心腦血管疾病患者載脂蛋白基因多態性與血脂、載脂蛋白水平的相關性研究*

孔倩倩，王 麗，余漢忠，蔡 遷

1.中國礦業大學，江蘇 徐州 221000；2.徐州市第一人民醫院檢驗科，江蘇 徐州 221000；3.徐州市婦幼保健院，江蘇 徐州 221000

心腦血管疾病（CVD）是心血管疾病和腦血管疾病的統稱，具有發病率高、死亡率高、致殘率高等特點［1-2］，嚴重威脅人類生命健康。CVD的致病因素非常多，近年來的研究表明遺傳因素尤其是影響血脂代謝的基因［3］，與其發病密切相關。其中載脂蛋白E（ApoE） 基因可與脂質及其受體，低密度脂蛋白（LDL）、極低密度脂蛋白（VLDL）及LDL相關蛋白結合，作為配體參與受體介導的載脂蛋白清除過程，是目前發現對血脂水平影響較大的基因［4-5］。為進一步證實載脂蛋白E（ApoE）基因多態性和心腦血管疾病的關系，本研究收集樣本醫院就診的CVD患者，檢測其ApoE基因多態性、血脂水平，分析ApoE基因多態性在CVD發生發展中的作用，并分析其可能機制，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年9月—2019年8月徐州市第一人民醫院就診的500 例CVD 患者為實驗組，男性270 例，女性230例，平均年齡67.77 歲，其中198 名患者診斷為冠心病，162名患者診斷為腦梗死，140例診斷為高血壓病。所有患者均排除腫瘤、服用他汀類藥物等影響因素。選取106例健康體檢者為對照組，其中男性66 例，女性40 例， 平均年齡65.29 歲，兩組受試者年齡和性別等一般資料具有可比性（P＞0.05）。

1.2 儀器與試劑

（1）試劑：血液基因組DNA 提取試劑盒（離心柱型），購自TIANGEN 北京生物科技有限公司；人類ApoE基因檢測試劑盒購自武漢友芝友生物科技有限公司。（2）儀器：全自動熒光檢測PCR擴增儀購自杭州博日科技有限公司、全自動生化分析儀（AU5821）購自德國貝克曼庫爾特公司。

1.3 方法

（1）ApoE 基因多態性檢測：采集全血1 mL 于依地酸鈉鈣（EDTA）抗凝管，按照DNA 提取試劑盒（DP318）說明書提取全血DNA，并以此為模板，采用PCR熒光探針法進行熒光定量PCR 擴增，按照說明書進行ApoE 基因型判讀。并按照ApoE 基因型分為三組：E2 基因型組（E2/E2、E2/E3），E3基因型組（E2/E4、E3/E3），E4基因型組（E3/E4、E4/E4）。（2）血脂及載脂蛋白檢測：所有患者在采集血樣前3 d 禁食高脂肪食物，并至少空腹12 h 以上，采集晨起空腹血樣4 mL 于促凝管，4 000 rpm/min 離心10 min 分離血清，血清甘油三酯（TG），血清總膽固醇（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、LDL、載脂蛋白A（APoA）、載脂蛋白B（APoB）、脫脂轉化酶（Lpa）、ApoE等指標均采用全自動生化分析儀檢測（貝克曼庫爾特AU5821）。

1.4 統計學方法

采用SPSS 21.0 軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗。計數資料用例數和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組受試者ApoE等位基因頻率分布情況

對CVD 患者和健康體檢者采用熒光定量PCR 的方法進行ApoE 基因型檢測，發現CVD 患者E3 基因型頻率最高，占73.30%，與健康體檢者相比，其E4 基因頻率較高，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組受試者ApoE等位基因頻率分布情況 例（%）

2.2 不同ApoE等位基因之間血脂及載脂蛋白水平情況

將入組患者按照ApoE 基因型分為三組：E2 基因型組（E2/E2、E2/E3），E3基因型組（E2/E4、E3/E3），E4基因型組（E3/E4、E4/E4），比較各組血脂（血清TC、TG、HDL、LDL）以及載脂蛋白（APoA、APoB、Lpa、ApoE）水平，發現三組間TC、LDL、APoB、Lpa、ApoE水平，差異有統計學意義（P＜0.05）。將各組進行兩兩比較，發現與E2組相比較，E3組E4組TC、LDL、APoB、Lpa水平明顯升高，ApoE 水平明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.05），E3 組APoA 水平明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.05），E4組與E4組血清血脂及載脂蛋白，差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同ApoE等位基因之間血脂及載脂蛋白水平情況（±s） 分

表2 不同ApoE等位基因之間血脂及載脂蛋白水平情況（±s） 分

a表示與E4組比較，P＜0.05，b表示與E3組比較，P＜0.05。

組別E2 E3 E4 t值P值TC 4.27±1.34ab 4.62±1.20 4.75±1.13 12.58＜0.05 TG 1.53±1.75 1.53±1.35 1.81±1.85 1.95 0.38 HDL 1.25±0.37 1.19±0.31 1.20±0.33 2.15 0.34 LDL 2.10±0.77ab 2.55±0.87 2.63±0.81 24.27＜0.05 APoA 1.14±0.34a 1.07±0.31 1.07±0.35 5.06 0.08 APoB 0.79±0.23ab 0.97±0.27 0.99±0.26 35.84＜0.05 Lpa 217.11±250.31ab 254.84±239.35 297.64±294.83 8.28 0.02 ApoE 44.15±10.22ab 34.28±10.89 33.58±12.14 57.12＜0.05

2.3 不同心腦血管疾病與ApoE基因頻率及血脂水平情況

將入組患者按照疾病類型進行分組，對其ApoE 基因頻率、血脂以及載脂蛋白水平進行比較，各組間ApoE 基因頻率、血脂、載脂蛋白水平，差異無統計學意義（P＜0.05），見表3、表4。

表3 不同心腦血管疾病與ApoE基因頻率

表4 不同病例組患者血脂水平

3 討論

CVD是嚴重威脅當今人類生命健康的疾病之一，21世紀初期CVD 死亡數已占發達國家死亡總數的50%、發展中國家死亡總數的25%，成為世界大多數國家第一、二位死亡原因［6］。大量研究表明，血脂異常是CVD的重要致病因素之一，TC水平的升高、TG水平升高以及LDLc是CVD的重要危險因素［7］。ApoE 是影響血漿脂蛋白的主要成分，可與脂質及受體結合，作為配體參與受體介導的載脂蛋白清除過程，在血脂水平調節過程中發揮重要作用。

ApoE具有顯著遺傳多態性，根據第112和158位殘基的不同，分為E2、E3、E4基因型，現普遍認為，ApoE基因多態性可影響脂質代謝，并最終導致心腦血管疾病CVD的發生，研究高血脂癥患者ApoE 基因、表型頻率，對于CVD 的預防具有重要的意義。本研究對500 例CVD 患者ApoE 基因型進行檢測，ApoE E3/E3 基因型比率最高，高達50.80%，E3 基因型頻率最高，占73.30%，這與之前的報道相一致［8］，此外與健康體檢者相比，心腦血管疾病患者E4基因頻率較高，表明E4基因可能對心腦血管疾病有促進作用。為進一步分析ApoE 基因型對CVD 患者血脂的影響，將患者按照ApoE 基因型分組，研究發現E2 組比較，E3組E4組TC、LDL水平明顯升高，這可能與ApoE不同異構體與LDL 受體結合能力不同相關，由于E4 等位基因的存在能提高ApoE 與LDL 受體親和力，從而調節血脂代謝，加速CM 和VLDL 的代謝，降低LDL-C 受體數量，減少體內LDL、LDL-C 分解代謝，從而導致E4 患者LDL水平升高，而TC基本取決于LDL-C水平，使得E4組患者表現為較高的LDL、TC 水平。所以血清ApoA 可以反映HDL 水平，與HDLC 水平呈明顯正相關，而APoB 水平與LDL呈正相關，因此E4組患者還表現為ApoA、ApoB水平明顯升高。此外，本次研究還發現，血清ApoE 水平表現為E2＞E3＞E4，具有一定的相關性，然而是否由于ApoE基因多態性導致血清ApoE 水平血清差異。目前，該方面研究較少，其機制還尚不清楚，有待進一步研究。為進一步研究ApoE 在不同心血管疾病中是否具有相同的作用，本研究將患者按照疾病類型進行分組比較血脂以及ApoE基因頻率，發現均無明顯差異，說明ApoE 在冠心病、腦梗、高血壓等常見慢性心血管疾病中都具有促進疾病發生發展的作用。

綜上所述，E4 基因可升高LDL、TC 水平，促進心腦血管疾病的發生發展，ApoE基因型與ApoE水平有一定相關性，但是由于本研究中樣本數不夠大，E2 組、E4 組樣本較少，如果能增大樣本數，采用大數據分析結果，將更能有效地分析ApoE 基因多態性在心腦血管疾病中發揮的作用，以及造成血清ApoE水平差異性的機制研究。