血降鈣素原聯(lián)合糞鈣衛(wèi)蛋白在嬰幼兒感染性腹瀉中的臨床研究

張劍，陳鶴，廖曉卿，劉暉明

（1.江西省贛州市婦幼保健院，贛州 341000；2.江西省贛州市大余縣人民醫(yī)院，贛州 341500）

感染性腹瀉癥狀多樣、病情變化多、病原多樣，故病發(fā)后予以準(zhǔn)確的診斷鑒別使患兒得到及時(shí)救治十分關(guān)鍵[1]?，F(xiàn)階段研究顯示，導(dǎo)致腹瀉發(fā)生的微生物主要包含病毒與細(xì)菌，且以諾如病毒、輪狀病毒、沙門菌、大腸埃希菌及志賀菌等較為常見(jiàn)[2]。目前臨床針對(duì)嬰幼兒感染性腹瀉類型的鑒別一般采取臨床表現(xiàn)結(jié)合糞便病原體檢測(cè)的形式進(jìn)行判斷，并指導(dǎo)用藥，但糞便病原體檢測(cè)陽(yáng)性率低、耗時(shí)長(zhǎng)、結(jié)果獲取慢，臨床指導(dǎo)意義不大[3]。但重型感染性腹瀉患兒往往病情嚴(yán)重、病情進(jìn)展快，一旦未能及時(shí)搶救則會(huì)大大加重患兒死亡率。血清降鈣素原（Procalcitonin，PCT）則為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白之一，在機(jī)體受到細(xì)菌感染下可導(dǎo)致其水平升高，故可將其作為機(jī)體炎性反應(yīng)敏感指標(biāo)[4-5]；而鈣衛(wèi)蛋白（Fecal Calprotectin，F(xiàn)C）則是源于中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的一種炎性反應(yīng)標(biāo)志物，在炎癥性腸病活動(dòng)性評(píng)估中具有重要價(jià)值，但在感染性腹瀉病原鑒別中的應(yīng)用并不多見(jiàn)[6]。鑒于此，研究納入贛州市婦幼保健院兒科住院部2019年10月至2021年10月收治的感染性腹瀉患兒（重癥、輕癥）及正常體檢嬰幼兒為例，分析PCT、FC在疾病診斷鑒別中的應(yīng)用價(jià)值，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取贛州市婦幼保健院兒科住院部2019年10月至2021年10月收治的重型感染性腹瀉患兒病例60例（其中細(xì)菌性腹瀉30例、輪狀病毒腹瀉30例）、同時(shí)期門診收治的輕型感染性腹瀉患兒60例（其中細(xì)菌性腹瀉30例、輪狀病毒腹瀉30例），以及兒保科正常體檢嬰幼兒30例為研究對(duì)象，采集對(duì)象基礎(chǔ)資料見(jiàn)表1，患兒間性別、年齡等基礎(chǔ)信息數(shù)據(jù)對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。研究項(xiàng)目獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)；參與患兒家屬均知情，并簽署同意書。

表1 患兒基本資料對(duì)比

納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡在6個(gè)月~6歲；納入患兒均與《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》中關(guān)于細(xì)菌或病毒感染性腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn)相一致（細(xì)菌感染可見(jiàn)糞便常規(guī)檢測(cè)中白細(xì)胞增多，血常規(guī)顯示白細(xì)胞計(jì)數(shù)＞10×109/L，糞便培養(yǎng)可見(jiàn)致病菌；病毒感染可見(jiàn)糞便病毒檢測(cè)抗原陽(yáng)性，血常規(guī)顯示白細(xì)胞計(jì)數(shù)正常）；檢查前14 d無(wú)抗菌藥物使用史。

排除標(biāo)準(zhǔn)：慢性腹瀉；營(yíng)養(yǎng)不良；合并消化道腫瘤或畸形；近期有激素類或抗生素類藥物使用史；中途失訪。

1.2 方法

1.2.1 采集標(biāo)本 在患兒入院后均采集空腹靜脈血及大便標(biāo)本。大便標(biāo)本留存在室溫下解凍，取標(biāo)本50~100 mg置于聚丙烯管，依據(jù)質(zhì)量、容積為1/49的比例加入抽提液，混合均勻，取標(biāo)本溶液1.5 mL置于離心管，離心5 min后取上清液待檢。采集血液標(biāo)本后在2 h內(nèi)離心，離心環(huán)境為3000 r/min，離心10 min，取血清待檢。

1.2.2 FC檢測(cè) 使用廈門為正生物科技有限公司的糞便鈣衛(wèi)蛋白檢測(cè)試劑盒檢測(cè)糞鈣衛(wèi)蛋白。標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)置為五個(gè)質(zhì)量水平——10、30、100、300、600 Vμg/g，檢測(cè)標(biāo)本。最高水平標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值2284、2397，采取四參數(shù)法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算，以1/50的比例稀釋的標(biāo)本由于超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍未檢出，對(duì)其進(jìn)行再度稀釋、重測(cè)，直至測(cè)出。上述操作均依據(jù)廈門為正生物科技有限公司的糞便鈣衛(wèi)蛋白檢測(cè)試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行。

1.2.3 PCT檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)PCT，試劑盒購(gòu)自南京諾爾曼生物技術(shù)有限公司。以酶聯(lián)免疫熒光分析法進(jìn)行測(cè)定，正常參考值為0~0.5 μg/L，＞0.5 μg/L為陽(yáng)性。每日分別檢測(cè)高、低水平質(zhì)控品，Levey-Jennings質(zhì)控圖以Westgard規(guī)則繪制。

1.2.4 糞便細(xì)菌培養(yǎng)及病毒檢測(cè) 糞便標(biāo)本以SS瓊脂平板接種，在恒溫箱孵育24~48 h，孵育溫度37℃，選擇細(xì)小透明菌落在半固體瓊脂斜面進(jìn)行接種，血清學(xué)實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，進(jìn)而以腸道菌鑒定板[珠海迪爾生物工程有限公司]進(jìn)行鑒定。同時(shí)，采集糞便標(biāo)本，以金標(biāo)法檢測(cè)輪狀病毒、腸道腺病毒、諾如病毒等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0版本軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。計(jì)量數(shù)據(jù)用（±s）表示，組間以t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)用[n（%）]表示，組間以χ2檢驗(yàn)；各指標(biāo)診斷效能以受試者工作特征（ROC）曲線進(jìn)行分析，組間曲線下面積（AUC）對(duì)比以Z檢驗(yàn)；P＜0.05表示組間差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義存在。

2 結(jié)果

2.1 各組嬰幼兒PCT、FC水平對(duì)比 各組嬰幼兒PCT、FC水平對(duì)比可見(jiàn)，體檢正常組＜輕型病毒性腹瀉組＜重型病毒性腹瀉組＜輕型細(xì)菌性腹瀉組＜重型細(xì)菌性腹瀉組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組嬰幼兒PCT、FC水平對(duì)比（±s）

表2 各組嬰幼兒PCT、FC水平對(duì)比（±s）

注：t1-體檢正常vs輕型病毒性腹瀉；t2-輕型病毒性腹瀉vs輕型細(xì)菌性腹瀉；t3-輕型細(xì)菌性腹瀉vs重型病毒性腹瀉；t4-重型病毒性腹瀉vs重型細(xì)菌性腹瀉。1P＜0.05，對(duì)比體檢正常組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；2P＜0.05，對(duì)比輕型病毒性腹瀉組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；3P＜0.05，對(duì)比輕型細(xì)菌性腹瀉組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；4P＜0.05，對(duì)比重型病毒性腹瀉組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

組別 例數(shù) PCT（ng/mL） FC（μg/g）重型細(xì)菌性腹瀉重型病毒性腹瀉輕型細(xì)菌性腹瀉輕型病毒性腹瀉體檢正常t1/P t2/P t3/P t4/P 30 30 30 30 30 1.42±0.121234 0.58±0.06123 0.95±0.1012 0.32±0.041 0.10±0.02 26.944/0.000 32.039/0.000 17.378/0.000 34.293/0.000 452.59±27.681234 139.78±18.59123 396.46±19.5412 98.77±12.561 21.36±2.59 33.062/0.000 70.194/0.000 52.127/0.000 51.385/0.000

2.2 PCT、FC對(duì)嬰幼兒感染性腹瀉的診斷價(jià)值 整合患病組嬰幼兒PCT、FC水平數(shù)據(jù)對(duì)比，細(xì)菌性腹瀉組明顯高于病毒性腹瀉組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。同時(shí)，經(jīng)ROC曲線分析可見(jiàn)，血清PCT、FC對(duì)嬰幼兒細(xì)菌性腹瀉與病毒性腹瀉鑒別的截?cái)嘀捣謩e對(duì)應(yīng)0.92 ng/mL、302.56 μg/g；AUC分別為0.802、0.891。二者聯(lián)合診斷（PCT、FC中任一指標(biāo)高于截?cái)嘀导礊榧?xì)菌性腹瀉）的AUC為0.962，診斷效能高于PCT、FC單一診斷（Z=3.956、4.387，均P＜0.001）。見(jiàn)表3、圖1、表4。

表4 ROC分析結(jié)果

圖1 ROC曲線圖

表3 細(xì)菌性腹瀉、病毒性腹瀉患兒PCT、FC水平對(duì)比（±s）

表3 細(xì)菌性腹瀉、病毒性腹瀉患兒PCT、FC水平對(duì)比（±s）

注：*P＜0.05，組間對(duì)比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

組別 例數(shù) PCT（ng/mLl） FC（μg/g）細(xì)菌性腹瀉病毒性腹瀉60 60 t P 1.13±0.11 0.45±0.05*43.592 0.000 420.61±18.79 113.77±13.62*102.416 0.000

3 討論

感染性腹瀉的發(fā)生主要與細(xì)菌、病毒等病原體感染有關(guān)，而不同病原體所致的腹瀉則需采取不同的治療方案；針對(duì)細(xì)菌感染性腹瀉建議以抗菌藥物治療，而病毒感染性所致腹瀉則無(wú)特效藥物，需對(duì)癥干預(yù)[7-8]。故在患兒病發(fā)后，準(zhǔn)確鑒別其感染類型對(duì)于指導(dǎo)臨床治療，控制疾病具有重要意義。而從患兒臨床表現(xiàn)上來(lái)看，無(wú)論是病毒性感染亦或細(xì)菌性感染，患兒均會(huì)有一定的發(fā)熱、腹痛、嘔吐等表現(xiàn)，故難以據(jù)此對(duì)病癥進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估。因而血液、糞便標(biāo)本等指標(biāo)的檢測(cè)則成為了判定腹瀉類型的重要途徑之一。PCT是一種在外周血白細(xì)胞分泌后合成于甲狀腺C細(xì)胞中的血清指標(biāo)；相關(guān)研究顯示，在細(xì)菌感染情況下可導(dǎo)致其大量分泌，使其血清水平呈幾何倍增長(zhǎng)，但在病毒感染中，則表現(xiàn)為輕度升高，甚至不發(fā)生明顯變化[9-11]。結(jié)合此次研究可見(jiàn)，對(duì)比體檢正常嬰幼兒與患病兒童的PCT水平，體檢正常組＜輕型病毒性腹瀉組＜重型病毒性腹瀉組＜輕型細(xì)菌性腹瀉組＜重型細(xì)菌性腹瀉組（P＜0.05），提示血清PCT水平變化與細(xì)菌感染性腹瀉間具有更為密切的關(guān)聯(lián)。但研究也顯示，病毒感染引發(fā)的腹瀉患兒血清PCT水平也會(huì)出現(xiàn)升高，這也能導(dǎo)致PCT對(duì)細(xì)菌感染性腹瀉的鑒別效能有所降低[12]。FC則為常見(jiàn)的炎性標(biāo)志物，其可對(duì)炎性活動(dòng)進(jìn)行較好地反映，且在體外環(huán)境及腸腔內(nèi)均有較好的穩(wěn)定性。此次研究顯示，在對(duì)比各組嬰幼兒FC水平下，仍為體檢正常組＜輕型病毒性腹瀉組＜重型病毒性腹瀉組＜輕型細(xì)菌性腹瀉組＜重型細(xì)菌性腹瀉組（P＜0.05），提示對(duì)比病毒感染，F(xiàn)C對(duì)細(xì)菌感染敏感性更高。感染性腹瀉導(dǎo)致FC升高的機(jī)制可能與病原體入侵腸道后不斷繁殖有關(guān)，同時(shí)病原體在腸道黏附也會(huì)導(dǎo)致大量毒素釋放，進(jìn)而導(dǎo)致腸道出現(xiàn)分泌性反應(yīng)，引發(fā)腹瀉[12-14]。

另外，本次研究整理患病嬰幼兒的PCT、FC水平對(duì)比可見(jiàn)，細(xì)菌性感染患兒明顯高于病毒性感染患兒；且PCT+FC聯(lián)合診斷的診斷效能顯著高于單一PCT、FC診斷。這一結(jié)果提示，對(duì)比病毒性感染，PCT、FC均對(duì)細(xì)菌性感染具有更好的敏感性；且在二者聯(lián)合檢測(cè)下對(duì)疾病的診斷效能更高。分析可見(jiàn)，在病原體進(jìn)入嬰幼兒腸道后，會(huì)直接對(duì)作用于腸道上皮細(xì)胞，進(jìn)而導(dǎo)致腸道發(fā)生黏膜水腫、充血等情況，并引發(fā)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、炎癥介質(zhì)滲出等癥狀。在中性粒細(xì)胞經(jīng)病變黏膜向腸腔遷移期間，鈣衛(wèi)蛋白作為嗜中性粒細(xì)胞標(biāo)志物則會(huì)隨之遷移并以糞便形式排出，進(jìn)而導(dǎo)致FC水平升高[15]。在這一作用機(jī)制下，隨著患兒病癥的加重，則會(huì)導(dǎo)致鈣衛(wèi)蛋白排出的量隨之增加，最終表現(xiàn)為FC水平升高。

綜上，細(xì)菌性感染腹瀉患兒的PCT、FC水平較病毒性感染有明顯提高，且在患兒病情加重下，其機(jī)體PCT、FC水平也會(huì)隨之升高，故可將其作為疾病預(yù)測(cè)評(píng)估的臨床指標(biāo)。同時(shí)，聯(lián)合PCT、FC檢測(cè)的疾病診斷效能遠(yuǎn)高于單一指標(biāo)，建議推廣。