B族鏈球菌血清型分布情況及耐藥性分析*

賈麗娜，趙 麗，陳國棟，蔣冬香

桂林醫學院附屬醫院檢驗科，廣西桂林 541001

B族鏈球菌(GBS)又稱無乳鏈球菌，是一種條件致病菌。莢膜多糖是GBS的保護性抗原，根據莢膜抗原性將GBS分為Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅸ 10種血清型，但是GBS流行血清型的分布有一定區域差異。在發達國家，GBS是圍生期孕婦感染的主要致病菌，GBS感染已成為導致圍生兒間接死亡的主要原因之一[1]。美國疾病預防控制中心于2010年推出的《圍生期GBS疾病預防指南》[2]中明確指出，對于孕35～37周孕婦應普遍進行陰道下1/3直腸GBS定植篩查。近年來，我國不斷有研究發現，對于圍生期孕婦而言，GBS與圍生期孕婦不良妊娠結局存在密切關系[3-4]。如今國家“三孩”政策已實施，為降低圍生期孕婦感染GBS及不良母嬰結局，臨床上應加大對孕晚期孕婦GBS感染的篩查力度，對可能出現的母嬰感染應及時進行預防性治療，改善不良妊娠結局。本研究對桂林地區圍生期孕婦GBS感染的血清型分布情況及耐藥性進行分析，為臨床預防和治療GBS感染提供參考依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年7月至2020年12月在本院常規產前檢查、住院分娩且臨床資料完整的1 294例孕晚期孕婦陰道分泌物拭子培養出的75株GBS作為研究對象。納入標準：年齡20～35歲；未合并妊娠期并發癥(糖尿病、高血壓、甲狀腺功能減退癥等)；標本采集前1周孕婦未使用抗菌藥物。排除標準：雙胎妊娠；滴蟲、真菌、支原體等其他生殖道感染；肝、腎、心、腦等慢性疾病患者；精神疾病患者。所有研究對象均知情同意并簽署知情同意書。本研究經本院醫學倫理委員會審批通過，審批號：2019WJWZCLL-6。

1.2儀器與試劑 VITEK MS質譜儀、VITEK2 Compact全自動微生物分析系統及配套AST-GP67藥敏卡均購自法國生物梅里埃股份有限公司；生物安全柜購自濟南鑫貝生物技術有限公司；哥倫比亞血瓊脂平板購自杭州天和微生物試劑有限公司；血清分型試劑購自丹麥血清研究所；革蘭染色試劑盒購自四川省邁克科技有限責任公司；普通顯微鏡。大腸埃希菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923及銅綠假單胞菌ATCC27853用于藥敏試驗質量控制，購自原衛生部臨床檢驗中心。

1.3方法

1.3.1標本采集 由經過專業培訓的產科醫生采集標本，使用一次性無菌棉簽拭子在受檢孕婦陰道下1/3處旋轉1周，將采集好的拭子放入無菌試管立即送檢。

1.3.2細菌培養 陰道分泌物拭子采用分區劃線法接種于哥倫比亞血瓊脂平板，于恒溫培養箱培養18～24 h后觀察血平板上菌落的特點，挑取灰白色、圓形、半透明、中等大小、β溶血的可疑菌落涂片、革蘭染色，GBS鏡檢為革蘭陽性、成對或短鏈狀排列的球菌。

1.3.3GBS鑒定、藥敏試驗及血清型分型 按照《全國臨床檢驗操作規程》第4版[5]進行GBS培養分離鑒定及藥敏試驗。對疑似菌落采用VITEK MS質譜儀快速鑒定，鑒定為GBS的采用VITEK2 Compact全自動微生物分析系統及配套AST-GP67藥敏卡進行藥敏試驗；血清型分型采用特異性乳膠凝集分型試劑盒，不與任何一種抗血清反應的菌株歸為血清學不能分型菌株。

1.4統計學處理 采用SPSS19.0統計軟件進行數據分析處理。計數資料以例數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.175株GBS的血清型分布 75株GBS共檢出3種血清型，以Ⅲ型31株(41.33%)為主，其次是Ⅰa型24株(32.00%)和Ⅰb型20株(26.67%)。

2.275株GBS的藥敏試驗結果 75株GBS對青霉素、萬古霉素、替加環素、利奈唑胺、氨芐西林、頭孢唑啉、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟及奎奴普丁/達福普汀的耐藥率均為0.00%，對克林霉素、四環素、左氧氟沙星、莫西沙星和呋喃妥因的耐藥率分別為100.00%、81.33%、34.67%、33.33%、17.33%，見表1。

表1 75株GBS的藥敏試驗結果[n(%)]

2.33種血清型GBS對4種抗菌藥物的耐藥率比較 3種血清型GBS對左氧氟沙星和莫西沙星的耐藥率比較，差異均有統計學意義(P<0.05)，Ⅲ型耐藥率最高；3種血清型GBS對四環素和呋喃妥因的耐藥率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 3種血清型GBS對4種抗菌藥物的耐藥率比較[n(%)]

3 討 論

GBS是一種革蘭陽性β溶血鏈球菌，需氧，圓形或卵圓形，成對或鏈狀排列，在哥倫比亞血瓊脂平板上35 ℃培養18～24 h后形成直徑為0.5～1.0 mm，呈灰白色、扁平、半透明或不透明、表面光滑、較濕潤的菌落，但β溶血環窄小，有11%的GBS不出現溶血，少數菌株可出現寬大的β溶血環。GBS氧化酶陰性，觸酶陰性，對萬古霉素敏感，6.5%NaCl試驗不生長，膽汁七葉苷不生長，桿菌肽耐藥，環磷酸腺苷試驗陽性，馬尿酸鹽水解試驗陽性，吡咯烷酮酶試驗陰性，從而可與鏈球菌屬其他臨床重要鏈球菌相鑒別。GBS表面結構復雜，包括覆蓋在表面的莢膜多糖、內層的肽聚糖結構和細胞膜。GBS的毒性和侵襲力主要來自其莢膜結構及其產生的透明質酸酶，GBS產生的其他酶和致病毒素包括M蛋白、鏈激酶、鏈道酶和溶血素等。孕婦圍生期GBS篩查及分娩期抗菌藥物的預防使用是目前降低GBS感染最有效的策略。因此，本研究對桂林地區圍生期孕婦GBS感染的血清型分布情況及耐藥性進行分析，為臨床預防和治療GBS感染提供重要依據。

本研究結果顯示，桂林地區圍生期孕婦感染GBS的血清型以Ⅲ型[31株(41.33%)]為主，其次是Ⅰa型[24株(32.00%)]和Ⅰb型[20株(26.67%)]。唐山地區[6]流行的血清型以Ⅲ型(33.70%)為主，其次是Ⅰb型(32.70%)和Ⅴ型(18.20%)；江西中部地區[7]主要以Ⅰb型(35.10%)和Ⅲ型(26.60%)為主，其次是Ⅰa型(23.40%)；武漢地區[8]以Ⅰb型(35.56%)、Ⅰa型(26.67%)和Ⅲ型(20.00%)為主；廈門地區[9]以Ⅲ型(59.00%)、Ⅰa型(15.70%)和Ⅰb型(14.50%)為主。國外有研究表明，Ⅲ、Ⅰa、Ⅴ型是GBS感染最普遍的血清型[10]，本研究與國內外其他地區的研究存在差異，可見GBS血清型分布有一定的區域性差異，但是各地區引起流行的GBS血清型分布又基本一致，主要為Ⅰa、Ⅰb、Ⅲ和Ⅴ 4種。

本研究75株GBS對青霉素、萬古霉素、替加環素、利奈唑胺、氨芐西林、頭孢唑啉、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟及奎奴普丁/達福普汀的耐藥率均為0.00%，對克林霉素、四環素、左氧氟沙星、莫西沙星、呋喃妥因的耐藥率分別為100.00%、81.33%、34.67%、33.33%、17.33%。唐山地區姚玲等[6]報道，110株GBS對哌拉西林、頭孢噻肟、利奈唑胺、莫西沙星、青霉素、氨芐西林、萬古霉素全部敏感，對克林霉素、左氧氟沙星、四環素的耐藥率分別為71.80%、64.50%、52.70%；西安地區王林等[11]報道，GBS對萬古霉素、利奈唑胺、替加環素、頭孢吡肟、頭孢曲松、氨芐西林、青霉素的敏感率均為100.00%，對四環素、克林霉素、左氧氟沙星的敏感率分別為82.05%、50.00%、50.00%；青島地區宋海燕等[12]報道，GBS對青霉素、氨芐青霉素、利奈唑胺、萬古霉素均敏感，對克林霉素、左氧氟沙星的耐藥率分別為75.90%、74.10%。由此可見，本研究GBS耐藥情況與大多數報道一致，即GBS對青霉素類、頭孢菌素類、糖肽類等抗菌藥物均敏感，未發現對青霉素耐藥的菌株，但GBS對克林霉素、四環素和左氧氟沙星均有不同程度的耐藥。本研究GBS對克林霉素的耐藥率為100.00%，略高于柳州地區陳燕群等[13]報道的克林霉素的耐藥率(96.90%)，但遠遠高于全國其他地區，如西安地區王林等[11]報道的50.00%，青島地區宋海燕等[12]報道的75.90%，東莞地區張麗華等[14]報道的62.10%。本研究GBS對四環素的耐藥率(81.33%)與其他地區基本持平，新鄉地區晁利娜等[15]報道的GBS對四環素的耐藥率為86.73%，武漢地區蔣雯等[8]報道的為86.67%，東莞地區張麗華等[14]報道的為86.50%。本研究GBS對左氧氟沙星的耐藥率為34.67%，低于唐山地區姚玲等[6]報道的64.50%和青島地區宋海燕等[12]報道的74.10%，高于柳州地區陳燕群等[13]報道的32.90%。

本研究結果顯示，3種血清型GBS對左氧氟沙星和莫西沙星的耐藥率比較，差異均有統計學意義(P<0.05)，Ⅲ型耐藥率最高；3種血清型GBS對四環素和呋喃妥因的耐藥率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。王林等[11]報道顯示，GBS耐藥菌株在Ⅲ型、Ⅰb型和Ⅴ型分離菌株中廣泛流行。據文獻報道，GBS耐藥性與其血清型、耐藥基因型等因素密切相關[16]。隨著抗菌藥物的使用，臨床分離GBS的耐藥率呈不斷上升趨勢。彭捷等[17]報道顯示，GBS的5年耐藥率總體呈逐年上升趨勢。GBS對抗菌藥物的耐藥率各地均不相同，GBS血清型分布也有一定的區域性差異。因此，分析桂林地區GBS對常用抗菌藥物的耐藥性能為臨床提供有效的預防和診治依據。

桂林地區圍生期孕婦感染GBS的血清型以Ⅲ型為主，其次是Ⅰa型和Ⅰb型；GBS對克林霉素和四環素耐藥率均較高，GBS感染應首選青霉素治療，對青霉素過敏者可選用萬古霉素。不同地區GBS的血清型分布及耐藥性均存在差異。為預防和控制桂林地區圍生期孕婦GBS感染的發展，臨床應根據藥敏試驗結果合理使用抗菌藥物進行治療，并密切關注其耐藥性變遷，降低圍生期孕婦GBS感染的風險，保障良好的妊娠結局。