雙歧桿菌聯合干擾素對病毒性腹瀉患兒中性粒細胞及心肌酶譜的影響

翟豪強，沈德新

(中國人民解放軍聯勤保障部隊第九八八醫院小兒科，河南 鄭州 450000)

病毒性腹瀉主要通過糞-口傳播，好發于0.5～2.0歲小兒，輪狀病毒是其發生主要病原體，發生率約占20.0%～70.0%，若未予以及時有效干預，患兒常因水分不足或體內大量酮體生成，出現程度不一的脫水酸中毒現象，從而引起心肌損傷，增加心肌炎發生風險[1-3]。病毒性腹瀉發病機制較為復雜，相關研究認為，機體感染輪狀病毒后，可激活體內炎性反應，釋放大量炎性因子，而中性粒細胞桿狀核、分葉核表達升高有助于評估炎性反應、判斷感染程度及病情進展[4]。目前，臨床上針對病毒性腹瀉患兒主要采用補液、糾正水電解質紊亂或酸堿失衡等常規治療，但其難以有效緩解腸道菌群紊亂，改善營養吸收。雙歧桿菌三聯活菌中富含長型雙歧桿菌、糞腸球菌、嗜酸乳桿菌等益生菌，有助于糾正腸道菌群紊亂，降低內毒素含量，減輕腹瀉癥狀[5-6]。注射用重組人干擾素α-1b具有高效、廣譜抗病毒活性，可刺激抗病毒蛋白基因，抑制病毒蛋白復制[7]，然而關于其與雙歧桿菌三聯活菌聯合對患兒中性粒細胞桿狀核、分葉核的影響臨床尚未完全明確，有待進一步深入研究?；诖耍狙芯繃L試分析雙歧桿菌三聯活菌聯合注射用重組人干擾素α-1b對病毒性腹瀉患兒中性粒細胞桿狀核、分葉核的影響,現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性收集2019年4月至2021年12月本院93例病毒性腹瀉患兒作為研究對象，均符合《諸福棠實用兒科學》[8]中病毒性腹瀉診斷標準；大便表現為黃稀水樣或蛋花湯樣；酶聯免疫吸附試驗測定糞便輪狀病毒抗原呈陽性；排除大便呈黏液膿血便或大便常規白細胞、紅細胞分別超過5個/HP者；伴有細菌性痢疾或霍亂等疾病者；存在重組人干擾素α-1b藥物過敏史者；近12周內有微生態制劑或抗菌藥物治療史者；監護人精神行為異常。兩組基線資料(年齡、病程、性別、腹瀉次數、脫水程度)均衡可比(P>0.05)，見表1。本研究經本院倫理委員會審核評議并通過。

表1 兩組基線資料比較

1.2方法 兩組均予以糾正機體水電解質、酸堿失衡、口服或靜脈補液、營養支持等常規治療。在此基礎上，對照組將雙歧桿菌三聯活菌(上海上藥信誼藥廠有限公司，國藥準字：S10950032)溶于溫水或溫牛奶中送服，每次210 mg，2次/天。觀察組在對照組基礎上肌肉注射重組人干擾素α-1b(深圳科興藥業有限公司，國藥準字：S10960059)，每天注射1次1 μg/kg。兩組均持續治療3 d。

1.3觀察指標 (1)臨床療效。評價標準：治療3 d內，全身癥狀消退，大便性狀、次數恢復正常為顯效；治療3 d內，全身癥狀顯著緩解，大便性狀、次數有所控制為有效；治療3 d內，未達到顯效、有效標準為無效?？傆行?(顯效+有效)/總例數×100%。(2)癥狀緩解時間，包括止嘔、止瀉及退熱時間。(3)中性粒細胞桿狀核、分葉核、炎性因子、心肌酶譜、免疫功能。檢測方法：分別于治療前、治療1、3 d后清晨空腹取外周靜脈血9 mL，均分為3份：①取其中一份根據艾康生物技術(杭州)有限公司提供的HA-360型全自動血細胞分析儀說明書測定中性粒細胞桿狀核、分葉核；②再取其中一份，抗凝處理，根據美國BD公司提供的Accuri C6型流式細胞儀測定CD4+、CD8+水平；③另一份常規離心處理(3 000 r/min離心12 min)，取上清液，-80 ℃低溫保存待檢。根據上海酶聯生物科技有限公司提供的酶聯免疫吸附試驗試劑盒說明書檢測白細胞介素(IL)-6、IL-8、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平；根據上海玉蘭生物技術有限公司提供的酶法試劑盒說明書檢測肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、羥丁酸脫氫酶(HBDH)、乳酸脫氫酶(LDH)水平。

2 結 果

2.1臨床療效 觀察組治療總有效率95.74%，高于對照組(80.43%)，差異有統計學意義(χ2=5.225，P<0.05)，見表2。

表2 兩組臨床療效對比[n(%)]

2.2癥狀緩解時間 觀察組的止嘔、止瀉及退熱時間均短于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組癥狀緩解時間對比

2.3中性粒細胞桿狀核、分葉核 治療1、3 d后，兩組中性粒細胞桿狀核、分葉核計數均較治療前明顯下降，且觀察組下降幅度大于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 兩組中性粒細胞桿狀核、分葉核對比

2.4血清炎性因子 治療1、3 d后，兩組血清炎性因子IL-6、IL-8及TNF-α水平均較治療前明顯下降，且觀察組下降幅度大于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表5。

表5 兩組血清炎性因子水平對比

續表5 兩組血清炎性因子水平對比

2.5血清心肌酶譜 治療1、3 d后，兩組血清心肌酶譜CK、CK-MB、LDH及HBDH水平均較治療前明顯下降，且觀察組下降幅度大于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表6。

表6 兩組血清心肌酶譜水平對比

組別nLDH治療前治療1 d后治療3 d后HBDH治療前治療1 d后治療3 d后觀察組47175.41±23.16157.36±12.12a148.32±7.62a183.41±15.82149.63±10.37a132.58±8.41a對照組46173.69±25.38165.24±13.47a155.83±8.41a180.69±13.24159.73±11.28a141.26±10.29at-0.3422.9674.5150.9044.4974.459P-0.7340.004<0.0010.368<0.001<0.001

2.6免疫功能 治療1、3 d后，兩組CD4+、CD4+/CD8+水平均較治療前明顯升高，CD8+水平較治療前明顯下降，且觀察組下降及升高幅度均大于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表7。

表7 兩組免疫功能指標水平對比

組別nCD4+/CD8+治療前治療1 d后治療3 d后觀察組470.96±0.101.23±0.15a1.43±0.22a對照組460.99±0.121.10±0.14a1.23±0.19at-1.3114.3194.688P-0.193<0.001<0.001

3 討 論

雙歧桿菌三聯活菌可為機體補充有益生菌，發揮良好抗病毒作用，修復受損腸道黏膜[9-10]，但單獨服用存在起效慢、治療時間長等不足，需與其他藥物聯合以增強治療效果，縮短治療時間。本研究針對病毒性腹瀉患兒采用雙歧桿菌三聯活菌聯合重組人干擾素α-1b治療，結果顯示，二者聯合能有效緩解腹瀉癥狀，且其總有效率高達95.74%，考慮機制可能在于重組人干擾素α-1b不僅可結合細胞表面受體，促進大量細胞抗病毒蛋白產生，從而抑制細胞內病毒合成，還能通過抑制胃腸激素分泌，加快腸內氯離子、鈉離子吸收，減輕腸腔滲透壓，進而產生良好止瀉作用，加快癥狀改善速度[11]；雙歧桿菌三聯活菌可提高腸道防御屏障功能，降低腸道pH值，抑制病原菌定植與入侵，兩者聯合可從不同作用機制方面發揮抗病毒作用，維持患兒胃腸道生態平衡，進而修復患兒受損腸道功能。

同時，多項研究證實，腸道炎性反應是輪狀病毒性腹瀉主要病理變化，TNF-α作為炎性反應的啟動因子，可誘導IL-10等促炎因子釋放，加劇腸黏膜炎性損傷[12-14]。IL-6主要由T淋巴細胞、單核吞噬細胞分泌、合成，其表達在輪狀病毒感染性腹瀉患兒中異常升高，可調控體液免疫與炎性反應[15]。IL-8作為機體重要趨化因子，可刺激中性粒細胞，激活機體局部炎性反應，郝雯穎等[16]認為，其與輪狀病毒腸炎患兒病情程度呈正相關，可為評估患兒病情提供有效依據。中性粒細胞桿狀核、分葉核兩者比值與超敏C反應蛋白、IL-6均存在正相關性，可表現炎性反應程度[17]。既往臨床多側重于癥狀改善，本研究創新性對患兒中性粒細胞桿狀核、分葉核及炎性因子水平進行分析，發現雙歧桿菌三聯活菌聯合重組人干擾素α-1b在調節病毒性腹瀉患兒炎性反應方面具有一定積極效應，這可能歸因于重組人干擾素α-1b可提高靶細胞表面主要組織相容性復合物表達，幫助淋巴細胞完成抗原提呈過程，激活巨噬細胞、殺傷細胞，抑制炎性因子生成，與雙歧桿菌三聯活菌聯合，可抑制輪狀病毒對黏膜上皮細胞的黏附、侵襲，阻斷炎癥信號傳導，從而產生良好抗炎作用。

另有學者指出，隨著輪狀病毒性腹瀉患兒脫水程度增加，氧自由基不斷釋放，在一定程度上可誘發脂質過氧化反應，引起心肌細胞損傷[18-19]。CK、CK-MB、LDH及HBDH均是臨床評估心肌損傷程度的特異指標，余萬輝等[20]研究認為，上述指標在輪狀病毒性腹瀉患兒中呈高表達，對指導小兒輪狀病毒腹瀉的早期診治具有較好應用價值。本研究指出，雙歧桿菌三聯活菌聯合重組人干擾素α-1b在降低病毒性腹瀉患兒心肌酶譜水平方面優于雙歧桿菌三聯活菌單獨服用，這可能是由于二者聯合可強化抗病毒作用，有助于調節腸道水電解質平衡，提高小腸黏膜能力，減少水鈉潴留，防止腸腔內大量腸液聚集，從而緩解心肌損害。此外，由于小兒免疫系統尚未達到成人水平，再加上輪狀病毒可直接附著于小腸表面，影響小腸絨毛功能，破壞腸絨毛完整性與連續性，降低機體免疫蛋白水平，從而導致患兒免疫功能紊亂，癥狀改善時間延長[21-22]。T淋巴細胞亞群是評價機體免疫狀態的重要指標。本研究對治療前后免疫功能指標變化進行分析，兩組治療1、3 d后CD4+、CD4+/CD8+水平均較治療前升高，CD8+水平較治療前降低，提示雙歧桿菌三聯活菌能改善病毒性腹瀉患兒免疫功能。進一步分析兩組治療后免疫功能指標差異可知，治療1、3 d后觀察組CD4+、CD4+/CD8+水平高于對照組，CD8+水平低于對照組。這一結果說明在雙歧桿菌三聯活菌治療的同時加用重組人干擾素α-1b更能改善病毒性腹瀉患兒免疫功能，這可能與重組人干擾素α-1b對免疫功能具有調節作用，可激活各種免疫細胞，提高自然殺傷細胞活性，誘導淋巴細胞增殖反應，促進免疫蛋白合成，進而增強機體免疫系統防御功能，清除機體病毒感染細胞有關。

綜上所述，雙歧桿菌三聯活菌聯合注射用重組人干擾素α-1b通過降低心肌酶譜水平、調節免疫炎性反應可有助于增強治療效果，縮短病毒性腹瀉患兒癥狀改善時間。但本研究為回顧性分析，數據結果可能存在一定偏移，今后需進行大樣本量前瞻性研究，進一步論證結果可靠性。