兩種不同條件對中藥膏方制作質量的影響

吳聲振 鄔素珍 吳向維

（廣東省佛山市佛山復星禪誠醫院，廣東 佛山 528000）

中藥膏方又名煎膏劑、膏滋，是中藥飲片經水浸泡、煎煮、濃縮，加飴糖、蜂蜜等輔料收膏制成的半流體劑型[1-3]。膏方具有濃度高，作用相對穩定、持久、緩和，適用性廣，易保存，體積小，服用方便等諸多優點[4-6]，對于慢性、虛損性疾病，具有藥效持久的優勢[7-9]。隨著大眾對治未病及養生保健意識的加強，膏方被日益推廣應用。因此，膏方產品的質量提升值得進一步探索和研究。目前，傳統中藥的濃縮是在常溫常壓下進行敞開式長時間進行[10]。敞開式的濃縮模式易造成揮發性成分的流失，而且藥液長時間處于100 ℃，某些熱敏性有效成分將被破壞，并增加了無效成分的含量[11-13]。基于上述弊端，我院自主研發并獲國家專利的“并聯式中藥膏方濃縮制備系統”及“混合式真空冷卻裝置”，是通過低溫負壓技術降低冷凝器中二次蒸汽壓力，增大傳熱溫度差[14]，降低溶劑沸點，減少有效成分損失，提高藥液濃縮效率。為驗證自主研發設備的實用性，本研究以護肝利濕膏、卵巢護養膏、內異膏為代表方，從有效成分含量、成品穩定性的角度對負壓與常壓濃縮條件進行比較，探討制作中藥膏方最佳的濃縮條件。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）；BT25S型電子天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；微壓中藥煎煮機（北京東華原醫療設備有限公司）；KQ2200E型超聲清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）；電熱恒溫鼓風干燥箱（GZX-9023型，上海博迅醫療生物儀器股份有限公司）；并聯式中藥膏方濃縮制備系統（自主研發，專利號：201620659405.0）；混合式真空冷卻裝置（自主研發，專利號：201620656314.1）。

1.2 試藥 芍藥苷對照品，批號：110736- 202044；淫羊藿苷對照品，批號：110737- 202017；丹酚酸B對照品，批號：111562-201917。上述對照品均來自中國食品藥品檢定研究院；水為重蒸水，其他試劑均為色譜純。

1.3 藥材 ①護肝利濕膏：白芍、黃柏、白術、佛手、山藥等，本方由我院治療非酒精性脂肪性肝病的常用湯劑化裁而來[15]，按組方配比稱取飲片3批，每批30劑。②卵巢護養膏：仙茅、巴戟天、黃柏、淫羊藿等，本方由《婦產科學》中二仙湯化裁而來[16]，按組方配比稱取飲片3批，每批30劑。③內異膏：丹參、紅花、牛膝、續斷、莪術等，本方由我院治療子宮內膜異位癥的湯劑處方化裁而來，按組方配比稱取飲片3批，每批30劑。上述中藥飲片從廣州致信藥業股份有限公司購進，并經佛山市中藥研究會李滿聯副主任中藥師鑒定為正品。

2 方法與結果

2.1 樣品制備

2.1.1 提取液制備 按批分取護肝利濕膏、卵巢護養膏、內異膏膏方飲片，分別按照以下方法提取：①護肝利濕膏[15]：浸泡4 h，加8倍量水，煎煮2次，每次60 min。②卵巢護養膏[16]。③內異膏：浸泡4 h，加8倍量的水，煎煮3次，每次60 min。分別濾過上述提取液，得到護肝利濕膏提取液3批，每批提取液體積為32 000 mL；卵巢護養膏提取液3批，每批提取液體積為33 000 mL；內異膏提取液3批，每批提取液體積為35 000 mL。

2.1.2 濃縮液制備 分別取護肝利濕膏、卵巢護養膏、內異膏提取液各3批，平分為兩組，常壓組于常壓條件濃縮，負壓組接入自主研發的“并聯式中藥膏方濃縮制備系統”進行濃縮，兩組藥液濃縮至1 000 mL時停止加熱，分別濾過后得到3種膏方在不同條件下的濃縮液，具體批號命名見表1。

表1 護肝利濕膏、卵巢護養膏、內異膏不同條件下的濃縮液批號

2.2 不同濃縮條件對膏方制作質量的影響

2.2.1 不溶物測定 取2.1.2項所得的濃縮液濾過后的濾渣，分別加熱水200 mL，攪拌使之溶化，放置3 min后觀察結果，負壓組未發現不溶物，常壓組的卵巢護養膏濃縮液中發現焦屑等不溶物。

2.2.2 含量測定

2.2.2.1 護肝利濕膏中芍藥苷的含量測定

色譜條件：色譜柱：Amethyst C18-H（4.6 mm×250 mm，5 μm）；檢測波長：230 nm；流速：1.0 mL/min；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（每100 mL加十二烷基磺酸鈉0.1 g）（14∶86）；進樣量：10 μL。

對照品溶液制備：精密稱定芍藥苷標準品適量，加適量甲醇制成濃度為1.504 mg/mL的芍藥苷對照品溶液。

供試品溶液制備：取2.2.1項所得護肝利濕膏濃縮液（FYHG01、FYHG02、FYHG03；CYHG01、CYHG02、CYHG03），每組各取1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，取上清液，濾過，即得。

線性關系考察：取芍藥苷對照品溶液，分別加甲醇稀釋成0.0602、0.1504、0.3008、0.7520、1.504 mg/mL的溶液，注入HPLC分析，以對照品濃度與相應峰面積進行線性回歸，得芍藥苷的回歸方程Y=3452X+1492.4（r=1.0），在0.0602～1.504 mg/mL范圍內線性關系良好。

精密度試驗：精密量取同一對照品溶液，連續進樣6次，測定峰面積，計算各峰面積。結果芍藥苷的峰面積RSD為1.45%，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取供試品溶液，按色譜條件，分別于0、2、6、8、10、12、24 h進樣測定，記錄芍藥苷的峰面積，結果芍藥苷的平均峰面積RSD為0.96%，表明護肝利濕膏供試品在24 h內穩定。

重復性試驗：取同一批護肝利濕膏濃縮液（FYHG01）6份，按供試品溶液制備方法制備供試品，再按色譜條件進樣，測定芍藥苷峰面積，并計算其含量。結果芍藥苷的平均含量為14.83 mg/g，RSD為1.46%，表明方法重復性良好。

加樣回收實驗：取已知含量的護肝利濕膏濃縮液（FYHG01）6份，分別加入已知含量的對照品，按供試品溶液制備方法制備供試品，按色譜條件測定，記錄峰面積，并計算各峰面積的RSD。芍藥苷的平均加樣回收率（n=6）為100.35%，RSD為2.26%。表明樣品回收率良好，該方法準確率較高。

2.2.2.2 卵巢護養膏中淫羊藿苷的含量測定

色譜條件：色譜柱：Sepax Bio-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；檢測波長：270 nm；流速：1.0 mL/min；流動相：乙腈-水（30∶70）；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

對照品溶液制備：精密稱取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為0.1520 mg/mL的淫羊藿苷對照品溶液，搖勻，即得。

供試品溶液制備：取2.2.1項所得卵巢護養膏濃縮液（FYLC01、CYLC01），每組各取10 mL，乙酸乙酯振搖提取3次，每次30 mL，分取乙酸乙酯層，回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解，轉移至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

線性關系考察：取淫羊藿苷對照品溶液，分別加甲醇稀釋成0.0060、0.0152、0.0304、0.0760、0.1520 mg/mL的溶液，注入HPLC分析，以對照品濃度與相應峰面積進行線性回歸，得淫羊藿苷回歸方程Y=21.024X+82.594，在0.0060～0.1520 mg/mL范圍內線性關系良好。

精密度試驗：精密量取同一對照品溶液，連續進樣6次，測定峰面積，計算各峰面積。結果淫羊藿苷的峰面積RSD為1.65%，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取供試品溶液，按色譜條件，分別于0、2、6、8、10、12、24 h進樣測定，記錄淫羊藿苷的峰面積，結果淫羊藿苷的平均峰面積RSD為1.33%，表明卵巢護養膏供試品在24 h內穩定。

重復性試驗：取同一批卵巢護養膏濃縮液（FYLC01）6份，按供試品溶液制備方法制備供試品，再按色譜條件進樣，測定淫羊藿苷峰面積，并計算其含量。結果淫羊藿苷的平均含量為1.32 mg/g，RSD為1.65%，表明方法重復性良好。

加樣回收實驗：取已知含量的卵巢護養膏濃縮液（FYLC01）6份，分別加入已知含量的對照品，按供試品溶液制備方法制備供試品，按色譜條件測定，記錄峰面積，并計算各峰面積的RSD。淫羊藿苷的平均加樣回收率（n=6）為101.67%，RSD為3.31%。表明樣品回收率良好，該方法準確率較高。

2.2.2.3 內異膏中丹酚酸B的含量測定

色譜條件：色譜柱：Sepax Bio-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；檢測波長：286 nm；流速：1.0 mL/min；流動相：以乙腈為流動相A，0.1%磷酸溶液為流動相B，按表2程序進行梯度洗脫；柱溫：30 ℃，進樣量10 μL。見表2。

表2 梯度洗脫程序

供試品溶液的制備：取2.2.1項所得內異膏濃縮液（FYNY01、CYNY01），每組各取10 mL，乙酸乙酯振搖提取3次，每次30 mL，分取乙酸乙酯層，回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解，轉移至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

對照品溶液的制備：精密稱取丹酚酸B對照品適量，加甲醇制成濃度為1.0 mg/mL的丹酚酸B對照品液。

線性關系考察：取丹酚酸B對照品溶液，分別加甲醇稀釋成0.04、0.1、0.2、0.5、1.0 mg/mL的溶液，注入HPLC分析，以對照品濃度與相應峰面積進行線性回歸，得丹酚酸B的回歸方程Y=1682.1X -830.24（r=0.9999）。在0.04～1.0 mg/mL時，線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液，連續進樣6次，測定峰面積，并計算各峰面積的RSD，結果丹酚酸B峰面積RSD為1.06%，表示儀器精密度良好。

穩定性試驗：取供試品溶液，按色譜條件，分別于0、2、6、8、10、12、24 h進樣測定，記錄丹酚酸B的峰面積，結果丹酚酸B的平均峰面積RSD為1.27%，表明內異膏供試品在24 h內穩定。

重復性試驗：取同一批內異膏濃縮液（FYNY01）6份，按供試品溶液制備方法制備供試品，再按色譜條件進樣測定丹酚酸B峰面積，并計算其含量。結果丹酚酸B的平均含量為1.79 mg/g，RSD為2.12%，表明方法重復性良好。

加樣回收實驗：取已知含量的內異膏濃縮液（FYNY01）6份，分別加入已知含量的對照品，按供試品溶液制備方法制備供試品，按色譜條件測定，記錄峰面積，并計算各峰面積的RSD。丹酚酸B的平均加樣回收率（n=6）為99.78%，RSD為1.57%。表明樣品回收率良好，該方法準確率較高。

2.2.3 不同濃縮條件對膏方有效成分的影響 使用HPLC分別測定常壓和負壓濃縮后藥液中各膏方有效成分的含量，計算轉移率（F%）（F%=水提液中有效成分的量/飲片中有效成分的量×100%），轉移率越高說明膏方有效成分的損失越少，質量越高。見表3。

表3 不同濃縮方法對膏方有效成分的影響

2.3 不同濃縮條件所得膏方的穩定性比較 分別取

2.2.1 項制得的護肝利濕膏（FYHG01、FYHG02、FYHG03；CYHG01、CYHG02、CYHG03）、卵巢護養膏（FYLC01、FYLC02、FYLC03；CYLC01、CYLC02、CYLC03）、內異膏（FYNY01、FYNY02、FYNY03；CYNY01、CYNY02、CYNY03）濃縮液，經收膏后制成膏方，在常溫下存放120 d，分別于0、7、14、30、60、90、120 d觀察成品外觀，并按照非無菌產品微生物限度檢查方法[17]取樣檢查。結果表明，負壓和常壓濃縮所得膏方120 d內外觀無明顯變化，微生物限度均符合要求。見表4。

表4 不同濃縮條件所得膏方霉菌及酵母菌檢測結果

2.4 不同濃縮方法的成本比較 分別記錄2.1.2項不同膏方在不同條件下濃縮所需時間，計算濃縮時間平均值。以3種膏方的平均濃縮時間為代表，得到每份膏方（30劑/份）在不同濃縮條件下的平均耗時，并計算相應成本。結果表明，每份膏方的制作耗時負壓濃縮比常壓濃縮短238 min，以常壓和負壓濃縮設備功率均為1 000 W，電費以1元/（kW·h）計算，每份膏方使用負壓濃縮制作能節省3.97元，以我院每年膏方制作量1萬份計算，每年可節約制作時間3.93萬小時，節省電費3.97萬元，即負壓濃縮的成本約為常壓濃縮的50%。見表5。

表5 不同條件下每份膏方的制作成本

3 討論

常壓濃縮時，某些膏方因含有大量黏性成分，隨著藥液逐漸變濃，溶液傳熱變慢[18]，加熱面的熱量不能及時轉移，導致底部焦化，故濃縮過程需要經常攪拌，極其耗費人力。低溫負壓濃縮通過強化蒸發作用促進溶液傳熱[19]，避免局部過熱，使勞動力得以解放，提高了生產效率和操作安全性。

質量穩定是評價膏方臨床用藥的安全性和有效性的重要指標之一，膏方中的有效成分是其發揮臨床功效的物質基礎，也是評價膏方質量的重要依據，而長時間高溫加熱會影響有效成分的穩定性。實驗結果表明，負壓環境下，3種膏方中的有效成分芍藥苷、淫羊藿苷、丹酚酸B的轉移率均高于常壓濃縮，且負壓濃縮時間為常壓濃縮的1/2，在膏方制作中更具有優勢。

根據文獻報道[20-21]，煮沸滅菌法一般滅菌時間為30～60 min，低溫負壓濃縮技術溶液沸點較低，濃縮時間較短，為驗證膏方濃縮過程已有效滅菌，故對膏方成品進行微生物限度檢測，實驗結果證明，該技術符合滅菌要求。

成本比較表明，常壓濃縮能耗大，效率低，難以滿足日益增長的膏方制作需求。負壓濃縮能耗小、效率高，配合本院自發研制的“并聯式中藥膏方濃縮制備系統”，可兼顧大批量生產與個性膏方小批量制作，使制作成本縮減為常壓濃縮的50%，更適合應用于膏方制作。目前該膏方濃縮制備系統僅在本院安裝使用，存在一定局限性，更多優化方案需要在后續推廣使用中獲得。