間隔形成。見圖1。

圖1 研究組患者CHC肝纖維化情況

2.2 CHC肝纖維化與血清miR-1273g-3p相關性分析 與健康對照組比較，研究組CHC肝纖維化F 1～2期及F 3～4期患者miR-1273g-3p相對表達量均升高(P<0.05)，F 0期患者與健康對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。研究組不同分期患者組間比較，F 1～2期及F 3～4期患者miR-1273g-3p相對表達量均高于F 0期患者(P<0.05)，且F 3～4期患者miR-1273g-3p相對表達量高于F 1～2期(P<0.05)。經Spearman秩相關性分析顯示，CHC肝纖維化分期與血清miR-1273g-3p相對表達量呈正相關(r=0.656，P<0.05)。見表2。

表2 CHC肝纖維化與血清miR-1273g-3p相關性分析

2.3 2組治療前后血清miR-1273g-3p相對表達量比較 與本組治療前比較，研究組CHC肝纖維化F 1～2期及F 3～4期患者治療后血清miR-1273g-3p相對表達量均降低(P<0.05)，研究組CHC肝纖維化F 1～2期及F 3～4期患者治療后血清miR-1273g-3p相對表達量均高于健康對照組(P<0.05)。研究組CHC肝纖維化F 0期患者和健康對照組治療前后血清miR-1273g-3p相對表達量比較差異無統計學意義(P>0.05)，且2組組間比較差異也無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 2組治療前后血清miR-1273g-3p相對表達量比較

3 討論

CHC是臨床上慢性肝炎的主要表現類型之一，以HCV感染后導致的肝臟損傷為主要表現，如不及時治療則可進一步導致肝纖維化的發生，最終可發展為肝硬化,甚至肝癌，對患者的生命健康造成嚴重威脅。通常情況下由于肝臟具有強大的代償能力，CHC患者早期并不會出現明顯的癥狀體征，隨著病情發展患者可出現容易疲倦、渾身乏力、無精打采等肝纖維化的早期癥狀，并可伴有食欲下降甚至惡心、嘔吐等，部分患者在早期還會表現為肝區的疼痛不適[13]。中、重度的CHC肝纖維化患者則會出現肝掌、蜘蛛痣等體表皮膚的改變，甚至部分患者的肝臟會出現腫大，其次患者的凝血功能也會出現改變，表現為肝臟凝血酶原及其他凝血因子發生合成障礙，出現牙齦出血等[14-15]。現代研究表明，肝纖維化在組織學上并非不可逆，通過積極有效的治療可有效阻止和逆轉肝纖維化的發生，因此快速有效的對CHC患者肝纖維化情況做出評估和判斷具有重要的臨床意義。肝活檢進行組織病理學觀察雖是肝纖維化診斷的金標準，但其屬于有創性檢查手段，易出現疼痛、出血、感染等并發癥，探索新的檢查方法和觀察指標一直是臨床研究的重點之一[16]。

miR是機體內的一類非編碼RNA，參與調節體內細胞分化、增殖、凋亡、自噬等過程，具有重要的生物學作用。miR調控的靶基因主要有血小板衍生生長因子(PDGF)、腫瘤壞死因子(TNF)、轉化生長因子(TGF)、血管內皮生長因子(VEGF)等[17]。相關研究發現miR在轉化TGF-β/信號轉導分子(Smad)信號通路中發揮著重要作用，TGF-β/Smad信號通路增強可導致細胞基質金屬蛋白酶(MMP)和金屬蛋白酶組織抑制因子(TIMP)上調,從而導致細胞外基質(ECM)降解降低，同時還可以促進VEGF等纖維化因子活化,從而促進肝纖維化的發生[18]。牛學敏[19]研究表明，HCV肝纖維化患者血清miR-1273g-3p的水平較正常健康患者明顯上調，并在中、重度肝纖維化患者中水平更高，提示miR-1273g-3p與CHC肝纖維化的發生發展密切相關，進一步體外實驗表明，靶向抑制miR-1273g-3p表達可減少肝星狀細胞的活化與增殖，并促進其凋亡，減少膠原分泌，從而減輕肝纖維化的進展。本研究結果顯示，研究組CHC肝纖維化F 1～2期及F 3～4期患者治療前miR-1273g-3p相對表達量均高于健康對照組(P<0.05)，且miR-1273g-3p相對表達量隨著肝纖維化分期嚴重程度的增加而明顯升高(P<0.05)，具有正相關性(r=0.656，P<0.05)，提示血清miR-1273g-3p表達水平變化可作為評估CHC肝纖維化分期情況的觀察指標。

目前臨床上對于CHC的治療仍以抗病毒對癥治療為主，利巴韋林是臨床上常用的抗病毒藥，可通過阻礙病毒核酸的合成而對病毒起到抑制作用[20]。強肝膠囊是臨床治療慢性肝炎、早期肝硬化、脂肪肝等常用的中成藥。中醫學認為，CHC雖然臨床證候錯綜復雜,但其基本病機是正衰邪盛,濕熱未盡兼有血瘀[21]。強肝膠囊由茵陳、板藍根、秦艽、當歸、白芍、丹參、郁金、黃芪、黨參、澤瀉、黃精、熟地黃、山藥、山楂、六神曲及甘草組成，方中茵陳、板藍根、秦艽清熱利濕解毒，清肝利膽退黃；當歸、白芍補血活血，養血柔肝；丹參、郁金活血止痛，行氣解郁；黃芪、黨參補中益氣，扶正固表；澤瀉利水滲濕，化濁降脂；黃精、熟地黃補氣養陰，健脾益腎；山藥、山楂、六神曲健脾和胃，消食調中；甘草調和諸藥。全方共奏健脾益氣、扶正祛邪、祛濕化瘀、清肝利膽的功效。現代藥理學研究表明，丹參可改善肝臟血液循環，提高膠原酶活性，從而促進纖維降解，減輕炎性反應，促進肝細胞修復，抗肝纖維化作用明確，其機制可能與下調細胞因子、阻斷肝臟枯否細胞和肝星狀細胞的活化，減少膠原組織的合成，以及促進自由基的清除和抗脂質過氧化作用有關[22]；黃芪可以調節免疫細胞功能，降低膠原蛋白含量及膠原在肝臟中的沉積，從而起到抗肝纖維化的作用[23]；當歸可抑制纖維細胞的再生及膠原的沉積，可促進肝細胞再生、促進白蛋白合成[24]；茵陳可以預防實驗性肝損傷,減輕肝細胞炎癥程度[25]。本研究結果顯示，研究組CHC肝纖維化F 1～2期及F 3～4期患者治療后血清miR-1273g-3p相對表達量較治療前均明顯降低(P<0.05)，但其治療后水平仍高于健康對照組(P<0.05)，這也驗證了血清miR-1273g-3p水平與CHC肝纖維化相關的結論。

綜上所述，血清miR-1273g-3p可作為評估CHC肝纖維化程度的重要指標，對CHC肝纖維化的分期診斷及預后評估均有指導意義。