食管癌組織中FHIT蛋白及mRNA的臨床意義分析

陳 鵬

（赤峰市醫院腫瘤外科，內蒙古 赤峰，024000）

食管癌是一種基因型疾病，長期以來，我國食管癌病死率均較高，對我國居民的生命健康造成了嚴重威脅[1]。現階段，在降低食管癌病死率的嘗試中，早期發現、診斷、治療癌前病變是唯一途徑。對疑似病例，均應做食管吞稀鋇X 線雙重對比造影。早期可見食管黏膜皺襞紊亂、粗糙或有中斷現象。食管癌首發吞咽困難或者吃飯有哽咽感，甚至胸前區和后背有疼痛表現，出現上述癥狀要高度警惕。首選患者做食管鋇餐檢查，檢查后如果發現食管黏膜有破壞、有充盈缺損或者食管壁僵硬，高度懷疑食管癌，建議患者做胃鏡檢查、食管鏡檢查。食管鏡檢查，可以對病變部位的描述更清楚。通過活檢的辦法，取組織以便診斷更明確，如果經病理診斷后，診斷是鱗狀細胞癌，可明確診斷。病理診斷為臨床上最常用的檢查方法，也是確診的方法，對于食管癌患者，沒有食管鏡活檢的病理檢查，不采用手術治療。因此，分析癌前病變基因蛋白表達變化，并分析其和組織病理學改變的相關性，對其分子機制進行探討，能夠為臨床提供食管癌發生發展及轉歸提供理論依據。近年來，分子生物學得到了飛速發展，臨床日益重視食管癌中抑癌基因的作用[2]。有研究表明，絕大部分腫瘤中脆性組氨酸三聯體基因（fragilehistidinetriad，FHIT）丟失或頻繁降低表達，而FHIT 基因轉錄和腫瘤的發生相關，因此在多種腫瘤中，FHIT 基因均是候選抑制基因[3-4]。本研究統計分析了2019年3月～2021年10月赤峰市醫院收治的60 例食管癌患者的資料，分析了食管癌組織中FHIT 蛋白及mRNA 的表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取2019年3月～2021年10月赤峰市醫院的食管癌患者60 例樣本作為病例組、內鏡室的正常食管組織患者60 例樣本作為對照組。對照組60 例，年齡37～77 歲，平均年齡（53.98±6.65）歲；女23 例，男37 例。病例組60 例，年齡36～76 歲，平均年齡（53.26±6.47）歲；女24 例，男36例；在病理分期方面：Ⅰ期10 例，Ⅱ期12 例，Ⅲ期22 例，Ⅳ期16 例；在分化程度方面：低分化10 例，中分化25 例，高分化25 例；在淋巴結轉移情況方面：有40 例，無20 例。兩組患者的一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05）。所有患者均知情同意參與本研究并簽署知情同意書，且本研究已被赤峰市醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①均符合食管癌的診斷標準[5]；②均為鱗癌；③均經內鏡檢查確診；④均具有正常的語言溝通能力。

排除標準：①有凝血功能障礙者；②合并其他惡性腫瘤者；③有嚴重心腦血管疾病者；④中途退出研究者。

1.3 方法

1.3.1 逆轉錄聚合酶鏈反應（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）

手術將食管癌組織及癌旁組織切取下來并凍存，制備成懸液，依據Trizol 試劑盒一步法將總RNA 提取出來。依據試劑盒要求的條件將cDNA 合成，在PCR 擴增中應用所得逆轉錄產物。PCR 反應條件：在94 ℃、94 ℃、55 ℃、72 ℃溫度下分別預變形、變性、退火、延伸2 min、40 s、40 s、40 s，共36個循環，然后在72 ℃的溫度下延伸7 min。外顯子FHIT、β-actin基因上游引物序列分別為5'-GCCAACATCTCATCAAGCCCT-3'、5'-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3'，下游引物序列分別為5'-TGGGTCGTCTGAAACAAATCG-3'、5'-CTCCTTAAT GTCACGCACGATTTC-3'，擴增片段分別為172 bp、500 bp。

1.3.2 免疫組化

運用SP 免疫組化檢測法，應用免疫組化超敏試劑盒、抗FHIT 多克隆抗體一抗，陽性標準為有棕色顆粒出現在胞質中，陽性細胞所占百分比：無評定為0 分、≤10%評定為1 分、11%～50%評定為2 分、51%～75%評定為3 分、>75%評定為4 分，染色強度：無評定為0 分、淺黃色評定為1 分、淺棕色評定為2 分、深棕色評定為3 分，二者相乘0～1 分、2～3 分、>3 分分別評定為缺失表達、弱表達、正常表達[6]。

1.4 觀察指標

①兩組組織中FHIT 蛋白表達；②兩組組織中FHIT mRNA；③病例組癌組織中FHIT mRNA 與臨床病理參數的相關性。臨床病理參數包括臨床分期、分化程度、淋巴結轉移。

1.5 統計學分析

采用SPSS 20.0 軟件，計數資料用[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗；計量資料以（±s）表示，比較采用t 檢驗。P<0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組組織中FHIT 蛋白表達比較

與對照組正常組織相比，病例組癌組織、癌旁組織中FHIT 蛋白缺失表達率、弱表達率均較高（P<0.05），正常表達率均較低，差異有統計學意義（P<0.05），而與癌旁組織相比，癌組織中FHIT 蛋白缺失表達率較高（P<0.05），弱表達率、正常表達率均較低，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組組織中FHIT 蛋白表達比較 [n（%）]

2.2 兩組組織中FHIT mRNA 比較

與對照組正常組織相比，病例組癌組織、癌旁組織中FHIT mRNA 缺失率均較高，差異有統計學意義（P<0.05），與癌旁組織相比，癌組織中FHIT mRNA 缺失率較高，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2、圖1。

表2 兩組組織中FHIT mRNA 比較 [n（%）]

2.3 病例組癌組織中FHIT 蛋白及mRNA 與臨床病理參數的相關性分析

與Ⅰ期患者相比，病例組Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ期患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率較高，差異有統計學意義（P<0.05）；與高分化患者相比，低分化、中分化患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率均較高，差異有統計學意義（P<0.05）；與無淋巴結轉移患者相比，有淋巴結轉移患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率較高，差異有統計學意義（P<0.05）。見表3。

表3 病例組癌組織中FHIT 蛋白與臨床病理參數的相關性分析 [n（%）]

3 討論

食管癌是食管發生的惡性腫瘤，在不斷侵襲向腔內生長后，就會引起患者吞咽不暢；向腔外生長，會引起周圍的臟器或軟組織受侵襲，然后會播散到全身，出現全身轉移。食管中段癌多與進食含亞硝酸鹽的食物等有關，食管下段癌與胃食管反流有關。治療方法有手術、放療、化療及綜合療法。如能行手術治療，根據情況選擇食管癌切除胃代食管吻合術，食管癌切除結腸代食管吻合術，食管癌切除空腸代食管吻合術。以食管癌切除胃代食管吻合術最為常用，并且效果好，為首選。同時可結合放化療提高切除率和生存率。晚期和不能耐受手術的患者可選擇放化療。

FHIT 是近年新發現的抑癌基因，FHIT 主要通過某種信號途徑誘導細胞凋亡、調控細胞周期、降解促使細胞增殖的二腺苷三磷酸（AP3A），從而抑制腫瘤細胞增殖。FHIT 基因是一種抑癌基因，其編碼的FHIT 蛋白能夠對多磷酸二腺苷進行區域特異性水解，使其向二磷酸腺苷及腺苷酸轉變，參與調控細胞周期、細胞凋亡。有研究表明，在多種腫瘤的發生過程中，FHIT 蛋白廣泛失活與缺失[7-8]。也有研究表明，在消化道腫瘤中，FHIT 基因具有異常的表達[9-10]。食管癌的發生發展和FHIT 蛋白及mRNA 表達下調與缺失關系密切，同時檢測兩種指標能夠為臨床早期診斷食管癌并判定預后提供有效依據[11-12]。本研究結果表明，與對照組正常組織相比，病例組癌組織、癌旁組織中FHIT 蛋白缺失表達率、弱表達率均較高，正常表達率均較低，差異有統計學意義（P<0.05），而與癌旁組織相比，癌組織中FHIT 蛋白缺失表達率較高，弱表達率、正常表達率均較低，差異有統計學意義（P<0.05）。與對照組正常組織相比，病例組癌組織、癌旁組織中FHIT mRNA缺失率均較高，差異有統計學意義（P<0.05），與癌旁組織相比，癌組織中FHIT mRNA 缺失率較高，差異有統計學意義（P<0.05），說明癌組織中FHIT 蛋白及mRNA 表達隨著癌前細胞轉化為癌細胞而逐漸降低，因此組織學上正常組織在缺失FHIT 基因表達的情況下可能有癌變存在，早期診斷價值較高。同時，在食管癌的發生發展過程中，FHIT 基因的抑癌基因功能可能會在其缺失或減弱的情況下降低，從而促進食管癌易感性的增加。

本研究結果還表明，與Ⅰ期患者相比，病例組Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ期患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率較高，差異有統計學意義（P<0.05）；與高分化患者相比，低分化、中分化患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率均較高，差異有統計學意義（P<0.05）；與無淋巴結轉移患者相比，有淋巴結轉移患者的FHIT 蛋白缺失率及mRNA 缺失率較高，差異有統計學意義（P<0.05），說明FHIT 基因的陽性表達和食管癌癌組織臨床分期、分化程度、淋巴結轉移關系密切。現階段，早期診斷仍然是提高食管癌患者5年生存率的重要手段，尋找出一種具有較高靈敏度與特異度的診斷方法是早期診斷的關鍵，而檢測各種異常基因給臨床提供了新的思路[13-14]。有學者對血漿中FHIT 基因的甲基化進行了檢測，結果表明，血漿中FHIT 基因在腫瘤中甲基化，如果腫瘤患者的腫瘤長徑在2 cm 以下、病理分級為Ⅰ級，那么其就具有異常的血漿DNA FHIT 基因，認為在早期診斷食管癌的過程中，檢測血液中DNA FHIT 基因較為有效[15-16]。有學者采用高效熒光檢測技術開發出對FHIT DNA 及蛋白表達進行同時檢測的多功能生物芯片，其具有直接性、選擇性、靈敏性等優勢[17-18]。近年來，醫學界逐漸確定了食管癌的發生發展與基因異常的關系，目前已經開始探索對食管癌治療中基因異常的若干試驗性治療方法[19-20]。

綜上所述，食管癌組織中FHIT 蛋白及mRNA 的缺失表達率提升，能夠為臨床診斷與治療及預后判斷提供有效依據。