45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯WG的高效液相色譜分析方法

常海龍，王龍，卞傳飛，肖健，李保同

(江西農業大學 國土資源與環境學院，江西 南昌 330045)

苯并烯氟菌唑，是由先正達研制的吡唑酰胺類殺菌劑[1]，被廣泛用于防治小麥白粉病、亞洲大豆銹病等多種病害[2-6]。嘧菌酯，是由先正達開發研制的一種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑[7]，可用于防治白粉病、銹病等幾乎所有的真菌病害，使用方式多樣，且對作物生長較安全[8-10]。目前國內已經有苯并烯氟菌唑、嘧菌酯原藥和嘧菌酯與其他藥物復配制劑的常量分析方法報道，但是對苯并烯氟菌唑和嘧菌酯復配制劑的分析方法尚未見報道。本文采用高效液相色譜法同時測定45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑中有效成分的含量，方法簡單高效，精確度好，適用于同時定量分析該制劑中的苯并烯氟菌唑和嘧菌酯。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

苯并烯氟菌唑標準品(≥98.0%)、嘧菌酯標準品(≥98.0%)、45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯WG(苯并烯氟菌唑15%，嘧菌酯30%)，均購自瑞士先正達作物保護有限公司。

安捷倫1260型 Ⅱ 代高效液相色譜儀；Poroshell 120 EC-C18(4.6 mm×150 mm，4-Micron)色譜柱；EX224ZH電子天平；F-060S超聲波機。

1.2 高效液相色譜條件

檢測波長220 nm，流動相為體積比60∶40的乙腈-0.1%磷酸水體系，柱溫30 ℃，流速1 mL/min，進樣量10 μL。

1.3 測定步驟

1.3.1 標樣溶液的配制 于50 mL容量瓶中加入用電子天平精確稱量的苯并烯氟菌唑標準品 0.005 0 g、嘧菌酯標準品0.010 0 g，加入20 mL乙腈進行溶解后用超聲波機水浴助溶5 min，待靜置冷卻至室溫后再用乙腈定容，搖勻后放置冰箱備用。

1.3.2 試樣溶液的配制 于50 mL容量瓶中加入用電子天平精確稱量的45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑0.033 4 g(精確至0.000 1 g)，加入20 mL乙腈進行溶解后用超聲波機水浴助溶5 min，待靜置冷卻至室溫后再用乙腈定容，搖勻后放置冰箱備用。

1.3.3 測定方法 用注射器移取0.5 mL標樣溶液，過0.22 μm有機濾膜注入進樣瓶，之后按照1.2節的色譜條件，待四元泵壓力和基線趨于穩定，上機檢測，連續進樣，待相鄰2針1.3.1節的標樣溶液的峰面積值變化低于1.5%時，按照標樣→試樣→試樣→標樣溶液的順序進樣。在1.2節色譜條件下，嘧菌酯標準品的保留時間為2.963 min，苯并烯氟菌唑標準品的保留時間約為5.136 min。測定結果見圖1、圖2。

圖1 苯并烯氟菌唑·嘧菌酯標樣液相色譜圖Fig.1 Liquid chromatogram of benzovindiflupyr· azoxystrobin standard sample

圖2 45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑液相色譜圖Fig.2 Liquid chromatogram of benzovindiflupyr· azoxystrobin 45% WG

1.3.4 計算 平均2針標樣和2針試樣中苯并烯氟菌唑(或嘧菌酯)的峰面積，試樣中苯并烯氟菌唑(或嘧菌酯)的質量分數(W2，%)按下式計算：

其中，A1、A2分別為標樣和試樣中苯并烯氟菌唑(或嘧菌酯)峰面積的平均值；M1、M2為標樣和試樣的質量(g)；W1為標樣溶液中苯并烯氟菌唑(或嘧菌酯)的質量分數(%)。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測波長的選擇 用注射器移取0.5 mL的苯并烯氟菌唑和嘧菌酯標樣溶液過0.22 μm有機濾膜注入進樣瓶中，在190～400 nm的波長范圍內進行紫外掃描，獲得苯并烯氟菌唑和嘧菌酯的紫外吸收光譜圖(圖3)。發現苯并烯氟菌唑和嘧菌酯在200～240 nm處同時有較大吸收，因此綜合考慮選擇220 nm作為檢測波長，在該波長下雜質和各組分能夠很好分離。

圖3 苯并烯氟菌唑·嘧菌酯紫外吸收光譜圖Fig.3 UV absorption spectrum of benzovindiflupyr·azoxystrobin

2.1.2 流動相的選擇 通過反復測試不同體積比的乙腈-水/0.1%磷酸水、甲醇-水/0.1%磷酸水體系來選擇合適的流動相，并測試柱溫和流速對峰面積以及保留時間的影響。

經過測試發現，柱溫對待測樣品峰面積以及保留時間的影響較小，不對其進行單獨討論；不同的流速對出峰時間的影響為：流速越小，苯并烯氟菌唑和嘧菌酯保留時間越長；當乙腈溶液作為有機相時，組分與雜質分離效果更好，雜峰更少，有效成分的峰面積更大，峰形更好；以乙腈+水體系為流動相，峰形會出現拖峰情況，為了得到更好的分離效果和峰形，將水相更換為0.1%磷酸水，并對其體積比進行優化。

最終確定色譜條件為：220 nm的檢測波長，30 ℃ 的柱溫，體積比為60∶40的乙腈-0.1%磷酸水體系，流速1 mL/min，進樣量10 μL。

2.2 分析方法的線性相關性

制備質量濃度梯度為0.01，0.1，1，5，10，50，100(0.02，0.2，2，10，20，100，200)mg/L的苯并烯氟菌唑(嘧菌酯)標樣溶液。在上述高效液相色譜條件下，用外標法進行定量分析。以苯并烯氟菌唑(嘧菌酯)標樣溶液的質量濃度(x)為橫坐標，苯并烯氟菌唑(嘧菌酯)標樣溶液的色譜峰面積(y)為縱坐標，繪制標準曲線圖(圖4、圖5)。

苯并烯氟菌唑在0.01～100 mg/L質量濃度范圍內，線性回歸方程為y=35.114x-2.822 5，R2=0.999 9；嘧菌酯在0.02～200 mg/L質量濃度范圍內，線性回歸方程為y=41.967x-7.984 7，R2=0.999 9。該方法可用于分析和檢測45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑。

圖4 苯并烯氟菌唑標準曲線Fig.4 Standard curve of benzovindiflupyr

圖5 嘧菌酯標準曲線Fig.5 Standard curve of azoxystrobin

2.3 分析方法的精密度

從同一45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑中取5個樣品，在上述色譜條件下，待四元泵壓力和基線趨于穩定后進樣測定，通過計算得到45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑的標準偏差和變異系數(見表1)。苯并烯氟菌唑和嘧菌酯的標準偏差分別為6.86%和5.32%，變異系數為0.46%和 0.18%，變異系數均符合CIPAC的要求(<1.71%)，證明該方法精密度高。

表1 45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑精密度測定Table 1 Precision determination of benzovindiflupyr·azoxystrobin 45% WG

2.4 分析方法的準確度

采用加標回收法，準確稱取5份已知含量的45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑試樣置于容量瓶中，分別加入一定量的苯并烯氟菌唑和嘧菌酯標準品，按照上述色譜方法分析，計算回收率，結果見表2。苯并烯氟菌唑的回收率為98.97%～100.12%，平均回收率為99.49%；嘧菌酯回收率為98.36%～99.95%，平均回收率為99.18%。

表2 45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑準確度測定Table 2 Accuracy determination of benzovindiflupyr·azoxystrobin 45% WG

3 結論

(1)使用Poroshell 120 EC-C18色譜柱，以體積比為60∶40乙腈-0.1%磷酸水體系為流動相，流速為 1 mL/min，柱溫為30 ℃，檢測波長為220 nm，建立了一種能夠同時測定45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯WG中有效成分的高效液相色譜分析方法。

(2)檢測結果表明，該方法操作簡便，能使苯并烯氟菌唑和嘧菌酯有效分離，線性關系良好，精密度和準確度高，適用于45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑的定量分析。