上饒地區RhD陰性獻血者表型及不規則抗體鑒定分析

汪全民，萬琳

（江西省上饒市中心血站輸血研究室，上饒 334000）

隨著臨床輸血事業的不斷發展，對人類紅細胞血型系統的認識和研究更加深入，發現Rh血型系統的復雜性以及對臨床輸血的重要性，ABO血型系統因較少產生不規則抗A、抗B且同型輸注，對臨床安全輸血困擾較少，而Rh血型系統除D抗原同血型輸注外，對其它有重要臨床意義的抗原（C、c、E、e）未進行同型相輸，多次輸注Rh抗原不匹配的血液極易產生不規則抗體，研究發現，Rh血型系統中D抗原免疫原性最高，其次為E抗原[1]，抗原抗體不匹配輸血可引起溶血性輸血反應[2]。因此，采供血機構檢測獻血者RhC、c、E、e抗原和血型不規則抗體，對血站合理化儲存稀有血型血液，滿足特殊患者的用血需求有重要現實意義。為了提高臨床安全輸血，減少患者輸血反應，獲取上饒地區Rh陰性獻血者Rh表型及不規則抗體的構成，本文通過回顧分析近兩年本血站檢驗科送檢的初篩RhD陰性獻血者檢測結果，旨在為臨床安全輸血提供支持和依據，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象2020年7月至2021年6月本血站檢驗科送檢的初篩RhD陰性標本299例，年齡18～60周歲的健康無償獻血者（剔除重復獻血者）。

1.2 儀器與試劑KA-2200型離心機（日本Kubota公司）；DHW-600型電熱恒溫水箱（北京國華醫療器械廠）；抗D（IgG+IgM）試劑（英國Millipore公司）；RhD(IgM)血型定型試劑、抗D(IgG)試劑、單克隆IgM抗血清抗C、抗c、抗E、抗e、抗體篩選紅細胞、抗體特異性鑒定譜細胞、多特異性抗人球蛋白試劑（上海血液生物醫藥有限責任公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 Rh(D）陰性確認RhD(IgM)血型試劑應用梯度板鹽水法篩選獻血者，初篩RhD陰性獻血者使用抗D(IgG)和抗D（IgG+IgM）試劑進行Rh(D）陰性確認，以排除弱D和部分D，按照試劑說明書的操作要求在試管中滴加抗D試劑1至2滴，再滴加2%～5%的待檢紅細胞1滳，1000 g離心15秒觀察結果，如無凝集在37℃恒溫水箱中孵育30分鐘，按間接抗人球蛋白試驗（IAT）進行測定。

1.3.2 Rh血型抗原檢測 應用試管鹽水法，單克隆抗C、抗c、抗E、抗e血清檢測RhD陰性獻血者紅細胞相應抗原，按照試劑說明書操作要求在各試管中分別加入抗血清1滴和2%～5%的被檢者紅細胞1滴，室溫反應10分鐘后，1000 g離心15 s觀察結果。

1.3.3 抗體篩查及鑒定 參照《全國臨床檢驗操作規程》（第4版）的方法對標本進行抗體篩查及鑒定[3]。

1.4 統計學處理 采用SPSS 22.0軟件進行分析，男性與女性獻血者不規則抗體陽性通過四格表檢驗進行比較分析，P＜0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 初篩檢出299份RhD陰性標本經Rh(D）陰性確認D變異型8份（2.68%），RhD陰性291份。見表1。

2.2 Rh表型檢測情況291份RhD陰性標本C、c、E、e抗 原 表 現 型 分 別 是ccdee（50.5%）、Ccdee（36.8%）、CCdee（8.9%）、ccdEe（2.4%）、CcdEe（1.0%）、CCdEe（0.4%）表1。RhD陰性獻血者E、C抗原陽性率見表2。

表1 291份RhD陰性標本C、c、E、e抗原表現型分布

表2 RhD陰性獻血者E、C抗原構成比

2.3 不規則抗體鑒定結果299例RhD陰性標本中檢出不規則抗體8例（2.68%），抗體特異性鑒定結果見表3。

表3 8例不規則抗體陽性結果分布

2.4 男女獻血者不規則抗體結果比較分析P＞0.05性別差異無統計學意義，見表4。

表4 獻血者男女不規則抗體陽性比例結果分析

2.5 3 例IgG抗-D抗體獻血者調查隨訪情況（1）獻血者余某，女，53歲，B型Ccee，25年前因手術輸血一次，有妊娠史，孕有RhD陽性子女2名；（2）獻血者曹某，女，24歲，B型ccee，無輸血史，有妊娠史，孕有RhD陽性子女1名；（3）獻血者劉某，女，55歲，O型ccee，1987年因剖腹產輸血一次，有妊娠史，丈夫血型RhD陽性，孕有小孩一名，RhD血型不詳。

3 討論

臨床輸血是救治患者的重要治療手段，輸血存在一定的風險性，提高輸血的安全性一直是臨床關注的重點[4]。對于稀有血型受血者，快速找到相合的血液至關重要，這就需要采供血機構根據不同的ABO血型及Rh表型合理化儲存血液。本次調查的RhD陰性獻血者中，ABO血型分布特點為O＞A＞B＞AB,與相關文獻報道的分布頻率一致[5-6]，ABO血型在Rh表型中的分布頻率與總體分布頻率基本一致，有利于血庫合理儲存相應血液。對于Rh陰性血型表現型目前發現共有8種,而本次調查的291名RhD陰性獻血者Rh表現型檢出6種，以ccdee（50.5%）為主，其次是Ccdee（36.8%)，CCdee（8.9%）、ccdEe（2.4%）、CcdEe（1.0%）、CCdEe（0.4%），未檢出稀有ccdEE和CCdEE表型，本地區Rh表現型分布特點與相關文獻報道類似[7-9]。調查發現（表2），RhE抗原陽性率在RhD陰性獻血者中較低（3.78%），而RhC抗原陽性率與抗原陰性率較接近，由此表明，RhD陰性患者輸注D陰性血液時，在Rh表型未同型輸注時，產生抗C抗體的概率大大高于產生抗E抗體。因此，對于需要反復輸血治療的RhD陰性患者，RhC同型輸注比RhE同型輸注更有意義，避免因多次抗原刺激從而產生抗C抗體，造成后期可能無法找到完全匹配的血液進行輸注，只能冒險輸注不完全相合的血液[10]。ccdee和Ccdee兩種表型合計87.3%，Rh陰性血液輸血電子配血，這兩種血型匹配度高，因此，血站建立一支固定的Rh表型獻血者隊伍，特別是Rh稀有表型，可為臨床大部分稀有血型患者用血實現電子配血，以滿足Rh陰性患者安全用血的需求，為患者及時安全輸血提供支持。

不規則抗體相對ABO血型系統中規律產生抗A、抗B抗體而言的非意料之中的意外抗體，其主要通過母嬰血型不合引發妊娠及輸血等免疫刺激而產生的IgG類抗體[11-12]。此次調查的299例標本不規則抗體篩查陽性8例（2.68%），略高于文獻報道的在健康人群中檢出率為0.3%～2.0%[13]，可能與調查的標本量少造成結果偏差有關。本次調查的8例不規則抗體陽性中，7例女性獻血者，其中3例IgG類抗-D抗體，經隨訪調查可知，產生IgG類抗-D抗體的均有妊娠史的女性，其中兩位有輸血史，另一位無輸血史，但孕有RhD陽性子女一名。據文獻報道，RhD陰性個體經由輸血、懷孕等接觸D抗原后,產生抗體的幾率明顯大于其他血型抗原[14]。另外，產生IgG抗-E和IgG抗-C的兩位女性獻血者，年齡分別是22歲和44歲，因未能取得聯系，不能確定產生的原因，其Rh表型分別是Ccdee和ccdee，RhE抗 原 和RhC抗 原 的 表 達 與RhD關系密切，在本次調查的RhD陰性獻血者中，RhE抗原表達極低（3.78%），而在RhD陽性人群中，RhE抗原陽性率為45.36%[9]，因此，在女性妊娠RhD陽性胎兒概率極高的情況下，同樣懷孕RhE陽性胎兒的概率也較高，提示，RhD陰性女性因妊娠刺激產生抗-E抗體的可能性較大。不同的是，RhC在RhD陰性人群中抗原表達陽性率較高（47.08%），在RhD陽性人群中，RhC抗原陽性率高達89.94%[9]，同理說明，在RhD陰性女性人群中，因妊娠刺激產生抗-C抗體的概率可能比RhD陽性妊娠刺激產生抗-C的概率更高。

本次調查的女性獻血者抗體陽性比例（4.46%）高于男性（0.7%），連續校正卡方檢驗P＞0.05，性別差異無統計學意義，可能與不規則抗體陽性例數較少有關。據文獻報道，女性獻血者不規則抗體陽性率明顯高于男性[15]，隨著年齡的增長，女性獻血者妊娠次數的增加，胎母血型不合的免疫刺激的機會更多，產生不規則抗體的概率更大，同時發生新生兒溶血病的風險增高。因此，篩查女性獻血者不規則抗體有其必要性，特別是輸注非紅細胞制品的患者，輸注前應篩查不規則抗體或次側交叉配血，避免發生不規則抗體陽性血液輸給具有相應抗原的患者體內,造成溶血性輸血反應,甚至危及患者的生命[16]。

綜上，分析獻血者Rh表型和不規則抗體的構成及分布，有利于完善Rh獻血者資料庫，對于稀有血型患者實現電子配血和精準輸血進行前期探索，為采供血機構合理化儲存稀有血型的血液提供數據支持，便于多次輸血的患者同表型輸注，以滿足稀有血型患者的安全輸血需求。