高效液相色譜法分析15%甲氰菊酯·噻螨酮水乳劑的有效成分

王 進，張青華，劉雪芬，潘光飛，廖文斌

(浙江禾本科技股份有限公司，浙江 溫州 325008)

甲氰菊酯是一種擬除蟲菊酯類殺蟲、殺螨劑，具有觸殺、胃毒和驅避作用，無內吸、熏蒸作用，作用于昆蟲神經系統，與鈉離子通道相互作用，破壞神經元功能，用于防治多種螨蟲(銹螨除外)和害蟲；噻螨酮是一種新的噻唑烷酮類殺螨劑，對螨類具有良好的防效，具有觸殺和胃毒作用，有很好的穿透活性，具有殺卵、殺幼蟲、殺蛹活性，對果樹(包括柑橘、蔬菜、葡萄和棉花)的多種植食性螨的幼蟲和卵有效[1-2]。

甲氰菊酯和噻螨酮的復配制劑目前國內比較少，這兩者的復配對柑橘全爪螨的田間藥效效果更佳[3]。甲氰菊酯和噻螨酮兩者的復配制劑產品的分析方法也有相關報道[4]。液相色譜法是一種比較快捷、穩定性好、分離效果好的廣譜分析方法，C18填料色譜柱，通用廣譜。本文采用通用的反相液相色譜法，使用分析快速的 150 mm ODS反相柱和普通紫外檢測器，對試樣中甲氰菊酯和噻螨酮的含量進行了同時快速地分析。該方法同時應用于甲氰菊酯原藥、噻螨酮原藥，以及其單獨或復配相關制劑產品的分析，且簡便、快速、準確度高、重現性好。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent1260 Infinity II 高效液相色譜儀(美國Agilent公司); DAD 檢測器(G7115A，美國Agilent公司); 色譜柱： VP-ODS不銹鋼柱 4.6 mm×150 mm×5 μm(日本島津)；分析天平：賽多利斯CPA225D型(德國Sartorius)，精度為 0.00001 g；超聲波清洗器(PMI-300TD，PRIMA technology Group)；有機微孔濾膜：孔徑 0.45 μm(MILEDT Technology Co.Ltd)。

甲醇(色譜純，樂清億邦儀器設備有限公司)、乙腈(色譜純，樂清億邦儀器設備有限公司)、新制超純水、甲氰菊酯標樣(w=98.6%，白色固體，上海市農藥研究所)、噻螨酮標樣(w=98.2%，白色固體，上海市農藥研究所有限公司)、15%甲氰菊酯·噻螨酮水乳劑(浙江禾本科技股份有限公司)。

1.2 色譜工作條件

流動相條件：等度洗脫V(甲醇)∶V(乙腈)∶V(水)=68∶10∶22；流動相流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫(溫差不大于 2 ℃)；測定波長：235 nm；進樣量：5 μL；保留時間：甲氰菊酯約 22.0 min，噻螨酮約 16.0 min。

上述為該制劑產品液相色譜操作條件的典型操作參數，不同實驗室可根據自身儀器特點，對上述參數作適當調整。甲氰菊酯、噻螨酮的標樣液相色譜圖見圖1，復配制劑試樣液相色譜圖見圖2。

1.噻螨酮；2.甲氰菊酯。圖1 甲氰菊酯·噻螨酮混合標樣液相色譜圖

1.噻螨酮；2.甲氰菊酯。圖2 15%甲氰菊酯·噻螨酮水乳劑試樣液相色譜圖

1.3 測定步驟

1) 標樣溶液的配制:準確稱取 0.03 g 甲氰菊酯(精確至 0.00001 g)和 0.015 g(精確至 0.00001 g)噻螨酮標樣于同一 50 mL 容量瓶中，加入約 40 mL 甲醇溶解，放入超聲波振蕩 3 min，然后用甲醇稀釋至刻度，定容，搖勻。

2)試樣溶液的配制:稱取15%甲氰菊酯·噻螨酮水乳劑試樣 0.30 g(精確至 0.00001 g)于 50 mL 容量瓶中，加入約 40 mL 甲醇溶解，放入超聲波振蕩 3 min，然后用甲醇稀釋至刻度，定容，搖勻，使用前用 0.45 μm 有機膜過濾。

3)測定：在上述操作條件下，待儀器穩定后，連續注入數針標樣直至相鄰兩針峰面積相對變化小于1.2%，再按照標樣、試樣、試樣、標樣的順序進行上機測定。

4)計算：測量結束后，將測得的兩針同一試樣溶液的峰面積以及試樣溶液前后兩針標樣溶液中甲氰菊酯(或噻螨酮)峰面積分別進行平均。試樣中甲氰菊酯(或噻螨酮)質量分數w(%)按式(1)計算：

式中：A1為標樣溶液中甲氰菊酯(或噻螨酮)峰面積的平均值；A2為試樣溶液中甲氰菊酯(或噻螨酮)峰面積的平均值；m1為甲氰菊酯(或噻螨酮)標樣質量(g)；m2為試樣質量(g)；w1為標樣中甲氰菊酯(或噻螨酮)的質量分數(%)。

2 結果與分析

2.1 液相色譜條件的選擇

甲氰菊酯和噻螨酮的紫外光譜圖如圖3、圖4。

圖3 甲氰菊酯的紫外吸收

圖4 噻螨酮的紫外吸收

由圖3、圖4中可知，甲氰菊酯和噻螨酮在 235 nm 附近均有較強的吸收，在該波長附近避免了助劑的干擾，也避免了低波長下的溶劑峰干擾，能夠滿足分析的要求，故將檢測波長確定為 235 nm。

色譜柱選擇為常用的VP-ODS反相柱及C18柱。并且用 4.6 mm×150 mm×5 μm 柱，分離效果好，分析時間短，同時考慮到甲氰菊酯和噻螨酮物化性質和溶劑的紫外吸收波長的干擾等問題。用甲醇作為溶劑，成本低，該波長干擾少，并以甲醇、乙腈和水作為流動相，將其按不同比例進行測試試驗。結果顯示，當V(甲醇)∶V(乙腈)∶V(水)=68∶10∶22時，在流速 1.0 mL/min 條件下，與助劑能有良好的分離效果，并且峰型好，峰純度測試符合要求。

2.2 分析方法的線性關系測定試驗

按照1.3的試樣溶液的制備方法，分別稱取6個不同質量的甲氰菊酯和噻螨酮標樣，配制成不同質量濃度的甲氰菊酯和噻螨酮系列標樣溶液。以甲氰菊酯(或噻螨酮)對應的峰面積為縱坐標，質量濃度為橫坐標，繪制標準曲線，然后得到兩者的線性相關曲線。其中，甲氰菊酯的線性方程為y=5515977.8934x-50403.7770，相關系數r=0.9999，r>0.99；噻螨酮線性相關方程為y=9752577.1468x-13389.0777，相關系數r=0.9999，r>0.99，因此均在線性范圍內。見圖5和圖6。

圖5 甲氰菊酯的線性關系圖

圖6 噻螨酮的線性關系圖

2.3 分析方法的精密度測定試驗

按照1.2的色譜條件，對同一批次水乳劑試樣做6次重復測定試驗，結果表明，甲氰菊酯測定結果的標準偏差為0.030%，相對標準偏差(RSD)為0.29%，重復性測定結果小于0.67×2(1-0.5×lgC)(1.88)(修訂后Horwits公式)；噻螨酮測定結果的的標準偏差為0.019%，相對標準偏差(RSD)為0.40%，重復性測定結果小于0.67×2(1-0.5×lgC)(2.12)(修訂后Horwits公式)；結果表明(表1)，同一批次產品的檢測結果重復性良好，能夠滿足日常檢測工作的需要。

表1 分析方法的精密度試驗結果

2.4 分析方法的準確度測定試驗

分別稱取5個水乳劑的制劑空白 0.25 g(精確至 0.00001 g)，置于 50 mL 容量瓶，然后分別加入 0.03 g(精確至 0.0001 g)的甲氰菊酯標樣和 0.015 g(精確至 0.00001 g)的噻螨酮的標樣，加入約 40 mL 甲醇溶解，放入超聲波振蕩 3 min，然后用甲醇稀釋至刻度，定容，搖勻，使用前用 0.45 μm 有機膜過濾。在上述色譜條件下進行分析，分別測定甲氰菊酯和噻螨酮的質量，根據添加標樣量計算其回收率。結果顯示(表2)，甲氰菊酯的平均回收率為99.5%和噻螨酮的平均回收率為99.6%，均符合回收率標準范圍98%～102%。

表2 分析方法準確度測定試驗結果

3 結論

本方法特異性好，線性關系良好，實驗方法精密度較高，準確度及回收率符合要求。采用本方法測定15%甲氰菊酯·噻螨酮水乳劑中有效成分質量分數結果可靠，并且干擾少，準確度高，便于生產中大批量試樣的測定，是一種可行的分析方法。