基于“崗課賽證”的高效液相色譜法在藥品檢驗技術中的應用

劉竺云，劉曉敏，張茂風，袁鷹，陳亞運

（1.泰州職業技術學院，江蘇泰州 225300；2.江蘇省智能制藥產教融合集成平臺，江蘇泰州 225300）

2021 年10 月，中共中央辦公廳、國務院辦公廳印發《關于推動現代職業教育高質量發展的意見》，提出要“完善‘崗課賽證’綜合育人機制，按照生產實際和崗位需求設計開發課程，開發模塊化、系統化的實訓課程體系，提升學生實踐能力”。“崗課賽證”指結合專業對應崗位設置課程，“崗”對應工作崗位，“課”指課程體系，“賽”對接職業技能大賽等，“證”代表職業技能等級證書，其中，課程體系架構與課程內容的設置是關鍵。

安全性、有效性、質量可控性是藥品的特性。為了確保藥品的質量，在藥品的生產、貯藏、供應和臨床使用等各個環節都應進行嚴格的分析檢驗，藥品檢驗是確保藥品質量的重要環節，包括藥物生產過程的質量監控和藥物制劑成品的質量檢驗。藥品檢驗技術是一門研究藥品全面質量控制的學科，是高職高專藥學及相關專業開設的一門核心課程[1]。課程以基本化學技術、應用有機化學、儀器分析、藥物化學等前期課程的學習為基礎，通過系統地講授中國藥典的常規檢驗分析方法，使學生掌握藥物分析的基本原理和操作技能。課程中主要學習的檢測方法有：薄層色譜法、紅外鑒別法、紫外可見分光光度法、高效液相色譜法。在化學藥品含量測定方法中最常使用的是高效液相色譜法（英文簡稱HPLC），HPLC 分析不受溫度和樣品沸點限制，有更高的速率、靈敏度[2]，具有非常廣闊的應用前景。經過近幾十年的發展，高效液相色譜法的基本理論、儀器裝置等方面的研究趨近成熟，已經成為化工、醫藥、食品等多個領域中頗具應用優勢的分離分析技術之一[3-5]。

1 高效液相色譜法在藥品檢驗技術中的應用

1.1 定性分析

在藥品檢驗中，鑒別是藥品檢驗的首項任務，只有在鑒別無誤的情況下，進行雜質檢查和含量測定等分析才有意義。鑒別試驗通常選用藥物的化學反應、紅外特征吸收、紫外—可見吸收特征、色譜行為、生物活性及熔點、旋光性、折光率測定等方法對供試品進行鑒別，做出判斷。在色譜法中，藥品成分與色譜出峰保留時間有很大的關聯。在高效液相色譜法中常用的定性分析方法主要有：利用保留時間定性、利用光譜相似度定性、利用質譜檢測器提供的質譜信息定性。例如頭孢尼西鈉的鑒別（1）試驗的標準為在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應與對照品溶液主峰的保留時間一致。對聯用有質譜分析儀的高效液相色譜儀，可以通過比較碎片峰進行比較鑒別。對于色譜法，可以在同等色譜條件下進行定性分析和定量分析，節省時間成本。

1.2 定量分析

藥品分析主要采取了主成分分析法和針對雜質檢查的定量分析。尤其是近幾年，藥品質量受到了高度關注，許多雜質逐漸被列為已知雜質并需要進行定量分析。在中國藥典中規定的定量分析方法有內標法、外標法、加校正因子的主成分自身對照法、不加校正因子的主成分自身對照法、面積歸一化法。在藥品檢驗中，定量分析結果以檢驗報告出具，因此，提高定量分析結果的準確性尤為重要。諸多因素，如檢測人員、儀器設備、實驗環境、化學試劑、檢測分析方法和檢測程序等均會影響實驗結果的準確性[6]，在定量分析方法中，色譜法可以克服化學分析法和光譜法專屬性差的缺點，尤其是復方制劑，色譜法可以同時分離復方制劑中的多種組分以測定含量。而且，高效液相色譜儀重復性高，可自動操作，分析精密度高，可以提高定量分析結果的準確性。目前，高效液相色譜是藥物分析最重要的儀器之一，多用于樣品純度檢測、穩定性測試和溶解度測試。

2 HPLC 在藥品檢驗技術課程中的應用

2.1 改革教學方法

在目前的藥品檢驗技術課程教學中，教師多是基于校本教材或者立體化“工作手冊式”活頁教材[7]，以課堂講授和實訓教學為主，教學質量不佳。為了提高教學質量，教師可以利用超星泛雅MOOC 平臺，建立網上資源，包含高效液相色譜法理論知識講解、液相虛擬軟件、色譜保留行為模擬、色譜峰處理軟件、檢驗報告書寫、液相故障排查等模塊。這些模塊有助于學生獲取知識，并且可以重復練習以掌握相關技能。這種模塊設計能夠激發學生對液相的興趣，并且成功使用虛擬軟件可以提升學生的成就感。在前期線上學習過程中，教師適當增加關于液相使用技巧的教學小視頻，使學生能掌握液相使用的規范操作，發揮學生學習的自主性。藥品檢驗實訓改革需要從三個方面入手：一是加強藥品檢驗實驗室安全教育，增強學生安全意識；二是著重培養學生基本操作技能，培養學生嚴謹和實事求是的實驗態度；三是嚴格要求檢驗原始記錄填寫規范，使學生形成標準化檢驗習慣。教師應當主動探索改變“教師講，學生做”的傳統教學模式，采用項目教學法，增強學生的自主性，即教師導入案例，引出任務，學生可以根據任務進行項目選擇，而后自行分組；每個小組分析項目后，制定相應計劃方案，查閱資料文獻，準備相關玻璃儀器、試劑、試藥，各組學生根據所查資料配制試劑、藥品溶液，再與配對組進行交換，用對方所配試劑、藥品溶液進行實驗，完成任務，然后進行數據處理、整理檢驗記錄，并出具檢驗報告[8]。通過此種方法進一步增強學生的自主性，培養學生團隊協作的精神。

2.2 完善實踐實訓條件

校內實踐教學環節的主場所是實訓基地，在培養學生分析、解決問題方面發揮著不可或缺的作用，所以在深化職教改革的過程中，高校需持續更新實訓教學條件建設標準[9]。一方面，建立兼具舉辦職業技能大賽和培訓職業技能等級證書資質的綜合性培訓中心。建立綜合性高水平實訓基地能夠持續輸出技能復合型人才，推動實訓基地持續發展[10]。與此同時，增加高效液相色譜儀數量，可以使學生在分組練習時不僅懂原理，還熟悉儀器的操作與維護。另一方面，建立園校企產學研合作平臺[11]，作為學生認知實習、暑期社會實踐和頂崗實習的重要基地。對于一些高校而言，短期內添置足夠數量的高效液相色譜儀，使每名學生人手一臺是較難實現的，建立園校企產學研合作平臺可以彌補缺少儀器這一短板，學生既可以練習高效液相色譜儀的使用，完成學校的學習任務，又可以熟悉企業檢驗系統和化驗室管理體系，使學生畢業之后可以快速適應工作崗位。中國（泰州）醫藥城園區有大量醫藥企業，每年有很多應屆畢業生在這里就業，園校企合作有利于中國（泰州）醫藥城園區、學校和企業多方共同參與人才培養，通過合作，學校可以保證教學設備的及時更新，提升學生的實驗技能，企業可以獲得技術創新，獲得具有更高水平的專業人才。

2.3 以就業“崗”位為導向，教學過程參照藥品檢驗過程

學校的實驗過程與實際藥企藥品檢驗過程有一定差距。高校實驗室通常為演示性實驗室，不具備藥企藥品檢驗的必要環境，絕大多數企業已經通過了中國合格評定國家認可委員會（英文名稱為：China National Accreditation Service for Conformity Assessment，英文縮寫為CNAS）實驗室認可，而很多高校的實驗室不具備CNAS 實驗室要求的一些資源、設備管理體系要求。以高效液相色譜儀檢測甲硝唑片的含量測定為例，需要學生查詢藥典制定方案，依據方案準備檢驗器具與儀器，對于該實驗，學校實驗通常會比較注重實驗操作過程，但是在實際工作中更加注重細節，例如檢驗過程中最常用的儀器電子分析天平。高校通常觀察、確認天平水平以后就開始使用。在藥企實際工作中，電子分析天平每天使用前需要先進行預熱，在經過砝碼校準天平合格以后方可使用。電子分析天平需要定期做重復性核查和四角誤差（偏載）核查，這些都是高校不具備的實驗條件。放置電子分析天平的房間的溫濕度也需要達到一定標準，這些都是很多學校實驗并未關注的細節。學生根據制定的方案配制溶液、設置儀器參數，在此過程中，教師需要向學生反復強調數據記錄的及時性。在色譜法實驗操作中，高效液相色譜儀使用前后的沖洗程序以及儀器的維護保養也是不可或缺的。含量測定的計算也屬于重點內容，學生需要掌握含量的計算，而學校的儀器與企業的儀器有一定差別，存在更新不及時的問題，因此，學校需要及時引入新型儀器，更新軟件，使學生能使用不同軟件計算含量，獲得切合實際需求的崗位技能。由此可見，要使得學生畢業即上崗，教學過程應當參考企業真實的檢驗標準，以培養學生的科學思維。

2.4 以“課”程內容為重點，實施項目化式教學

以藥品檢驗技術課程中的項目11《高效液相色譜測定甲硝唑片的含量》為例，共分為以下7 步。第一步，下達任務通知單，教師下達項目11 的任務單，要求學生查閱標準，制定檢測方案，完成相應的配制與標定任務。第二步，查閱甲硝唑片質量標準，制定操作規程，學生分組查閱藥典，確定甲硝唑質量標準，制定操作規程；解讀質量標準，確定檢測操作步驟以及所用到的試劑與試液與儀器；討論交流各組制定的操作規程，集體討論測定過程要點，教師輔助指導。第三步，樣品預處理。按照質量標準對樣品進行溶解、過濾，脫氣處理。第四步，流動相的配制。按照操作規程要求配制流動相。第五步，液相色譜儀的操作。打開工作站，設定色譜儀參數；調整基線；進樣，并采集數據，打出圖譜。第六步，討論與考評。學生分組匯報測定過程和測定結果；教師講注射液檢查的操作要點，點評學生操作中的問題；學生完成組內互評、組與組互評，教師對小組進行評價。第七步，拓展。教師補充講授色譜操作的相關知識，學生也可以通過超星泛雅課程平臺查閱相關學習資料。

2.5 以技能競“賽”為指引，推動課程教學改革

“藥品檢測技術”專業技能大賽由全國食品藥品職業教育教學指導委員會主辦，2018 年、2019 年的兩屆大賽由山東藥品食品職業學院承辦，兩屆大賽先后有44 所、62 所高職院校累計318 名選手參賽，比賽內容包括基礎知識及信息化仿真考核、容量分析技能操作考核、光譜分析技能操作考核和色譜分析技能操作考核四個單元。比賽內容涵蓋了藥品檢驗領域所需的主要知識點和技能點，力求通過競賽考查參賽選手利用中、大型分析儀器進行藥品質量檢測的能力。技能競賽是學生綜合能力的檢閱場，能夠為參賽學生提供高水平競技與切磋的舞臺，藥品檢驗技術大賽實質是課程教學質量的重要體現，教師需要圍繞技能競賽大綱及內容進行課程教學改革，“以賽促教、以賽促學”，從而不斷提升學生的實際操作技能[12]。

2.6 以職業技能“證”書為目標，促進高效液相色譜法應用技能培養

2019 年4 月，教育部、國家發展改革委、財政部、市場監管總局聯合印發《關于在院校實施“學歷證書+若干職業技能等級證書”制度試點方案》，部署啟動“學歷證書+若干職業技能等級證書”（簡稱“1+X”證書）制度試點工作。這里的“1”指學歷證書，“+”代表綜合發展，“X”指若干個職業技能證書，學生在“1+X”證書制度下，完成學校規定的學習年限和學分要求，通過考核后由學校頒發學歷證書，也獲得職業技能證書，兼具教育性和職業性。

在藥品檢驗技術課程中，開展“課崗賽證”融通研究和探索，構建模塊化教學模式，尤其是建立起液相模塊，可將紫外分光光度法和紅外分光光度法作為一個重難點內容。學生學習掌握液相色譜基礎知識和實驗技能的同時，以課程對應崗位的職業技能需求為導向進行專業學習，知行合一，崗位和學校知識相匹配。近年來，各院校對各種職業技能大賽的關注度較高，調動了學生參加職業技能大賽的積極性。職業技能大賽對提高學生職業能力有天然的優勢，契合職業教育的核心目標，教師應對有意向參與職業院校技能競賽和創新創業大賽的學生進行技能培訓，實現以賽促教、以賽促學。教師應當根據制藥企業對儀器化驗員的崗位需求、用人數量等設計課程體系，培養畢業即能上崗、上崗即能操作的高技能人才。

2.7 改革課程考核制度

藥品檢驗技術是一門以操作為主的課程，要求改革以期末考試成績為主的考核方式，尤其是大型儀器高效液相色譜儀模塊。課程要求學生能根據《中華人民共和國藥典》正文中不同品種的藥品選擇合適的色譜條件，也需要學生熟練掌握藥品的溶解、離心、過濾、脫氣等一系列預處理操作。對色譜的適應性進行測試，驗證色譜條件，進行液相色譜的檢驗操作，以及熟練使用色譜工作站采集、處理、分析藥品色譜圖，選擇正確數據處理方式，對藥品含量做出判斷，對于這些內容，不能僅依據考試分數考查學生的學習掌握情況。結合藥品檢驗技術課程以操作為主的性質，可將學生綜合成績的考核分為三個部分：綜合考核成績=在線學習成績（占比為30%）+實訓操作成績（占比為30%）+期末筆試成績（占比為40%）。其中：在線學習成績=課程視頻（占比為25%）+仿真實訓（占比為30%）+章節測驗（占比為20%）+訪問簽到（占比為5%）+作業（占比為20%），實訓操作成績為本學期所有實訓項目成績之和/項目數量，期末考試筆試為理論考核（閉卷）。以往以期末考試成績為主的課程教學考核體系需要改變，教師可以根據學生在藥品檢驗技術課程實驗中的實踐操作情況及熟練程度有效評價學生的實際能力。在考核過程中，教師需要充分調動學生學習的主動性，讓學生變為主動學習。這種全程式、過程化考核方式可以構建以培養應用型人才為導向的教育模式，使學生理論學習和實踐操作同步發展[13-14]。

3 結語

高效液相色譜法可以分離高達80%的有機化合物，廣泛應用于天然產物、生物活性物質、生物大分子等有機物的分離分析，是目前企業最常用的分離檢測方法之一。近年來，藥品檢驗機構呈現增長趨勢，藥品檢驗機構進入活躍期。藥品檢驗標準也已轉變為以儀器為主的檢驗，高效液相色譜法具有較強的專屬性和較高的靈敏度，在藥品檢驗中的應用會日益廣泛。

本文以高效液相色譜法在藥品檢驗技術中的應用為例，對“崗課賽證”融通育人機制進行了討論與研究。總體來看，在對接職業教育的過程中，將職業資格證書考核內容與專業課程教學相銜接，做到課程與考證相結合、課程與職業資格證書融合，“以賽促教、以賽促學”，提升學生的動手能力，將大大增強學生的綜合技能。