QuEChERS凈化結合串聯氣質法檢測玫瑰茄中4種農藥殘留

陳德斌，許均圖，陳 燕，陳冬虹

（廣州華鑫檢測技術有限公司，廣東廣州 510663）

玫瑰茄又名洛神花，是錦葵科木槿屬一年生草本植物的肉質花萼部分。玫瑰茄花萼部分肉質厚、汁水多、味道酸，含有豐富的維生素C、有機酸、果糖和花青素等，可用于生產果醬、蜜餞、果酒和果茶等。玫瑰茄具有利尿、促進膽汁分泌、降血壓、降低血液黏度和促進腸蠕動的功效，也屬于藥用植物。此外，玫瑰茄顏色鮮艷可用于提取天然色素。由于玫瑰茄的經濟價值高，玫瑰茄的人工種植規模日漸擴大，但玫瑰茄易受病菌侵害導致根莖腐病，且在花期會受到蚜蟲、葉蟬等蟲害侵擾，在種植過程中存在使用農藥來抑制病蟲害提高產量的情況，而玫瑰茄是在花期采摘，存在一定的農藥殘留風險。玫瑰茄中常見的農藥有敵敵畏、氧化樂果、氯氟氰菊酯和苯醚甲環唑等。夏會龍[1]研究了幾種干花中的農藥殘留，而專門針對玫瑰茄農藥殘留檢測的相關研究仍較少。本文通過參考不同植物性食品中農藥殘留的檢測方法[2-5]，采用QuEChERS結合串聯氣質的方法，建立了檢測玫瑰茄中敵敵畏、氧化樂果、氯氟氰菊酯和苯醚甲環唑的方法。

1 材料與方法

1.1 試劑與耗材

標準品：敵敵畏、氧化樂果、氯氟氰菊酯、苯醚甲環唑農藥標準品（1000 μg·mL-1），上海安譜璀世，上述標準品均用乙酸乙酯分別配制成100 μg·mL-1的標準儲備液，再配成10 μg·mL-1的混合標準溶液；環氧七氯內標（1000 μg·mL-1），上海安譜璀世，用乙酸乙酯配制成100 μg·mL-1的內標儲備液，再用乙酸乙酯配制成20 μg·mL-1的內標使用液。

試劑：乙腈、乙酸乙酯，均為HPLC級，CNW；無水硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸鈉、檸檬酸二鈉，均為分析純，阿拉丁；PSA（N-丙基乙二胺）、GCB（石墨化碳黑）、C18，CNW。

1.2 儀器

氣相色譜串聯質譜儀（Thermo Fisher TRACE 1300-TSQ 9000，配EI源）；電子天平（賽多利斯BSA822-CW）；渦旋振蕩器（上海安譜EOAAHM-01）；氮氣吹干儀（北京八方世紀BF-2000）；高速冷凍離心機（赫西HR/T20MM）。

1.3 樣品處理

取500 g新鮮玫瑰茄，置于粉碎機中粉碎，備用。稱取制備好的新鮮玫瑰茄10 g（精確到0.01 g）到50 mL離心管中，然后在離心管中加入15 mL乙腈、5 g無水硫酸鎂、1.5 g氯化鈉、1.5 g檸檬酸鈉、0.8 g檸檬酸氫二鈉，以及1顆陶瓷均質子，旋蓋密封離心管之后置于渦旋振蕩器中2500 r·min-1振蕩 2 min，8000 r·min-1冷凍離心5 min后，取6 mL上清液于15 mL離心管中，加入1 g無水硫酸鎂、300 mg PSA、 300 mg C18和80 mg GCB，振蕩1 min，5000 r·min-1離心5 min，準確吸取上清液3 mL到10 mL離心管中，40 ℃氮吹至近干，加入10 μL的20 μg·mL-1環氧七氯內標溶液，再準確加入1 mL乙酸乙酯，渦旋振蕩1 min，用0.45 μm針頭式濾膜過濾復溶液，上機。

1.4 儀器條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱：HP-5MS UI（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；載氣：氦氣（99.999 %）；載氣流速：1.5 mL·min-1；進樣量：1 μL；進樣模式：不分流進樣；進樣口溫度：290 ℃；程序升溫：40 ℃保持1 min，以25 ℃·min-1升 溫 至180 ℃保 持1 min，以6 ℃·min-1升 溫 至 290 ℃保持4 min。

1.4.2 質譜條件離子源：電子轟擊源（EI）；質譜碰撞氣：高純氬氣；傳輸線溫度：290 ℃；離子源溫度：300 ℃；電離能量：70 eV；掃描模式：SRM模式（4種農藥和內標的保留時間和特征離子對信息見表1）。

2 結果與分析

2.1 實驗條件優化

2.1.1 色譜柱的選擇

色譜柱作為色譜分離的核心部分，對整個實驗的結果和效率起到至關重要的作用。本研究分別對比了常用于農藥殘留檢測的非極性色譜柱HP-5 MS UI（30 m×0.25 mm，0.25 μm）、弱極性色譜柱DB-1 MS UI（30 m×0.25 mm，0.25 μm）和中等極性色譜柱DB-1701（30 m×0.25 mm，0.25 μm），結果表明，采用DB-1 MS UI柱進行分析時有機磷組分會存在峰形拖尾，而采用DB-1701柱進行分析時氯氟氰菊酯的峰形和響應較差。最終選擇HP-5 MS UI柱，分析時各組分峰形和響應都較為良好。

2.1.2 溶劑的選擇

本實驗對樣品處理過程中的提取溶劑和復溶溶劑進行了對比和選擇。通過查閱資料，可知敵敵畏、氯氟氰菊酯、苯醚甲環唑水溶性均較差，僅氧化樂果能溶于水，故本研究主要對比了QuEChERS提取方法中常用的乙腈、丙酮、乙酸乙酯作為提取溶劑和復溶溶劑時的提取效率。結果表明，以乙腈和丙酮作為提取溶劑時，4種農藥的整體提取效率均較高，而采用乙酸乙酯作為提取溶劑的時候，提取過程易發生乳化現象，且極性成分的提取效率低。考慮到丙酮與水難以分離，且丙酮作為管制試劑難以獲取，購買手續復雜，最終選取乙腈作為提取溶劑。在選擇復溶溶劑時，綜合考慮了復溶溶劑的溶解效率及其對各組分出峰峰形、結果響應以及環境友好等方面的影響，最終選擇乙酸乙酯作為復溶溶劑。

表1 玫瑰茄中4種農藥和環氧七氯的保留時間及特征離子對

2.1.3 QuEChERS凈化過程的優化

在QuEChERS方法中，QuEChERS凈化劑的選擇對實驗的回收率有很大影響，所以選擇合適的凈化劑是QuEChERS凈化的核心，而凈化劑的選擇基于樣品基質的性質。本實驗的樣品基質是玫瑰茄，玫瑰茄中富含有機酸、果糖、花青素，果核中又含有豐富的油脂，樣品基質非常復雜。在凈化劑的使用上選擇了無水硫酸鎂、PSA、C18和GCB，其中無水硫酸鎂可以去除有機相中的水分，PSA可以有效去除果酸等有機酸和一些極性色素及糖類，C18主要通過非極性相互作用吸附非極性物質如油脂等，GCB可以吸附類固醇、花青素等色素。

在凈化劑的使用量上，本實驗通過查閱參考相關文獻[6-9]，預估6 mL樣品提取液中，無水硫酸鎂、PSA、C18、GCB的用量分別為1 g、300 mg、300 mg、150 mg，但考慮到GCB對平面結構的組分有吸附作用，可能會導致氯氟氰菊酯和苯醚甲環唑的回收率偏低。QuEChERS凈化中通常采用加入甲苯來提高平面結構組分的回收率，在實驗中發現，加入甲苯確實可以提升氯氟氰菊酯和苯醚甲環唑的回收率，但同時敵敵畏的回收率降到了40 %以下，故采用甲苯加入法來提升平面結構組分的回收率在本實驗中不可行。由于玫瑰茄提取液的顏色呈亮紅色，并非像葉菜類提取液那樣呈墨綠色，所以考慮通過減少GCB使用量來保證氯氟氰菊酯和苯醚甲環唑的回收率的同時，去除提取液中的色素。實驗通過對比 50 mg、80 mg、110 mg、140 mg的GCB使用量下 4種農藥組分在0.05 mg·kg-1的加標回收率和凈化后提取液的顏色，最終選擇了80 mg的GCB使用量。不同GCB使用量下農藥回收率和色素去除效果見表2。

2.2 方法學分析

2.2.1 標準曲線線性范圍

以空白樣品提取液配制敵敵畏、氧化樂果、氯氟氰菊酯和苯醚甲環唑混合標準溶液系列，系列標液中各組分濃度均為0 mg·L-1、0.05 mg·L-1、0.10 mg·L-1、 0.20 mg·L-1、0.50 mg·L-1、1.00 mg·L-1和2.00 mg·L-1。 4種農藥標準曲線相關系數均在0.995以上。4種農藥和內標的典型譜圖見圖1。

2.2.2 檢出限

采用建立的方法，根據玫瑰茄空白樣品的平均基線噪聲值，按照3倍信噪比計算4種農藥檢出限，結果見表3。

2.2.3 回收率與精密度

在玫瑰茄空白基質中，分別添加濃度為 0.01 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1、1.00 mg·kg-1的4種 農藥，每個添加濃度做6個平行樣品，按所建立的方法進行測定，測得玫瑰茄樣品中4種農藥的加標回收率以及精密度見表3，4種農藥殘留的加標回收率在79.5%～108.1%，各加標水平的相對標準偏差均低于10%。

3 結論

本研究采用QuEChERS結合串聯氣質的方法，建立了玫瑰茄中敵敵畏、氧化樂果、氯氟氰菊酯、苯醚甲環唑的檢測方法，研究結果表明該方法操作簡便、分析成本低、處理效率高，適用于玫瑰茄中敵敵畏、氧化樂果、氯氟氰菊酯、苯醚甲環唑的 測定。

表2 不同GCB使用量下農藥回收率和色素去除效果

圖1 4種農藥和環氧七氯的典型譜圖

表3 玫瑰茄中4種農藥的定量限、回收率和精密度