p73基因rs6695978位點基因型與卵巢癌病理特征和預后的相關(guān)性分析

袁 淼，蘇 琦，劉竹君

西北婦女兒童醫(yī)院：1.婦三科；2.藥劑科，陜西西安 710061

卵巢癌臨床病理分型多樣，且不同臨床病理分型患者在治療、遺傳變異、分子機制方面均存在明顯差異[1]，使卵巢癌的治療難度加大，也是其病死率居婦科惡性腫瘤首位的重要原因。卵巢癌位于盆腔深部，解剖結(jié)構(gòu)復雜，與內(nèi)分泌和胚胎發(fā)育功能密切相關(guān)，且惡性程度較高，預后較差[2]。另外，卵巢癌早期癥狀缺乏特異性，被確診時多數(shù)已處于中晚期，并且復發(fā)率超過50%[3]。長期以來，卵巢癌的診斷和治療備受臨床關(guān)注。目前，臨床對卵巢癌發(fā)病機制的認識已深入基因分子領(lǐng)域，靶向治療也逐漸在臨床推廣。易感基因在卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。p73基因定位于1p36.33，與p53基因具有高度同源性。安錦丹等[4]研究結(jié)果顯示，p73基因在卵巢癌組織中呈明顯高表達，提示p73基因可能與卵巢癌的病理進展相關(guān)。但目前有關(guān)p73基因多態(tài)性與卵巢癌病理特征相關(guān)性的研究較少。有研究顯示，p73基因rs6695978位點存在富集化現(xiàn)象，可能成為卵巢癌的誘發(fā)因素，參與疾病的進展[5]。為進一步證實上述觀點，為今后臨床治療新藥的開發(fā)提供依據(jù)，本研究觀察了76例卵巢癌患者p73基因型分布情況，并分析其臨床價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年10月至2021年5月本院收治的76例卵巢癌患者作為研究對象，年齡(51.68±14.47)歲；體質(zhì)量指數(shù)(20.72±2.42)kg/m2；腫瘤最大徑(4.18±0.94)cm；病理分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期15例，Ⅲ期19例，Ⅳ期26例；分化程度：高分化21例，中分化31例，低分化24例。本研究經(jīng)本院倫理委員會審批通過，所有研究對象均知情同意并簽署知情同意書。

1.2納入和排除標準

1.2.1納入標準 (1)均經(jīng)組織病理活檢證實為卵巢癌[6]；(2)均為首次確診，既往未行任何抗腫瘤治療；(3)患者臨床病例資料完整。

1.2.2排除標準 (1)復發(fā)性腫瘤患者或合并有其他原發(fā)性惡性腫瘤的患者；(2)合并有嚴重心、肺基礎(chǔ)疾病或肝、腎功能不全的患者。

1.3研究方法 所有研究對象均在清晨空腹抽取肘靜脈血3.0 mL，采用氯化鈉鹽析法提取DNA，以聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)-限制性片段長度多態(tài)性對p73基因rs6695978位點進行基因分型。引物設(shè)計上游：5′-TTCCCACGGGCAAGCAGATG-3′，下游：5′-CAAAGGCACACTGGCTGCTG-3′，擴增片段長度116 bp。PCR反應(yīng)體系：Taq PCR Master Mix 12.5 μL，模板DNA 7.5 μL，上、下游引物各1.0 μL，加水至25.0 μL。反應(yīng)條件：95 ℃預變性5 min、95 ℃變性30 s、退火60 ℃ 30 s、延遲72 ℃ 30 s。

1.4觀察指標 患者出院后進行隨訪，記錄76例患者總生存率，以失訪或死亡為隨訪終點。比較不同基因型患者臨床特征指標水平和總生存率，分析影響患者p73基因rs6695978位點基因型分布的相關(guān)因素。

2 結(jié) 果

2.1不同基因型患者臨床特征比較 76例卵巢癌患者中p73基因rs6695978位點GG基因型32例，GA基因型36例，AA基因型8例。經(jīng)Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗，76例入組卵巢癌患者p73基因rs6695978位點基因型分布符合遺傳平衡定律(χ2=1.278，P=0.612)，提示入組患者具有群體代表性。不同基因型患者腫瘤最大徑、腫瘤分期、分化程度比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同基因型患者臨床特征指標比較或n)

組別n病理組織分型漿液型黏液型其他家族史有無初診卡氏評分≥60分<60分GG322561824239GA362952531279AA85301762F/χ22.8671.6000.093P0.5800.4490.954

2.2影響腫瘤基因型分布的相關(guān)因素分析 以卵巢癌患者p73基因rs6695978位點基因型作為因變量，以腫瘤最大徑、腫瘤分期及分化程度作為自變量進行多元逐步回歸分析，結(jié)果顯示，卵巢癌患者p73基因rs6695978位點基因型分布與腫瘤分期和分化程度均有關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 卵巢癌患者p73基因rs6695978位點基因型分布的影響因素分析

2.3不同p73基因rs6695978位點基因型卵巢癌患者總生存率比較 根據(jù)p73基因rs6695978位點基因型是否攜帶A等位基因?qū)⒒颊叻譃镚G組(GG基因型，n=32)和GA+AA組(GA基因型+AA基因型，n=44)，GG組中位隨訪時間27.56個月，死亡10例，存活22例，生存率為68.75%，GA+AA組中位隨訪時間28.01個月，死亡24例，存活20例，生存率為45.45%，兩組患者生存率比較，差異有統(tǒng)計學意義(Log-Rankχ2=4.007，P=0.045)。見圖1。

圖1 不同p73基因rs6695978位點基因型卵巢癌患者總生存率比較

3 討 論

卵巢癌早期檢出率較低，化療是卵巢癌重要的治療方法，近年來隨著研究的深入，分子靶向治療備受關(guān)注。探討卵巢癌的分子基因機制有助于臨床新藥的開發(fā)，提高治療效果。p73基因由13個內(nèi)含子和14個外顯子構(gòu)成，與p53具有高度同源性。有研究顯示，在C末端的SAM區(qū)域，p73基因可發(fā)揮調(diào)節(jié)細胞生長的作用[7]。ZHANG等[8]研究顯示，p73基因可通過激活Fas/Apol和Bax途徑，阻斷腫瘤細胞生長，誘導腫瘤細胞凋亡，進而達到抗腫瘤的目的；陳燕等[9]研究認為，p73基因陽性表達可增強卵巢上皮細胞癌細胞的侵襲增殖能力。p73基因單核苷酸多態(tài)性具有廣泛而穩(wěn)定的遺傳特征，有研究顯示，p73基因rs6695978位點存在富集現(xiàn)象，這可能成為癌變的誘發(fā)因素[10]。但目前有關(guān)卵巢癌p73基因rs6695978位點基因型分布與腫瘤病理特征和預后關(guān)系的報道較為少見。

microRNA基因芯片將生物信息學、生物遺傳學及分子生物學融為一體，能實現(xiàn)對基因序列和功能的高通量研究[11]，這將為腫瘤分子基因機制的研究提供新思路。單核苷酸多態(tài)性可改變microRNAs，進而影響腫瘤的發(fā)生。人類基因組關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，與卵巢癌發(fā)生轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因包括MTA1、Ras、CD44、E-Cadherin、KAI1、MHC、KISS-1、BRMS1、HER-2、p16、p53、p73、MSH1及Bax等[12-13]，其中p73基因rs6695978位點在卵巢癌病理進展中均有表達，影響腫瘤生長[14]。本研究Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗顯示，入組患者具有群體代表性。多元逐步回歸分析結(jié)果顯示，p73基因rs6695978位點基因型分布與腫瘤分期和分化程度均密切相關(guān)，提示p73基因rs6695978位點T→A突變可能增加腫瘤的惡性程度，促進腫瘤生長。因而，本研究進一步比較不同基因型患者的預后，結(jié)果顯示，攜帶A等位基因的卵巢癌患者預后更差，說明p73基因rs6695978位點基因型分布與卵巢癌惡性程度相關(guān)，進而影響患者預后。

卵巢癌具有遺傳異質(zhì)性的特點，且卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展受多基因、多因素交互作用的影響[15]。本研究僅分析了p73基因rs6695978一個多態(tài)性位點在卵巢癌中的作用，具有一定的局限性，今后應(yīng)采用表觀遺傳學、生物信息學方法進一步分析不同基因單核苷酸多態(tài)性位點基因型分布的特點及其相互作用，以探討其在卵巢癌發(fā)病中的作用機制。

綜上所述，p73基因rs6695978位點基因型分布與卵巢癌病理分期和分化程度均相關(guān)，并且可影響卵巢癌患者的預后，為今后卵巢癌發(fā)病機制的研究提供了新方向。