無抗日糧中添加凝結芽孢桿菌培養物對肉雞生產性能的影響

常 紅，楊建功，張改霞

（1.舞陽縣動物防疫檢疫中心，河南舞陽 462400；2.漯河市功能區畜牧服務中心，河南漯河 462000）

凝結芽孢桿菌（Bacillus coagulans）又稱芽孢乳酸菌（趙樹平等，2014），是一類桿菌類乳酸菌，具備芽孢桿菌屬和乳酸菌類的雙重優勢（黃遵錫和程志斌，2015），能在腸道內定居，可產生B族維生素、多種消化酶和抑制有害菌的凝固素（Coagulin）和L-乳酸，同時可抑制多種病原體（趙鈺等，2015）。本試驗在肉雞無抗日糧中添加凝結芽孢桿菌培養物，旨在研究其對肉雞生產性能的影響，為無抗日糧開發及應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 15%金霉素購自華中正大有限公司。指示菌：大腸桿菌K88、K99、腸炎沙門氏菌、產氣莢膜梭菌（雞源）均為本實驗室保存。凝結芽孢桿菌培養物為本實驗室制備，活菌含量為9×108CFU/g。

1.2 試驗設計 試驗選取900羽體重45 g左右的1日齡羅斯308肉雞，隨機分設3組，每組3個重復，每個重復為100羽。I組：基礎無抗日糧；II組：在I組日糧中添加金霉素75 mg/kg；III組：在I組日糧中添加凝結芽孢桿菌培養物1000 g/t；試驗為期38 d。試驗日糧設計參照羅斯308肉雞營養需要，日糧營養水平和原料組成如表1。

表1 試驗日糧營養水平和組成

1.3 飼養管理 日常管理按飼養規程進行，免疫防控按日常程序進行；試驗期不使用任何抗生素和其他添加劑。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 抑菌活性 采用牛津杯平板擴散法測定抑菌活性，用游標卡尺測量抑菌圈直徑，以抑菌圈直徑大小表示抑菌活性（鐘舒紅等，2022）。

1.4.2 生長性能 試驗期每天記錄采食量，于7、38 d空料2 h后稱重，統計各組平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。

1.4.3 免疫指標 試驗38 d空料2 h后稱重，每個重復隨機選取10羽，心臟采血，分離血清于-20℃保存待測。血清IgA、IgM、IgG均用ELISA酶聯免疫法測定；ND抗體水平采用血凝抑制法（HI）。按雞只編號解剖后摘取完整的胸腺、脾臟、法氏囊并稱重，免疫器官指數計算公式如下：

免疫器官指數=免疫器官重（g）/活體重（kg）。

1.4.4 消化酶活性 雞只稱取1 g空腸食糜至9 mL滅菌蒸餾水中，在冰面上勻漿5 min，1800 r/min離心5 min后吸取上清液用試劑盒測定淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶活性，操作方法按說明書執行。

1.4.5 腸道形態 截取雞只小腸卵黃蒂前5 cm腸段用10%福爾馬林固定，切片經伊紅（HE）染色，用生物顯微鏡觀察腸道形態，測量隱窩深度和絨毛高度，計算絨毛高度/隱窩深度（V/C）。

1.5 數據分析 數據經Excel初步整理后用軟件SPSS 20.0單因素方差分析，采用Duncan’s法進行多重比較，結果用平均值表示，P＜0.05表示組間差異顯著。

2 結果

2.1 對抑菌活性的影響 由表1可知，凝結芽孢桿菌培養物對大腸桿菌K88、K99、腸炎沙門氏菌、產氣莢膜梭菌均有良好的抑菌活性，說明凝結芽孢桿菌培養物內富含抑菌代謝物。

表2 對大腸桿菌、沙門氏菌、產氣莢膜梭菌的抑菌活性

2.2 對生長性能的影響 由表3可知，1～7 d，III組死亡率比II組降低13.04%（P＞0.05），比I組死亡率顯著降低33.3%（P＜0.05），ADG顯著提高6.81%（P＜0.05）。8～38 d，III組比I組ADG顯著提高4.68%（P＜0.05），F/G降低4.02%（P＞0.05），死亡率顯著降低48.6%（P＜0.05）。1～38 d，III組比I組ADG顯著提高4.86%（P＜0.05），F/G降低4.09%（P＞0.05），死亡率顯著降低41.7%（P＜0.05），比II組死亡率降低26.38%（P＞0.05）。

表3 凝結芽孢桿菌培養物對肉雞生長性能的影響

2.3 對免疫指標的影響 由表4可知，III組比I組、II組血清IgA、IgM含量和ND抗體水平提高22.16%、23.17%、11.04%、15.03%和15.04%、9.68%，差異顯著（P＜0.05）；ND抗體離散度降低36.84%（P＜0.05）和29.41%（P＜0.05）。III組胸腺指數和法氏囊指數相比I組提高9.43%（P＜0.05）和62.5%（P＜0.05）。

表4 凝結芽孢桿菌培養物對肉雞免疫指標的影響

2.4 對消化酶活性的影響 由表5可知，III組相比I組空腸淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶活性分別顯著提高25.98%、42.43%、36.09%（P＜0.05）；III組相比II組空腸淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶活性分別顯著提高13.8%、34.63%、25.05%（P＜0.05）。

表5 凝結芽孢桿菌培養物對肉雞消化酶的影響 U/g

2.5 對腸道形態的影響 由表6可知，III組空腸絨毛高度比I組、II組分別提高19.83%（P＜0.05）和4.35%（P＞0.05），而絨毛高度/隱窩深度比降低8.46%（P＜0.05）和5.87%（P＜0.05）。圖1為空腸切片圖。

圖1 空腸形態結構圖

表6 凝結芽孢桿菌培養物對肉雞腸道形態的影響

3 分析與討論

促生長類抗生素作用機理的主流觀點是通過抑制有害菌，改善腸道健康，進而達到促進動物生長的目的（張顯東，2017）。凝結芽孢桿菌產生的凝固素（Coagulin）是由44個氨基酸殘基組成，帶正電荷，有陽離子特性，兩性區或疏水區能穿過細胞膜而殺死靶細胞（李雄彪等，2006）。本試驗對大腸桿菌K88、K99、腸炎沙門氏菌、A型產氣莢膜梭菌（雞源）的抑菌測定表明，凝結芽孢桿菌培養物有良好的抑菌活性。

研究表明，凝結芽孢桿菌300 mg/kg可提高21 d櫻桃谷肉鴨小腸淀粉酶、胰蛋白酶活性（曾麗莉等，2015）；小腸絨毛的高度和隱窩深度是反映小腸細胞發育情況和消化吸收功能的主要指標（齊博等，2016）；本試驗III組比I組、II組空腸絨毛高度顯著增加，空腸食糜中淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶活性顯著提高，表明凝結芽孢桿菌培養物可提升腸道食糜消化能力，增強小腸消化吸收能力。全程，III組ADG和ADFI顯著提高，F/G和死亡率顯著降低，且血清IgA、IgM、IgG含量和ND抗體水平顯著提高，ND抗體離散度顯著降低，生產成績顯著提升，其機制是凝結芽孢桿菌培養物作用的綜合體現，通過抑制有害菌生長來保障腸道健康，提高小腸絨毛高度，增加吸收面積，提升消化酶活性，促進營養物吸收，進而提高機體免疫力，降低死亡率，最終提升生產成績。

4 結論

無抗日糧中添加凝結芽孢桿菌培養物1000 g/t可提升肉雞生產成績，且添加凝結芽孢桿菌培養物效果優于金霉素。