IRMA及SP免疫組化染色檢測在結腸癌診斷中的意義

陳敬信 王小玲

(1.陜西省森林工業職工醫院病理科，陜西 西安 710300；2.渭南市第二醫院病理科，陜西 渭南 714000)

結腸癌為結直腸癌的主要類型之一，其發生周期比較長，開始發病時多為結腸良性腫瘤，然后逐漸發展到結腸癌，這個過程涉及到多種基因的突變與異常表達等[1]。生長抑制因子2(ING2)為一種抑制因子，但是也在多種惡性腫瘤呈現高表達狀況，可促進腫瘤增殖與侵襲[2]。基質金屬蛋白酶-13(MMP-13)為一種促癌因子，也屬于基質金屬蛋白酶重要家族成員之一，MMP-13表達升高可參與惡性腫瘤的浸潤與轉移，導致患者的病情惡化[5]。當前診斷結腸癌的方法比較多，鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP)免疫組化染色為檢測ING2與MMP-13表達的重要方法，但是多為定性分析，定量分析還存在一定的不足[3]。固相免疫放射分析法(IRMA)為當前比較新穎的診斷方法，是基于血清學的診斷方法。本文探討了IRMA及SP免疫組化染色檢測在結腸癌診斷中的意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年8月到2021年6月在我院手術切除的結腸良性腫瘤患者(結腸良性腫瘤組)78例與結腸癌患者(結腸癌組)78例。結腸癌組中男40例，女38例，平均年齡(57.39±3.68)歲，平均體質量指數(20.87±1.57)kg/m2，平均腫瘤直徑(3.58±0.27)cm。納入標準：年齡20～75歲；所有病例經過病理診斷為結腸癌或結腸良性腫瘤，病理類型：腺癌70例，鱗癌8例；漿膜浸潤30例；組織學分化：高分化18例，中分化29例，低分化31例；臨床分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期 22例，Ⅲ期16例，Ⅳ期12例。結腸良性腫瘤組中男39例，女39例，平均年齡(57.29±5.11)歲，平均體質量指數(20.48±1.11)kg/m2，平均腫瘤直徑(3.56±0.33)cm。納入標準：年齡20～75歲；所有病例經過病理診斷為結腸癌或結腸良性腫瘤；本研究通過本院倫理委員會批準；具有詳細的一般資料與病理資料；無結腸手術史；手術與病理檢查前未給予任何治療(包括放療、生物治療、化療等)；患者知情同意。排除標準：所取得標本不全者；臨床資料不全者；樣本無法進行后續檢測分析者；妊娠與哺乳期婦女；合并其他部位腫瘤者。兩組患者一般資料對比差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2SP免疫組化染色檢測 采用免疫組化SP法檢測腫瘤組織中腫瘤細胞ING2和MMP-13表達情況，統計陽性細胞數和陽性強度。腫瘤組織經4%甲醛固定、石蠟切片后，行SP法免疫組化染色。加入抗ING2和抗MMP-13，抗體滴度分別為1：50 和1：100，計算ING2與MMP-13陽性表達率。染色強度評分：0分-無色，1分-淺黃色，2分-黃色，3分-深黃色。陽性細胞百分比評分：0分-≤5%，1分-5%～25%，2分-26%～50%，3分-51%～75%，4分->75%。染色強度*陽性細胞百分比=最終得分，0～4分為陰性表達，5～12分為陽性表達。

1.3IRMA檢測 取所有患者的空腹靜脈血1～2 mL，靜置30 min后，1 000 rpm/min離心10 min，取上層血清，采用IRMA法檢測血清ING2與MMP-13含量，檢測試劑盒購自北京福瑞生物工程公司，陽性閾值：ING2≥6.66 pg/mL，MMP-13≥4.45 pg/mL。

1.4調查內容 調查兩組患者的性別、年齡、體質量指數、腫瘤部位、腫瘤直徑等一般資料，重點記錄結腸癌患者的組織學分化、漿膜浸潤、臨床分期、病理類型等情況。

2 結 果

2.1ING2與MMP-13 IRMA陽性率對比 結腸癌組的ING2與MMP-13 IRMA陽性率分別為71.8%和76.9%，高于結腸良性腫瘤組的14.1%和16.7%(χ2=52.977、56.875，P<0.05)。

2.2ING2與MMP-13 SP陽性率對比 結腸癌組的ING2與MMP-13 SP陽性率分別為74.4%和78.2%，高于結腸良性腫瘤組的15.4%和19.2%(χ2=54.833、54.292，P<0.05)。

2.3診斷情況 在156例患者中，IRMA診斷為結腸癌71例，結腸良性腫瘤85例；SP診斷為結腸癌77例，結腸良性腫瘤79例。

2.4診斷價值對比 IRMA診斷結腸癌的敏感性與特異性為89.7%(70/78)和98.7%(77/78)，SP診斷的敏感性與特異性為98.7%(77/78)和100.0%(78/78)，SP診斷的敏感性高于IRMA(χ2=5.778，1.006，P<0.05)。

3 討 論

ING2在乳腺癌、胃癌、食管癌、白血病、肺癌等人類多種惡性腫瘤組織中表達上升，而這種表達上升的現象是由于mRNA 表達減少或穩定性下降有關，揭示ING2表達上升很可能參與了這些惡性腫瘤的發生發展，初步確定了ING2 促癌基因的地位[4]。MMP-13 蛋白的過表達屬于病理狀態，與腫瘤細胞的增殖與轉移密切有關[5]。

本文結果顯示，結腸癌組的ING2與MMP-13 IRMA陽性率分別為71.8%和76.9%，高于結腸良性腫瘤組的14.1%和16.7%(P<0.05)；結腸癌組的ING2與MMP-13 SP陽性率分別為74.4%和78.2%，高于結腸良性腫瘤組的15.4%和19.2%(P<0.05)，表明ING2與MMP-13在結腸癌患者IRMA及SP免疫組化染色診斷中都呈現高表達狀況。當前也有研究顯示結直腸癌組織中MMP-13蛋白高于非病灶組織，也高于正常人群，且與結直腸癌的病理特征具有相關性，還可預測患者的預后[6]。ING2 在腫瘤組織或正常組織中的表達情況可能存在對器官的選擇性或是受不同蛋白的調控作用，ING2 高表達可能也參與了對一些與惡性腫瘤侵襲、浸潤、轉移相關的基因的調控，而基質屬蛋白酶家族就是參與腫瘤侵襲、浸潤、轉移的主要基因家族[7]。

結腸癌也是最常見的惡性腫瘤之一，占消化道腫瘤的20.0%以上。早期結腸癌患者的5年生存率可在50.0%以上，而晚期結腸癌患者的5年生存率低于20.0%，因此早期診斷結腸癌具有重要價值[8]。IRMA檢測屬于無創性檢測，還有簡單、方便快速等特點，但是診斷的敏感性有待提高。免疫組化為病理科的常見檢測方法，診斷的特異性與敏感性都比較高，但是診斷比較費時，對于診斷人員的經驗要求比較高[9]。本研究顯示，在156例患者中，IRMA診斷為結腸癌71例，結腸良性腫瘤85例；SP診斷為結腸癌77例，結腸良性腫瘤79例；IRMA診斷結腸癌的敏感性與特異性為89.7%(70/78)和98.7%(77/78)，SP診斷的敏感性與特異性為98.7%(77/78)和100.0%(78/78)，SP診斷的敏感性高于IRMA(P<0.05)，表明兩者診斷結直腸癌都有很高的特異性，但是SP診斷的敏感性更好。當前有研究顯示顯示ING2與MMP-13 在正常人類成纖維細胞中穩定的表達對維持其正常生長過程發揮著極其重要的作用，不過ING2與MMP-13在不同腫瘤類型中的表達也存在差異性[10]。

綜上，ING2與MMP-13在結腸癌患者IRMA及SP免疫組化染色診斷中都呈現高表達狀況，IRMA及SP診斷結直腸癌都有很高的特異性，但是SP診斷的敏感性更好。