銀耳多糖的提取、生物活性及其應用概述

馬傳貴 張志秀 肖 寶 隋 欣

（1 北京京誠生物科技有限公司，北京 大興 102600；2 中國醫學科學院北京協和醫學院生物醫學工程研究所，天津 300192；3 黑龍江湯原縣農業農村局，黑龍江 佳木斯 1574700）

銀耳Tremella fuciformis，又名白木耳、雪耳，是人們日常生活中常見的食用菌，有“菌中之冠”的美稱[1]。銀耳的子實體呈凝膠狀，顏色為白色或淡黃色，由10余片薄而多皺褶的扁平形瓣片組成。銀耳富含蛋白質、多糖和膳食纖維，能量和脂肪含量低，是一種受歡迎的食藥用菌。從銀耳子實體、發酵液中提取純化的銀耳多糖，具有免疫調節、抗腫瘤及抗氧化、抗衰老等多種生物活性。筆者對銀耳多糖的提取純化方法、銀耳多糖的生物活性研究及應用進行綜述，以期為銀耳多糖的研究及其開發應用提供參考。

1 銀耳多糖的提取及純化

銀耳多糖的提取及純化是研究和解析多糖結構、生物活性的關鍵步驟，對多糖的純度、產量、結構及生物活性等有重要的影響。銀耳多糖傳統的提取方法有熱水提取法、酸或者堿浸提法及酶解提取法等。安星亮等[2]通過響應面法優化熱水提取法提取銀耳多糖的工藝，得到最佳的提取工藝：料（g）液（mL）比1∶79，提取溫度91 ℃，提取時間5 h，銀耳多糖的提取率為20.30%。鮑會梅[3]通過優化銀耳多糖酶解法提取工藝，得出最佳工藝條件：纖維素酶1.5%，中性蛋白酶2.0%，溫度50 ℃，pH 4.5，提取時間60 min，多糖提取率為15.40%。安星亮等[4]采用熱水提取法提取干、鮮銀耳多糖，相同的提取條件為提取時間5 min，料（g）液（mL）比1∶80，提取溫度100 ℃，干、鮮銀耳多糖提取率分別為22%、52%。同時銀耳多糖提取工藝在不斷優化，新的提取方法有超聲提取法、微波提取法及超高壓提取法等。例如，陳嬋等[5]優化超聲波提取銀耳蒂頭粗多糖的工藝，得到最佳工藝條件：料（g）液（mL）比1∶90，超聲功率50 W，提取時間100 min，提取溫度為50～80 ℃，銀耳多糖的提取率為36.38%。楊嘉丹等[6]優化微波輔助提取銀耳多糖工藝，得到最佳的提取工藝：料（g）液（mL）比1∶50，微波功率400 W，微波提取時間2 h，提取溫度為95 ℃，銀耳多糖的提取率為33.25%。張閃閃等[7]研究得到最佳的加壓熱水提取銀耳多糖的工藝條件：料（g）液（mL）比1∶80，提取溫度120 ℃，提取壓力1.0 MPa，提取時間40 min，銀耳多糖提取率為70.25%。

上述方法提取的銀耳粗多糖經過分離純化技術去除混雜蛋白質、無機鹽等雜質后，才能獲得純銀耳多糖。王昭晶等[8]通過DEAE-Sepharose CL-6B和Sephadex G-100 柱色譜分離純化銀耳糖，最終得到TABW-Ⅱ、TFBW-Ⅱ、TEPW-Ⅱ和TSPW-Ⅰ四種多糖，相對分子量分別為26×103、11×103、21×103、356×103。張慶等[9]對提取的段木、代料栽培銀耳粗多糖采用sevage 法脫蛋白，結果兩種銀耳粗多糖蛋白質殘留量分別為2.65 mg/mL、0.45 mg/mL，且銀耳多糖中葡萄糖的質量比為13.62∶2.43。馬素云等[10]采用酶-Sevage法去蛋白、離子交換層析和凝膠過濾層析純化后得到銀耳純多糖TFP1，主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、木糖、巖藻糖4 種單糖組成，根據反相高效液相色譜洗脫的峰面積計算不同單糖的物質的量比為5.78∶0.7∶1.1∶1。

2 銀耳多糖的生物活性

2.1 抗氧化及抗老化活性

免疫系統隨著人體衰老而逐漸衰退，如循環T細胞增殖減少，則會引起促炎性白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）增加，NK 細胞活性降低等[11]。研究發現，銀耳多糖可提高機體器官中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的水平，并降低丙二醛（MDA）、脂褐素（LP）含量，以實現抗氧化和抗衰老功效[12]。趙明月等[13]向D-半乳糖致衰老小鼠腹腔注射銀耳多糖，結果發現銀耳多糖可以提升小鼠衰老皮膚中羥脯氨酸及透明質酸含量，提高小鼠血清、肝臟、心臟部位GSH-Px、SOD 活性并降低MDA 含量，進一步表明銀耳多糖的抗氧化、抗衰老活性。徐曉飛等[14]發現銀耳多糖能夠極顯著提高血清、肝臟和心臟部位GSH-Px、SOD 活性并降低MDA 含量，且逆轉D-半乳糖所致小鼠結腸部位腸道中短鏈脂肪酸（SCFAs）濃度的改變。徐曉飛等[15]分析兩種商業化銀耳多糖WSK、BETA 對小鼠抗衰老的作用，發現相比于WSK，BETA 可極顯著提高小鼠皮膚中的羥脯氨酸、透明質酸含量，以及小鼠肝臟、心臟中的SOD、GSH-Px 活性，因此BETA 具有更好抗皮膚衰老的作用。

2.2 抗腫瘤及免疫調節活性

研究發現，銀耳多糖具有調節機體免疫和抑制腫瘤生長的作用，其對腫瘤的抑制作用是通過中間宿主效應實現，即增強機體對腫瘤的免疫力。CHEN[16]研究發現銀耳多糖可以抑制Hep G22 細胞的生長，且50 mg/mL 劑量的抗腫瘤活性就達92%。龐良芳[17]研究發現，銀耳多糖可以減輕腫瘤患者化療的副作用，并完善患者自身的免疫系統，提高其對癌癥抵抗力。

多糖主要通過巨噬細胞發揮免疫功效，巨噬細胞會對感染、腫瘤、炎癥做出反應。巨噬細胞通過吞噬方式直接殺死病原體，并呈現抗原以引發免疫應答。巨噬細胞產生大量生物活性分子，包括一氧化氮（NO）、活性氧（ROS）和細胞因子[瘤壞死因子TNF-α、白介素（IL）-1α、IL-1β，用于防御IL-6、IL-10]。SHI等[18]研究發現銀耳多糖可以逆轉銅綠假單胞菌感染的燙傷小鼠中CD4+T 細胞的增殖和極化效應，從而降低IL-10 水平。RUI 等[19]研究發現，銀耳多糖可抑制環磷酰胺誘導的小鼠白細胞減少，且白細胞增加依賴劑量。王第亮[20]研究發現，籃球運動員高強度運動后服用銀耳多糖，其免疫球蛋白水平顯著升高，TNF-α 含量、IL-10 水平顯著降低，表明銀耳多糖可有效調節籃球運動員在大負荷運動之后產生的運動性免疫抑制。史振偉等[21]采用燒傷后小鼠腹腔注射銅綠假單胞菌制作膿毒癥并予以銀耳多糖干預，發現銀耳多糖干預后小鼠IL-10、IL-4的分泌量顯著降低，IFN-γ的分泌量顯著增加。并且最終指出銀耳多糖可以通過降低IL-10 的分泌抑制CD4+CD25 highTregs 對CD4+T 淋巴細胞增殖和極化的影響，并誘導CD4+T淋巴細胞向Th1分型，從而使機體免疫活性增強。

2.3 抗炎活性

GAO 等[22]首先報道銀耳多糖的抗炎活性，指出銀耳多糖能夠誘導單核細胞產生白介素-1（IL-1）、IL-6、腫瘤壞死因子（TNF）。LEE等[23]研究證明銀耳多糖在小鼠單核巨噬細胞白血病細胞中的抗炎作用，且指出脂多糖誘導的iNOS/NO、COX-2/PGE 2被銀耳多糖有效抑制。謝玲娜[24]研究發現，銀耳多糖能明顯改善造模后小鼠背部皮膚特應性皮炎樣癥狀，減少表皮層的異常增厚，且能顯著降低血清中免疫球蛋白E 的含量，進一步抑制炎癥因子（IL-4、IL-6、IL-13）的表達。曹銘等[25]發現銀耳多糖WSK可以強化皮膚屏障，減少皮膚中炎癥因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-a 產生；同時進一步指出因WSK中葡甘聚糖特有的大分子結構，建議將其應用到護膚品中起到保濕、抗過敏的作用。

2.4 抗輻射活性

目前天然高效的植物多糖在防曬產品中的應用開始廣受關注。銀耳多糖也被發現具有顯著的抗輻射活性。王曉琳等[26]發現磷酸酯化銀耳多糖能夠顯著增高137Csγ 射線輻射損傷小鼠骨髓有核細胞數、白細胞數、脾指數、胸腺指數。韓英等（2012）[27]也發現銀耳多糖可以顯著減輕8Gy 伽瑪射線照射小鼠的皮膚損傷，且使小鼠外周血中血紅蛋白含量、白細胞數、紅細胞數保持較高水平。

2.5 其他生物活性

銀耳多糖除了以上生物活性外，還被發現具有降血糖、降膽固醇活性[28]，修復大腦記憶障礙的作用。PARK 等[29]在研究銀耳多糖對三甲基錫誘導的大鼠學習和記憶缺陷模型的影響時，發現銀耳多糖以劑量依賴性方式顯著增加PC12 細胞上的軸突生長，加強大腦中的葡萄糖代謝，與對照組相比，環磷腺苷效應元件結合蛋白（CREB）神經元的數量增加了134%。

3 銀耳多糖的應用

首先，銀耳多糖具備透明質酸和膠原蛋白的特點和功效，因此表現出極強的保濕、抗老化、抗氧化、增加皮膚彈性、抗炎、抗輻射等功效。因此銀耳多糖常被應用于化妝品中，成為天然高效的化妝品添加劑。吳依娜[30]用銀耳多糖乳化增稠橄欖油制備橄欖油精華液，發現其乳化體平均粒徑約153 μm，且均一穩定。同時，王久瑩[31]用提取的胞外粗多糖開發出三種化妝品（胞外多糖爽膚水、潤膚乳及保濕面霜），進一步驗證發現這三種化妝品的細胞毒性極低，且對損傷細胞具有一定的保護作用。

其次，銀耳多糖含多種高分子多糖物質，具有一定的乳化和保濕作用，因此也可以作為食品添加劑應用到食品行業。劉炳莉等[32]發現添加0.5%銀耳多糖能夠抑制鮮濕面水分遷移，且能夠獲得有效改善鮮面條黏連的效果。朱艷云[33]提出基于銀耳多糖的復配凝膠配方：卡拉膠-魔芋膠復配膠配比為質量比3∶2，乳清分離蛋白添加量為2%，銀耳多糖添加量為0.5%，蔗糖添加量為8%，檸檬酸添加量為0.1%，CaCl2添加量為0.1%，且將優化配方的銀耳多糖果凍和市售果凍進行感官和質構性能的對比之后發現其口感更好。

最后，銀耳多糖表現出較強的免疫調節、抗腫瘤及抗炎，降血糖、降膽固醇等諸多生物活性，同時也能夠有效改善記憶力，促進腸道中有益菌的形成。因此目前在醫療保健領域中，諸多廠商和相關研究人員將銀耳多糖應用到藥物研發和保健品開發，例如，制作銀耳軟糖、銀耳多糖片應用于不同情況臨床保健治療。

4 展望

銀耳是一種藥食同源的食用菌，富含各類營養物質，銀耳多糖作為銀耳的主要活性成分，近些年被廣泛關注與研究，但大多數應用都處于基礎研究階段，且對其具體作用機制的研究相對較少，限制銀耳多糖的應用。因此未來一方面需要優化銀耳多糖提取純化技術，另一方面加強對其功效作用的挖掘，為銀耳多糖在食品、化妝品、藥品和保健品中的應用提供理論指導。