新生兒胃液與咽拭子標本11種病原體核酸檢測結果一致性研究*

李 寧，王曉帥，譚寶瑩，左雪梅，劉郴州，△

(1.廣東醫科大學，廣東 湛江 524000；2.江門市中心醫院兒科ICU，廣東 江門 529030)

新生兒感染病原體有細菌、真菌、病毒、支原體、衣原體、螺旋體、原蟲等[1]。目前，病原體常規檢測方法有病原體分離、核酸檢測、抗原檢測、血清學抗體檢測、培養等，同時進行多個單種病原體常規檢測存在價格昂貴、操作煩瑣、耗時長且可能存在漏診等問題。圍產期母嬰病原體核酸懸浮微珠液相芯片檢測技術是將靶序列富集多重聚合酶鏈反應[2-3]和Luminex液相芯片[4]技術相結合建立的一種可在單個反應體系中同時檢測圍產期新生兒感染的11種病原體[包括沙眼衣原體(CT)、微小脲原體(UP)、大腸埃希菌(EC)、解脲脲原體(UU)、淋球菌(NG)、人類皰疹病毒(EB)、B族鏈球菌(GBS)、巨細胞病毒(CMV)、生殖道支原體(MG)、腸道病毒(EnV)、人型支原體(MH)]的快速分子檢測方法，從理論上來講，其可作為可靠、快速、高通量的新生兒感染早期診斷方法，為新生兒感染的早期干預提供了依據。新檢測技術的成功推廣涉及多個環節[5]，其中檢測標本的選擇對檢測技術的推廣應用具有重要意義。剛出生的可疑感染新生兒常規病原體檢測可選擇胃液標本，圍產期母嬰病原體核酸懸浮微珠液相芯片檢測技術是否可選擇更加簡單、易行的咽拭子標本替代、2種標本檢測結果是否一致目前尚鮮見文獻報道。本研究選取120例剛出生可疑感染新生兒作為研究對象，采集出生后3 h內胃液和咽拭子標本，通過圍產期母嬰病原體核酸檢測懸浮微珠液相芯片完成11種病原體檢測，評價檢測結果是否一致，現報道如下。

1 資料與方法

1.1資料

1.1.1一般資料 選取2021年2—6月廣東省江門市中心醫院兒科重癥監護病房收治的可疑感染新生兒120例作為研究對象，其中男61例，女59例；出生胎齡25～42周。本研究獲廣東省江門市中心醫院倫理委員會審批。

1.1.2納入標準 (1)廣東省江門市中心醫院兒科重癥監護病房住院的可疑感染新生兒；(2)出生3 h內；(3)對本研究知情同意并簽署同意書。

1.1.3排除標準 (1)出生后已進行喂養者；(2)出生后已進行洗胃者。

1.2方法

1.2.1標本采集 先采集咽拭子標本，然后采集胃液標本。

1.2.1.1咽拭子標本采集 無菌操作采集標本。新生兒出生后3 h內采集咽拭子標本。將拭子送入新生兒口腔深部、咽喉部，輕柔快速擦拭兩側腭弓、咽部，反復擦拭3次及以上，將采集好的拭子頭垂直插入分子轉運介質(MTM)保存液試管中，4 ℃保存備用。

1.2.1.2胃液標本采集 無菌操作采集標本。新生兒出生后3 h內入室后采集胃液標本。患兒取仰臥位，經口緩慢插入胃管經咽部至預期深度，用注射器回抽胃管確認胃管在胃內后留取胃液標本2 mL至MTM保存液試管中，4 ℃保存備用。

1.2.2標本保存及檢測 采集胃液及咽拭子標本保存至MTM保存液中。MTM保存液主要組成成分為Hank′s平衡鹽、苯酚紅、慶大霉素、多黏菌素B、胍鹽、冷凍保護劑等。采集獲得標本送廣東輝錦創興生物醫學科技有限公司，使用圍產期母嬰病原體核酸檢測懸浮微珠液相芯片試劑檢測11種病原體。

1.2.3觀察指標 (1)分析胃液和咽拭子標本中11種病原體檢出率的差異。(2)分析胃液和咽拭子標本中11種病原體檢測結果的一致性。

1.2.4結果判讀 胃液和咽拭子標本檢測結果中有病原體檢出為陽性結果，無病原體檢出為陰性結果。咽拭子標本檢測結果以胃液標本檢測結果作為對照，胃液標本結果為陽性，同一新生兒咽拭子標本有病原體檢出，且病原體分類與其胃液檢出結果一致結果判讀為陽性，否則為陰性；胃液標本結果為陰性，同一新生兒咽拭子標本有病原體檢出結果判讀為陽性，否則為陰性。

1.3統計學處理 應用SPSS22.0統計軟件進行數據分析，計數資料以率或構成比表示，采用χ2檢驗。P<0.05表示差異有統計學意義。采用Kappa檢驗比較胃液和咽拭子標本11種病原體核酸檢測結果的一致性。Kappa值評價標準[6-7]：Kappa<0.20一致性極低，0.20～<0.40一致性一般，0.40～<0.60中度一致性，0.60～<0.80較高度一致性，Kappa≥0.80極好一致性，幾乎完全一致。

2 結 果

2.1檢測結果 120例新生兒中胃液標本病原體陽性14例(11.67%)，其中UP 8例，EC 4例，UU 1例，MH 1例；咽拭子標本病原體陽性12例(10.00%)，其中UP 6例，EC 4例，UU 1例，MH 1例；胃液和咽拭子標本病原體陽性一致10例，其中UP 6例，EC 2例，UU 1例，MH 1例；胃液和咽拭子標本均未檢出CT、NG、EB、GBS、CMV、MG和EnV。

2.2胃液和咽拭子標本UP、EC、UU、MH檢出率比較 胃液和咽拭子標本UP、EC、UU、MH檢出率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 胃液和咽拭子標本UP、EC、UU、MH檢出率比較[n(%)，n=120]

2.3胃液和咽拭子標本陽性檢出UP、EC、UU、MH一致性 胃液和咽拭子標本UP、EC、UU、MH檢測一致性良好(Kappa=0.848、0.483、1.000、1.000，P<0.05)。見表2～5。

表2 胃液和咽拭子標本陽性檢出UP一致性(n)

表3 胃液和咽拭子標本陽性檢出EC一致性(n)

表4 胃液和咽拭子標本陽性檢出UU一致性(n)

表5 胃液和咽拭子標本陽性檢出MH一致性(n)

2.4胃液和咽拭子標本陽性檢出11種病原體總體一致性 胃液和咽拭子標本檢測總體結果具有較高一致性(Kappa=0.673，P<0.001)。見表6。

表6 胃液和咽拭子標本陽性檢出11種病原體總體一致性(n)

3 討 論

新生兒機體器官尚未完全發育，抵抗力較差，特別是早產兒、極低出生體重兒，由于自身防御及免疫系統發育不完善，極易感染各種病原體[8-9]，部分病原體可引起新生兒急性呼吸窘迫綜合征或嚴重膿毒癥而導致死亡，有些甚至可快速在醫院內播散引起嚴重的醫院內感染，導致災難性后果[10-11]。新生兒感染早期快速、準確的篩查診斷對早期干預、改善患兒預后具有重要意義。在新生兒感染中有11種較常見病原體(CT、UP、EC、UU、NG、EB、GBS、CMV、MG、EnV、MH)[12-13]，圍產期母嬰病原體核酸懸浮微珠液相芯片檢測技術即針對此11種新生兒感染的常見病原體，從理論上來講，能滿足高效、快速、高通量的要求，適合作為新生兒感染的篩查、診斷方法，而合適的檢測標本的選擇對其臨床推廣應用具有重要意義。

對剛出生的可疑感染新生兒常規病原體檢查，如細菌培養、病原體核酸檢測均可選擇胃液標本，胃液標本常作為除羊水外的另一種標本用于鑒定產前感染[14]，但胃液標本的采集過程比咽拭子復雜，新生兒出生后短時間內完成度較低，且為侵入性操作，操作過程易造成患兒消化道損傷。咽拭子標本具有取材方便、無創、簡單易操作、出生后產房內即可快速完成標本采集等優點[15-16]。本研究選取120例剛出生的可疑感染新生兒作為研究對象，采集出生后3 h內胃液和咽拭子標本，通過圍產期母嬰病原體核酸檢測懸浮微珠液相芯片完成11種病原體檢測，結果顯示，新生兒胃液和咽拭子標本11種病原體核酸檢測結果基本一致。

本研究是對可疑感染新生兒的病原體篩查，檢測結果陽性率偏低，胃液標本總陽性檢出率為11.67%，咽拭子標本總陽性檢出率為10.00%，11種病原體中僅有UP、EC、UU、MH 4種病原體檢出陽性，其他7種病原體均未檢出，但考慮到為配對資料，且樣本量大于100例，統計學結論具有一定的臨床意義，認為新生兒胃液和咽拭子標本11種病原體核酸檢測結果基本一致，也可通過提高樣本量進一步驗證結果的代表性。