結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點試驗在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用價值

吳恩強，卓義理，鄒賽英

福建醫(yī)科大學(xué)附屬閩東醫(yī)院 （福建福安 355000）

結(jié)核病是一種由結(jié)核分歧桿菌感染引起的傳染性疾病，可在所有年齡階段發(fā)病，其中免疫力低下人群為易感人群，對公共衛(wèi)生安全造成巨大威脅[1]。流行病學(xué)統(tǒng)計顯示，我國結(jié)核病發(fā)病率較高，每年新增發(fā)病患者規(guī)模約為130 萬，患者規(guī)模在全球位居第2 位[2]。目前，結(jié)核病尚無特效治療藥物，且治療周期長，存在耐藥性、不良反應(yīng)多等局限性，導(dǎo)致治療效果不理想[3]。因此，做好結(jié)核病的預(yù)防成為結(jié)核病防治工作的首要問題。而預(yù)防結(jié)核病的前提是快速確診，阻斷結(jié)核病在普通人群中廣泛傳播[4]。既往結(jié)核病檢測手段，如萋-尼抗酸染色（acid-fast bacilli，AFB）、皮膚結(jié)核菌素試驗（purified protein derivative，PPD），在肺結(jié)核或肺外結(jié)核診斷中的漏診風(fēng)險均較高，影響結(jié)核病預(yù)防工作的推進(jìn)[5]。結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點試驗（tuberculosis infection T cell spot test，T-SPOT.TB）的原理是通過提取外周血單核細(xì)胞，經(jīng)特異性高抗原的刺激，繼而釋放大量γ 干擾素，經(jīng)酶聯(lián)顯色后，通過全自動計算分析儀對顯色斑點計數(shù)，繼而判定患者的結(jié)核分歧桿菌感染情況[6]。基于此，本研究選取2018 年1 月至2021 年10 月我院收治的105 例初診疑似結(jié)核病患者，探討T-SPOT.TB 在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年1 月至2021 年10 月于我院接受診治的105 例初診疑似結(jié)核病患者，其中男56 例，女49 例；年齡22～71 歲，平均（44.46±15.71）歲；復(fù)診時均行T-SPOT.TB、AFB 及PPD 檢測，并保持對患者的隨訪。本研究入組患者均簽署知情同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床表現(xiàn)為咳嗽、咳血、咳痰、消瘦、乏力、低熱等癥狀或體征；X 線檢查顯示存在肺部改變，抗炎治療后效果不理想。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往有結(jié)核病病史；免疫功能障礙、矽肺、肺部腫瘤等；人免疫缺陷病毒陽性抗體檢出；治療依從性不佳，不配合研究；不配合隨訪工作。

1.2 方法

1.2.1 T-SPOT.TB 檢測

采集患者的外周靜脈血5 ml，以密度梯度離心法分離制備外周單個核細(xì)胞，用無血清培養(yǎng)液AIM-V 洗滌細(xì)胞，并減去內(nèi)源性γ 干擾素；制備結(jié)核分歧桿菌檢測的標(biāo)注細(xì)胞稀釋液（250 萬細(xì)胞/ml），取出培養(yǎng)板，標(biāo)記并加入AIM-V 無血清培養(yǎng)液50 μl、抗 原A 50 μl、抗 原B 50 μl、陽 性 對 照50 μl，每孔再加入100 μl 含外周血單個核細(xì)胞的細(xì)胞稀釋液，完成后將培養(yǎng)板進(jìn)行37℃溫育（5%CO2條件下）16～20 h，再以磷酸鹽緩沖液洗滌4 遍，每孔加入新配制的酶標(biāo)抗體溶液50 μl，4℃培養(yǎng)1 h；然后以磷酸鹽緩沖液洗滌1 遍，酶聯(lián)顯色，干燥培養(yǎng)板，之后使用試劑盒（oxford immunotec ltd，UK）進(jìn)行酶聯(lián)免疫點自動計數(shù)儀計數(shù)斑點。

結(jié)核病判定：當(dāng)陰性對照孔斑點數(shù)0～5 時，陽性樣本判定標(biāo)準(zhǔn)為（抗原A 或抗原B 斑點數(shù)）-（陽性對照孔斑點數(shù)）≥6；當(dāng)陰性對照組孔斑點數(shù)≥6，陽性樣本判定標(biāo)準(zhǔn)為（抗原A 或抗原B 斑點數(shù)）≥2×（陰性對照孔斑點數(shù)）。

1.2.2 AFB 檢測

采集患者晨起深處痰液、胸腔積液、腹腔積液、腦脊液、支氣管肺泡灌洗液等，制作標(biāo)本后在載玻片上行抗酸桿菌染色，在顯微鏡下觀察染色結(jié)果。

結(jié)核病判定：至少連續(xù)觀察300 個不同視野，若發(fā)現(xiàn)1～8 條染色，則視為陽性；若連續(xù)觀察300 個不同視野，未發(fā)現(xiàn)染色情況，則視為陰性。

1.2.3 PPD 檢測

在患者前臂屈側(cè)皮內(nèi)注射0.1 ml 結(jié)核菌素純蛋白衍生物稀釋液51 U，注射后48～72 h 觀察患者注射皮膚局部硬結(jié)出現(xiàn)情況。

結(jié)核病判定：硬結(jié)面積≥5 mm 為陽性，硬結(jié)面積＆lt;5 mm 為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)

以患者穿刺活檢診斷結(jié)果作為診斷金標(biāo)準(zhǔn)。依據(jù)金標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果分別計算T-SPOT.TB、AFB 及PPD診斷結(jié)核病的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 24.0 統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用率表示，采用χ2檢驗，P＆lt;0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 穿刺活檢診斷結(jié)果

穿刺活檢診斷結(jié)果顯示，105 例患者中檢出結(jié)核病患者82 例，非結(jié)核病患者23 例。其中，肺結(jié)核46 例，肺外結(jié)核36 例（淋巴結(jié)結(jié)核12 例，骨結(jié)核24 例）。

2.2 T-SPOT.TB、AFB 及PPD 的診斷價值

在結(jié)核病的診斷中，T-SPOT.TB 的靈敏度為91.46%（75/82），特異度為95.65%（22/23），準(zhǔn)確度為92.38%（97/105）；AFB 的靈敏度為68.29%（56/82），特異度為65.22%（15/23），準(zhǔn)確度為67.62%（71/105）；PPD 的 靈 敏 度 為75.61%（62/82），特異度為73.91%（17/23），準(zhǔn)確度為75.24%（79/105），見表1～3。

表1 T-SPOT.TB 在結(jié)核病診斷中的價值（例）

表2 AFB 在結(jié)核病診斷中的價值（例）

表3 PPD 在結(jié)核病診斷中的價值（例）

2.3 T-SPOT.TB、AFB 及PPD 在肺結(jié)核診斷中的價值

在肺結(jié)核的診斷中，T-SPOT.TB 的靈敏度為91.30%（42/46），特異度為91.67%（33/36），準(zhǔn)確度為91.46%（75/82）；AFB 的靈敏度為65.22%（30/46），特異度為75.00%（27/36），準(zhǔn)確度為69.51%（57/82）；PPD 的靈敏度為73.91%（34/46），特異度為77.78%（28/36），準(zhǔn)確度為75.61%（62/82），見表4～6。T-SPOT.TB 檢測在肺結(jié)核檢測中靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均高于AFB 檢測、PPD 檢測。

表4 T-SPOT.TB 在肺結(jié)核診斷中的價值（例）

表5 AFB 在肺結(jié)核診斷中的價值（例）

表6 PPD 在肺結(jié)核診斷中的價值（例）

2.4 T-SPOT.TB、AFB 及PPD 在肺外結(jié)核診斷中的價值

在肺外結(jié)核的診斷中，T-SPOT.TB 的靈敏度為91.67%（33/36），特異度為91.30%（42/46），準(zhǔn)確度為93.90%（77/82）；AFB 的靈敏度為77.78%（28/36），特異度為73.91%（34/46），準(zhǔn)確度為75.61%（62/82）；PPD 的 靈 敏 度 為75.00%（27/36），特異度為65.22%（30/46），準(zhǔn)確度為69.51%（57/82），見表7～9。T-SPOT.TB 檢測在肺外結(jié)核檢測中靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均高于AFB 檢測、PPD 檢測。

表7 T-SPOT.TB 在肺外結(jié)核診斷中的價值（例）

表8 AFB 在肺外結(jié)核診斷中的價值（例）

表9 PPD 在肺外結(jié)核診斷中的價值（例）

3 討論

結(jié)核病傳染性較強，通常主要傳染源是肺結(jié)核患者，嚴(yán)重威脅人類健康，其防治意義重大[7]。結(jié)核病的臨床癥狀與許多呼吸系統(tǒng)疾病相似，影像學(xué)特點不典型，缺乏特異性[8]。目前，臨床以AFB、PPD 檢測等作為常規(guī)檢查方法。但由于多種因素影響，導(dǎo)致結(jié)核病在檢測中具有一定漏診風(fēng)險，延誤患者的治療，甚至進(jìn)展為重癥肺結(jié)核，增加不良結(jié)局的風(fēng)險[8]。基于以上原因，臨床迫切需要一種靈敏度、特異度高的診斷方式。

本研究結(jié)果顯示，T-SPOT.TB 診斷結(jié)核病的靈敏度等指標(biāo)均高于AFB、PPD，且T-SPOT.TB 的診斷靈敏度、特異度分別為91.46%、95.65%，均處于較為理想的水平，證明T-SPOT.TB 檢測有更高的可靠性，能極大減少漏診、誤診的發(fā)生；另外，T-SPOT.TB 檢測技術(shù)的樣本采集為外周血，采集簡便，且可避免AFB 樣本采集導(dǎo)致的特異度下降，在檢測上效率更高，特異度更高[9]。宋瑞紅等[10]研究顯示，T-SPOT.TB 診斷結(jié)核病的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值分別是90.55%、72.60%、85.19%、81.54%，其中靈敏度與本研究相當(dāng)，但特異度低于本研究，其原因可能與本研究中本身假陰性患者例數(shù)較少有關(guān)。T-SPOT.TB 在結(jié)核病診斷中應(yīng)用價值高，具有較高的可靠性，原因如下。（1）AFB 采集的樣本包括痰液、支氣管肺泡灌洗液、胸腔積液、腹腔積液等，受到個體差異及排菌時間不同的影響，部分時間段采集樣本的結(jié)核分歧桿菌濃度偏低，檢出率也相應(yīng)降低，由此導(dǎo)致靈敏度不高[11]；同時，非結(jié)核分歧桿菌也可導(dǎo)致抗酸試驗變色，這導(dǎo)致假陽性增多，特異度下降。（2）PPD 使用結(jié)核分歧桿菌純蛋白衍生物抗原進(jìn)行檢測，將抗原注射到患者皮下，引發(fā)遲發(fā)性超敏反應(yīng)形成的硬結(jié)判斷有無結(jié)核分歧桿菌感染[12]，其檢測結(jié)果受到人體免疫系統(tǒng)、是否接種過卡介苗、是否接觸過結(jié)核分歧桿菌等多種因素的影響，造成假陰性、假陽性率均較高。（3）T-SPOT.TB基本不受個體差異影響，無論患者免疫系統(tǒng)狀態(tài)、排菌量、是否接種過卡介苗等都不會導(dǎo)致假陰性或假陽性。

綜上所述，T-SPOT.TB 檢測在結(jié)核病診斷中具有較高的臨床價值，能有效降低漏診、誤診風(fēng)險。